褪黑素及其受體激動(dòng)劑對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：研究Mel及其受體激動(dòng)劑Tal對(duì)FFA誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗相關(guān)蛋白IRS-1及其磷酸化蛋白（PS307）和GLUT-4表達(dá)以及葡萄糖攝取能力的影響。 方法：實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分： 第一部分是細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，用經(jīng)典的“雞尾酒”法即IBMX、的塞米松和胰島素三聯(lián)培養(yǎng)誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞，并用油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞形態(tài)。 第二部分是利用FFA誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的胰島素抵抗，檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖

2、攝取能力，檢測(cè)IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白質(zhì)表達(dá)，選擇有效的時(shí)間和濃度的FFA來處理細(xì)胞。 第三部分是檢測(cè)Mel及其受體激動(dòng)劑Tal對(duì)FFA處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取能力及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。采用Western印跡分別檢測(cè)IRS-1、PS307和GLUT-4蛋白質(zhì)表達(dá)；采用液體閃爍法檢測(cè)細(xì)胞葡萄糖攝取能力。 結(jié)果：采用“雞尾酒”法誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細(xì)胞10～12天以后， 90％分化成為脂肪細(xì)

3、胞，油紅O染色可見呈圓形，脂滴很多呈典型的“戒環(huán)樣”形態(tài)。用棕櫚酸誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗，結(jié)果顯示6小時(shí)的棕櫚酸處理后，細(xì)胞的葡萄糖攝取能力明顯降低。對(duì)FFA處理的時(shí)效研究顯示6小時(shí)左右，胰島素信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白IRS-1的表達(dá)開始顯著下降，GLUT-4也下降約50％，對(duì)棕櫚酸處理的量效研究顯示，棕櫚酸在200μM左右可以促進(jìn)IRS-1的磷酸化，300μM以后的增加不顯著。采用300μM濃度處理6小時(shí)來進(jìn)行后續(xù)的研究，并在棕櫚酸處理

4、結(jié)束前1小時(shí)加入不同濃度Mel或其受體激動(dòng)劑Tal，隨著Mel濃度的增加IRS-1的表達(dá)變化不顯著，而在高劑量組（>1nM）時(shí)，PS307/IRS-1的比值是不斷降低的，低劑量組有所回升（100pM與高劑量各組相比，P<0.05）,但是都要低于FFA單獨(dú)處理組。對(duì)Mel的受體激動(dòng)劑Tal濃度效果的研究顯示其在10nM左右最佳。Mel可以提高FFA處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞GLUT-4的表達(dá)和葡萄糖攝取，且Mel/Tal與胰島素合用時(shí)效果

5、更顯著。 結(jié)論：FFA可以降低胰島素誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取能力，可能是胰島素抵抗的病因之一。FFA通過降低胰島素信號(hào)通路中非常關(guān)鍵的IRS-1的表達(dá)，升高其絲氨酸307位點(diǎn)的磷酸化從而抑制正常的酪氨酸磷酸化使胰島素信號(hào)通路受阻。并且降低其下游的調(diào)節(jié)蛋白GLUT-4的表達(dá)，減少脂肪細(xì)胞葡萄糖的攝取。Mel可以干預(yù)FFA的作用，尤其是高濃度的Mel可以升高IRS-1的表達(dá)，減少其異位的磷酸化，并可以增加細(xì)胞的葡萄糖攝取能