MicroRNA-34a對心肌細胞SH2B3表達的調控作用.pdf

1、心肌纖維化嚴重影響心臟的正常功能，在外界因素刺激下，細胞外基質中成分的異常是導致纖維化的最主要因素，而延緩或阻止纖維化的發(fā)生和進展可明顯改善心肌功能。隨著研究的不斷深入，通過調控細胞活性來影響心肌纖維化已成為治療該類疾病的主要目標。因此，了解心肌纖維化的發(fā)生機制及調節(jié)途徑顯得非常重要。當心肌細胞接受外界不良刺激后，會通過一系列步驟將信號傳導入心肌細胞內部，從而影響細胞的功能和活性。
　　SH2B3屬于SH2B接頭蛋白家族成員之一，

2、影響細胞內分子的定位，可影響許多由Janus激酶和受體酪氨酸激酶介導的信號通路活性。研究表明，SH2B3參與造血細胞的分化，并與心肌梗死、代謝綜合征、多發(fā)性硬化癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡病、類風濕性關節(jié)炎等疾病關系相當密切。在小鼠心肌梗死模型中，敲除了SH2B3表達后，其纖維化程度隨之升高，在當前的研究成果中，已提示在心肌梗死后纖維化過程中SH2B3發(fā)揮了一定的作用，但到目前為止，關于該分子在心肌纖維化過程中的表達調控機制還不清楚。microR

3、NA(miRNA)是一類含21-25個堿基的非編碼單鏈核苷酸，近年來被認為是一種新的轉錄后調節(jié)子，可通過與靶基因的3'非翻譯區(qū)(3' untranslated region，3'UTR)相互作用來調節(jié)靶基因的表達，最終影響細胞活性。該分子的作用特點是同一miRNA可對多個靶基因進行同時調控。
　　越來越多的證據(jù)表明，miRNA在心血管疾病，特別是心肌纖維化過程中發(fā)揮重要作用。最新有關研究已表明，在心肌梗死模型中miR-34a參與了

4、心肌細胞收縮功能的調控，抑制其表達可提高心肌的收縮功能。目前Flister等研究均已發(fā)現(xiàn)，miR-34a通過靶向調控Smad4、促進分泌纖維化相關膠原，使其在心肌梗死后纖維化區(qū)域中的表達顯然上調，并最終影響了心肌纖維化過程。
　　目的：
　　(1)觀察轉化生長因子-β1對miR-34a和SH2B3表達的作用;
　　(2)明確miR-34a對SH2B3的調控作用。
　　方法：
　　為了證明miR-34a可能調

5、控SH2B3的表達，本課題首先體外培養(yǎng)心肌細胞，分別在接受轉化生長因子-β1和缺氧處理后，提取總蛋白和RNA后，采用Western blot和qRT-PCR法檢測SH2B3在蛋白水平和mRNA水平的表達量變化;采用qRT-PCR法檢測接受以上刺激后，miR-34a的表達;在心肌細胞中轉染miR-34a mimics和miR-34a inhibitor后，采用Western blot和qRT-PCR法檢測SH2B3在蛋白水平和mRNA水平

6、的表達量變化;構建針對miR-34a作用位點的SH2B3熒光素酶報告基因載體，采用熒光素酶報告基因法檢測miR-34a對SH2B3基因3' UTR區(qū)活性的影響。
　　結果：
　　實驗結果表明，在轉化生長因子-β1誘導心肌細胞作用過程中，SH2B3在mRNA和蛋白水平的表達均降低;miR-34a的表達水平升高;α-SMA蛋白的表達升高。Western blot和qRT-PCR結果顯示轉染miR-34a模擬物后，SH2B3的表達

7、降低;轉染miR-34a抑制物后SH2B3的表達升高。熒光素酶報告檢測發(fā)現(xiàn)，miR-34a可通過影響SH2B33'UTR活性，調控其表達。另外，在心肌細胞接受缺氧刺激后，SH2B3的表達量隨著刺激時間的延長而降低，miR-34a的表達則升高，這種表達的相反趨勢進一步證明兩者的相互調控關系。
　　結論：
　　1.發(fā)現(xiàn)miR-34a可作用于SH2B3的3'UTR區(qū)，從而調控其在心肌細胞中的表達。
　　2.在TGF-β1及缺