MicroRNA195在高糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大中的作用機(jī)制.pdf

1、目的：研究miRNA-195在高糖誘導(dǎo)的心肌肥大中的作用及其機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用TargetScan5.1軟件預(yù)測(cè)Smad7為miRNA-195發(fā)揮作用的潛在靶點(diǎn)。構(gòu)建含有Smad7基因3'-UTR區(qū)的熒光素酶報(bào)告基因載體，利用雙熒光素酶報(bào)告基因驗(yàn)證MicroRNA195與其潛在靶基因Smad7的靶向關(guān)系。將SD乳鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行體外分離培養(yǎng)分，貼壁后將原代心肌細(xì)胞分為3組，正常對(duì)照組心肌細(xì)胞用濃度為5 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)，高

2、糖對(duì)照組心肌細(xì)胞用濃度為25 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞經(jīng)miRNA-195抑制劑轉(zhuǎn)染后用濃度為25 mmol/L葡萄糖培養(yǎng)。培養(yǎng)24、48和72 h時(shí)，于倒置相差顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并拍照計(jì)算心肌細(xì)胞表面積，采用RT-PCR法檢測(cè)心肌細(xì)胞miRNA-195和心肌肥大基因β-肌球蛋白重鏈(β-MHC) mRNA的表達(dá)，采用Western-blot法檢測(cè)心肌細(xì)胞中Smad7蛋白的表達(dá)，采用ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞培

3、養(yǎng)上清液中TGF-β1含量。通過(guò)抑制miRNA-195表達(dá)，觀察其對(duì)Smad7、β-MHC表達(dá)及心肌肥大的影響。
　　結(jié)果：高糖對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)miRNA-195表達(dá)水平均較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，培養(yǎng)48 h后高糖對(duì)照組Smad7蛋白的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)，而實(shí)驗(yàn)組Smad7蛋白表達(dá)較高糖對(duì)照組顯著改善（P＜0.05）。高糖培養(yǎng)下，Smad7表達(dá)與miRNA-195表達(dá)呈明顯的負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。

4、培養(yǎng)48 h后高糖對(duì)照組TGF-β1的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05），與相同時(shí)點(diǎn)高糖對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組TGF-β1的表達(dá)明顯下降(P＜0.05)。隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，高糖刺激使心肌細(xì)胞表面積、β-MHC mRNA表達(dá)逐漸增高，其變化趨勢(shì)與miRNA195表達(dá)情況一致。而下調(diào)miRNA-195后，可明顯抑制心肌細(xì)胞表面、β-MHC mRNA表達(dá)的增加（P＜0.05）。將miR-195和含Smad73'UTR報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染HEK293