miR-21調(diào)控內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老等生物學(xué)功能的研究.pdf

1、目的：探討 miR-21在大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞衰老過程中的生物學(xué)作用；探討 miR-21是否通過調(diào)控靶基因Hmga2而實(shí)現(xiàn)其在EPCs中生物學(xué)作用。
　　方法：1.密度梯度離心法獲取SD大鼠骨髓來源的單核細(xì)胞（BMMNCs），借助差速貼壁法和EPCs專用培養(yǎng)基定向誘導(dǎo)培養(yǎng)EPCs并培養(yǎng)14~28天，光學(xué)顯微鏡下觀察EPCs的細(xì)胞形態(tài)變化，CCK-8法分析EPCs的增殖情況、繪制生長曲線，應(yīng)用流式細(xì)胞儀、乙酰低密度脂蛋白、與荊豆凝集素吞噬

2、實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞表型，用Matrigel成管試驗(yàn)檢測成血管能力；2.miR-21的模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染P10代EPCs，檢測miR-21對EPCs增殖情況、運(yùn)動遷移能力、成血管能力的影響，用細(xì)胞衰老β半乳糖苷酶染色檢測miR-21對EPCs衰老的影響；3.探查miR-21的可能靶基因Hmga2，PCR技術(shù)檢測mRNA的表達(dá)；Western Blot檢測靶蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.密度梯度離心法獲得SD大鼠MNCs經(jīng)體外培養(yǎng)后，表達(dá)

3、相應(yīng)的內(nèi)皮細(xì)胞特異抗原，包括CD133、CD34以及VEGFR-2，能夠吞噬Dil-acLDL與UEA-1結(jié)合，具有增殖和成血管能力，細(xì)胞純度較高；2.使用miR-21模擬物和抑制物轉(zhuǎn)染EPCs48小時(shí)后，證實(shí)miR-21的抑制物能夠促進(jìn)EPCs的增殖能力（p<0.05）、遷移能力增強(qiáng)（p<0.05）、成血管能力（p<0.05），細(xì)胞衰老β半乳糖苷酶染色證實(shí) miR-21的抑制物能夠降低EPCs衰老進(jìn)程；3.miR-21表達(dá)上調(diào)后EPC