內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白57(ERp57)調(diào)節(jié)大鼠精卵融合過(guò)程的研究.pdf

1、哺乳類(lèi)動(dòng)物卵母細(xì)胞成熟是卵泡發(fā)生過(guò)程中的重要步驟，通常指卵母細(xì)胞恢復(fù)減數(shù)分裂以及進(jìn)一步發(fā)育到第二次減數(shù)分裂的過(guò)程。在此過(guò)程中，卵細(xì)胞內(nèi)某些蛋白的表達(dá)與分布呈現(xiàn)時(shí)空特異性，在卵泡發(fā)生、受精和胚胎植入等方面發(fā)揮著重要的作用。在前期研究中，我們首次發(fā)現(xiàn)了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白57（endoplasmic reticulum protein 57，ERp57）在大鼠卵母細(xì)胞中表達(dá)，且其含量隨著卵母細(xì)胞的成熟而增高。ERp57屬于蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(prote

2、in disulfide isomerase，PDI)家族成員的一員，近期有文獻(xiàn)報(bào)道該蛋白也存在于小鼠精子膜上，可能參與精卵的融合過(guò)程但與小鼠卵細(xì)胞無(wú)關(guān)，因此，我們?cè)O(shè)想，ERp57是否為大鼠精子和卵細(xì)胞共同擁有？如成立的話，大鼠精子和卵細(xì)胞是否又同時(shí)參與了精卵的融合過(guò)程？
　　 根據(jù)上述設(shè)想，我們選用SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，首先在原核生物中成功克隆表達(dá)了大鼠重組ERp57，并經(jīng)純化后免疫家兔制備出相應(yīng)抗重組ERp57的多克隆抗體。

3、其次，運(yùn)用商品化的ERp57抗體和自制的抗rERp57抗體,通過(guò)間接免疫熒光組織化學(xué)及蛋白免疫印跡技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，大鼠成熟精子和卵細(xì)胞都存在ERp57蛋白。ERp57主要定位于附睪尾部精子的頂體部位、頂體反應(yīng)后定位于精子的赤道區(qū)，而卵母細(xì)胞則定位在細(xì)胞表面。第三，運(yùn)用自制的抗rERp57抗體檢測(cè)ERp57對(duì)精子穿卵實(shí)驗(yàn)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：該多克隆抗體能夠顯著抑制大鼠去透明帶卵細(xì)胞的受精率（Fertilization Rate，F(xiàn)R）和受精指