2011-2012年我國部分地區(qū)PRRSV動(dòng)態(tài)調(diào)查及遺傳演化分析.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)最早于1987年發(fā)現(xiàn)于美國南部，該病的主要癥狀是妊娠母豬的繁殖障礙和仔豬的呼吸系統(tǒng)疾病，俗稱“藍(lán)耳病”。引起該病的病原是豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and RespiratorySyndrome virus，PRRSV)，PRRSV屬于動(dòng)脈炎病毒科，為有囊膜的單股正鏈RNA病毒，

2、具有廣泛的變異性和毒株多樣性。
　　 本研究對(duì)2011年遼寧等十二個(gè)省區(qū)119個(gè)定點(diǎn)監(jiān)測屠宰場1707份組織病料，164個(gè)疑似發(fā)病場1255份組織病料，以及2012年遼寧等十二個(gè)省區(qū)105個(gè)定點(diǎn)監(jiān)測屠宰場1485份組織樣本，152個(gè)疑似發(fā)病場588份組織病料，進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，2011年屠宰場和疑似發(fā)病場的陽性率分別為16.75％，42.80％;2012年屠宰場和疑似發(fā)病場的陽性率分別為15.26％，21.09％。通過對(duì)結(jié)果的

3、分析和比較，發(fā)現(xiàn)2011-2012年間定點(diǎn)監(jiān)測屠宰場和疑似發(fā)病場的陽性率均有下降，疑似發(fā)病場陽性率下降幅度較大。
　　 應(yīng)用Marc-145細(xì)胞對(duì)檢測呈陽性的病料進(jìn)行病毒分離，根據(jù)GenBank收錄的國內(nèi)外PRRSV參考毒株序列，運(yùn)用Primer Premier version5.0軟件設(shè)計(jì)擴(kuò)增NSP2基因高變區(qū)序列引物(T１、T2)和ORF5基因全序列引物(P1、P2)，用RT-PCR方法分別進(jìn)行NSP2基因高變區(qū)片段和ORF

4、5基因全序列擴(kuò)增，將擴(kuò)增出的目的片段與pGEM-T easy載體進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化，獲得包含目的片段為420 bp和603 bp的重組質(zhì)粒，并通過菌液PCR鑒定后，送去測序。結(jié)果表明，共獲得PRRSV的NSP2高變區(qū)基因序列57個(gè)，ORF5基因序列59個(gè)，擴(kuò)增的NSP2基因核苷酸序列同源性為89.6％～100％，擴(kuò)增的ORF5基因核苷酸序列同源性為90.5～100％;擴(kuò)增的ORF5基因推導(dǎo)編碼氨基酸序列的同源性為82.1～99.5％。通過與經(jīng)

5、典毒株JXA1、CH-１a、VR-2332等序列對(duì)比并構(gòu)建基因遺傳進(jìn)化樹，發(fā)現(xiàn)所獲得的毒株均為美洲型毒株。
　　 運(yùn)用DNAstar軟件包中的MegAlign軟件對(duì)所獲得的基因序列進(jìn)行比較分析，并且同國內(nèi)已發(fā)表CH-１a、HB-１(sh)2002、JXA１等毒株以及國外已發(fā)表的標(biāo)準(zhǔn)株VR-2332分別進(jìn)行核苷酸及氨基酸變異性分析。結(jié)果顯示，NSP2基因的核苷酸變異主要表現(xiàn)為不連續(xù)的90個(gè)核苷酸的缺失;ORF5基因推導(dǎo)氨基酸序列變