不同化學(xué)基團(tuán)對(duì)卵巢癌SkoV-3細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本研究將不同化學(xué)基團(tuán)(-CH3、-NH2、-OH、-COOH、-SH)接枝于基片上，構(gòu)成帶有不同單一化學(xué)基團(tuán)的自組裝單分子膜(SAMs)，構(gòu)建含有不同化學(xué)基團(tuán)的細(xì)胞微環(huán)境，研究微環(huán)境中不同化學(xué)基團(tuán)對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)特征及細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響，闡明微環(huán)境中化學(xué)基團(tuán)在卵巢癌發(fā)生和發(fā)展中的作用及機(jī)制，為卵巢癌的治療探索一條新途徑。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞Skov-3，與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)（-OH、-CO

2、OH、-NH2、-SH、-CH3）的自組裝單分子膜(self-assembled monolayers，SAMs)共培養(yǎng)。
　　2.通過(guò)接觸角實(shí)驗(yàn)反應(yīng)不同化學(xué)基團(tuán)的親疏水性。
　　3.掃描電鏡(Scanning Electron Microscope，SEM)觀察與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞形態(tài)。
　　4.DAPI染色法觀察與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞在60min的早期粘附情

3、況。
　　5.細(xì)胞骨架染色觀察與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞肌動(dòng)蛋白粘著斑的變化。
　　6.SKOV-3細(xì)胞與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)5天，MTT法檢測(cè)其細(xì)胞增殖率。
　　7.檢測(cè)不同化學(xué)基團(tuán)的細(xì)胞毒性:Calcein/PI染色觀察與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3的死活細(xì)胞數(shù)目;LDH檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中LDH的酶活性，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞毒性
　　8.流式細(xì)胞儀檢測(cè)與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培

4、養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞凋亡。
　　9.流式細(xì)胞儀檢測(cè)與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞周期。
　　10.Transwell小室檢測(cè)與攜帶不同的化學(xué)基團(tuán)共培養(yǎng)的卵巢癌SKOV-3細(xì)胞遷移能力。
　　11.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)與細(xì)胞轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因E-cadherin和β-catenin的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.接觸角實(shí)驗(yàn)表明-OH為極親水性基團(tuán)，-COOH和-NH2為

5、親水性基團(tuán)，-CH3為極疏水性基團(tuán)。
　　2.掃描電鏡顯示在-CH3表面Skov-3細(xì)胞鋪展?fàn)顟B(tài)差，呈球形;相對(duì)于其他基團(tuán)，-NH2表面細(xì)胞呈多邊形，鋪展面積大，細(xì)胞核增大，細(xì)胞間相互連接。
　　3.-COOH、-NH2基團(tuán)表面的SKOV-3的DAPI細(xì)胞染色數(shù)目均明顯多于對(duì)照組（P＜0.05)。
　　4.細(xì)胞骨架染色顯示-CH3干預(yù)后的Skov-3細(xì)胞形態(tài)及邊界不清，膜周染色變淡，細(xì)胞核區(qū)模糊;而-COOH和-NH2

6、表面上的細(xì)胞呈多邊形。
　　5.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明-CH3表面卵巢癌SKOV-3細(xì)胞增殖明顯受到抑制(P＜0.01)，NH2可促進(jìn)細(xì)胞增殖。
　　6.Calcein/PI染色及LDH實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示:-SH、-CH3對(duì)卵巢癌Skov-3具有細(xì)胞毒性;
　　7.-CH3有促進(jìn)Skov-3細(xì)胞凋亡及死亡的作用（P＜0.05）。
　　8.與-OH和-CH3共培養(yǎng)的SKOV-3細(xì)胞在有絲分裂相(G2/M)的百分比分別是明顯少

7、于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　9.與-CH3共培養(yǎng)的Skov-3細(xì)遷移數(shù)明顯低于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　10.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:-CH3明顯增加E-cadherin、β-catenin基因表達(dá)，而在-NH2組E-cadherin、β-catenin基因表達(dá)均明顯下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.不同化學(xué)基團(tuán)可影響卵巢癌Skov-3細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞粘附:親水性基團(tuán)-NH2表面，卵巢癌Skov-3細(xì)胞生長(zhǎng)狀

8、態(tài)佳，細(xì)胞粘附數(shù)量多;-CH3、-SH、-OH表面細(xì)胞形態(tài)差，對(duì)細(xì)胞粘附無(wú)明顯影響。
　　2.不同化學(xué)基團(tuán)可影響卵巢癌Skov-3細(xì)胞的增殖、細(xì)胞毒性、細(xì)胞周期及凋亡:疏水性基團(tuán)-CH3可抑制肌動(dòng)蛋白的形成，抑制細(xì)胞的有絲分裂，使卵巢癌Skov-3細(xì)胞增殖能力明顯下降，且具有細(xì)胞毒性，促進(jìn)細(xì)胞凋亡及死亡;-NH2、-COOH不具有細(xì)胞毒性;-NH2促進(jìn)細(xì)胞增殖。
　　3.不同化學(xué)基團(tuán)可影響卵巢癌Skov-3細(xì)胞的遷移:-OH

9、、-CH3抑制卵巢癌Skov-3細(xì)胞的遷移能力，-NH2促進(jìn)細(xì)胞遷移。
　　4.不同化學(xué)基團(tuán)通過(guò)EMT過(guò)程影響卵巢癌Skov-3細(xì)胞生物學(xué)行為:-NH2使E-cadherin、β-catenin基因表達(dá)明顯下調(diào)，促進(jìn)Skov-3的發(fā)生發(fā)展。而-CH3組E-cadherin、β-catenin基因的表達(dá)明顯上調(diào)，CH3可能通過(guò)影響上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化而抑制卵巢癌細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移。
　　本實(shí)驗(yàn)研究提示了-CH3不利于卵巢癌S