Sirt3對糖尿病腎小管氧化損傷的影響及分子機制的研究.pdf

1、第一部分：Sirt3在糖尿病大鼠腎組織及高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)
　　目的：
　　國際糖尿病聯(lián)盟發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，截至到2013年，全球范圍內(nèi)的糖尿病患者已經(jīng)達(dá)到3.82億，預(yù)計到2035年糖尿病患者將高達(dá)4.71億。2013年末，已有510萬人死于糖尿病，用于治療糖尿病的醫(yī)療支出高達(dá)5480億美元，而近幾年糖尿病的發(fā)病率并沒有明顯下降的趨勢，糖尿病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的公共衛(wèi)生問題之一，它給整個人類及社會帶來了沉重的

2、負(fù)擔(dān)。糖尿病腎病是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥，并且是引起終末期腎疾?。╡nd-stage renal disease，ESRD）的主要原因之一。據(jù)報道，40％—50%的1型糖尿病患者伴有腎臟損傷，在2型糖尿病患者中這一數(shù)字達(dá)到了30%。因此預(yù)防糖尿病腎病的發(fā)生，闡明糖尿病腎病的發(fā)病機制，尋找治療糖尿病腎病的有效治療方法已經(jīng)成為全人類面臨的重大課題。
　　糖尿病腎病的發(fā)病機制非常復(fù)雜，高糖、炎癥、缺氧等細(xì)胞外刺激導(dǎo)致的糖代謝異常、腎

3、臟血流動力學(xué)改變、氧化應(yīng)激、細(xì)胞因子的作用、線粒體功能失調(diào)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等病理過程都參與了糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展。糖尿病腎病的病理特點包括腎小球硬化、腎小管間質(zhì)纖維化、腎小管萎縮等，同腎小球一樣，腎小管在糖尿病腎病的發(fā)病過程中發(fā)揮著非常重要的作用，腎小管形態(tài)和功能的改變加速了糖尿病早期蛋白尿的發(fā)生。線粒體是細(xì)胞呼吸和產(chǎn)能的主要場所，它在調(diào)節(jié)細(xì)胞的生存?代謝平衡及死亡方面扮演著非常重要的角色，近些年的研究發(fā)現(xiàn)，線粒體結(jié)構(gòu)、功能損傷導(dǎo)致的活性

4、氧（reactive oxygen species，ROS）過量產(chǎn)生在糖尿病腎病的發(fā)病過程中發(fā)揮著起始與關(guān)鍵性作用。過量的ROS可激活細(xì)胞內(nèi)多條信號通路，觸發(fā)氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、纖維化、炎癥等反應(yīng)，加重糖尿病的腎臟損傷。因此，認(rèn)識線粒體ROS的產(chǎn)生和清除機制，尋找能夠減輕線粒體氧化應(yīng)激的物質(zhì)對認(rèn)識和治療糖尿病腎病具有重要意義。
　　Sirt3是沉默信息調(diào)節(jié)因子2（silent information regulator2，Sir2

5、）的蛋白同源家族Sirtuins中的一員，它主要定位于細(xì)胞中的線粒體，是線粒體內(nèi)主要的蛋白去乙?；?，Sirt3通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵蛋白的乙酰化狀態(tài)與活性來維持線粒體的正常生理功能，研究表明Sirt3參與線粒體呼吸鏈反應(yīng)、三羧酸循環(huán)、脂肪酸的β氧化、抗氧化通路等多種反應(yīng)的調(diào)控，它對維持線粒體內(nèi)氧化狀態(tài)的平衡具有重要作用。同樣，Sirt3在調(diào)節(jié)細(xì)胞能量代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等方面也發(fā)揮著重要作用，它可以對抗多種因氧化應(yīng)激負(fù)荷引起的疾病，如：心肌

6、肥大、衰老、腫瘤、心力衰竭、神經(jīng)退行性疾病、急性腎損傷等等。基于Sirt3對線粒體結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)作用，我們推測線粒體Sirt3在糖尿病腎病的發(fā)病過程中同樣發(fā)揮著重要作用，而目前，關(guān)于Sirt3與糖尿病腎病之間的研究又非常有限，本部分研究的主要目的是觀察Sirt3在糖尿病大鼠腎組織及高糖培養(yǎng)條件下腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)、分布及改變，初步研究Sirt3與糖尿病腎臟損傷之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.動物模型的制備及動物標(biāo)本的收

7、集：將購買自河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心的40只清潔級健康雄性SD大鼠隨機分為兩組：一組為對照組（normal control group，NC），一組為糖尿病模型組（diabetes mellitus group，DM），每組20只。兩組動物均禁食12小時，DM組大鼠腹腔單次注射1%鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ，65 mg/kg），NC組大鼠腹腔注射相應(yīng)體積的0.1mol/L的無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。注射后72小時

8、，尾靜脈采血檢測大鼠血糖，單次檢測血糖水平大于等于16.7 mmol/L且尿糖陽性者（+++~++++）即為糖尿病模型造模成功。NC組和 DM組的大鼠隨機分為NC8周、NC12周、DM8周、DM12周四組，每組10只。于造模成功后的第8周、12周處死相應(yīng)組別的大鼠。處死前禁食6~8小時，10%水合氯醛麻醉并稱重，股動脈取血用于生化指標(biāo)的檢測：血糖（Blood glucose，BG）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BU

9、N）、血清肌酐（Serum creatinine，Scr）；迅速剝離腎臟，用生理鹽水將血液沖洗干凈，切取部分腎組織置于4%多聚甲醛溶液中，用于H.E、PAS染色及免疫組化染色；切取部分腎皮質(zhì)經(jīng)液氮速凍處理后凍存于-80℃冰箱，用于提取腎組織蛋白及RNA，并運用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3的蛋白及mRNA表達(dá)。
　　2.細(xì)胞培養(yǎng)及標(biāo)本收集：永生化人腎小管上皮細(xì)胞（human kidney2，HK

10、-2）購買自美國模式培養(yǎng)物集存庫，細(xì)胞培養(yǎng)液為含有10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，并置于5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，兩天進(jìn)行一次換液，待細(xì)胞生長至80%左右時進(jìn)行傳代。實驗組HK-2細(xì)胞經(jīng)同步化處理后，分別給予正常糖濃度培養(yǎng)基（normal control group，5.5 mmol/L D-glucose，NG），高滲培養(yǎng)基（mannital control group，5.5 m

11、mol/L glucose+24.5 mmol/L mannitol，M），高糖培養(yǎng)基（high glucose，30 mmol/L D-glucose，HG）6小時、12小時、24小時、48小時、72小時，并于相應(yīng)的時間收取細(xì)胞用于提取細(xì)胞蛋白及RNA，并運用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3的蛋白及mRNA表達(dá)，細(xì)胞免疫熒光染色法檢測Sirt3在HK-2細(xì)胞的分布及表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　

12、1.H.E和PAS實驗結(jié)果顯示，正常對照組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)未見明顯改變，12周DM組大鼠腎組織可見腎小球體積增大，系膜基質(zhì)增多，腎小管代償性肥大；
　　2.與正常對照組大鼠相比，8周和12周DM大鼠的血糖、尿素氮、肌酐值均明顯增高（P<0.01）；
　　3.與正常對照組大鼠相比，12周DM大鼠腎臟SOD2的蛋白表達(dá)明顯下降，Bax/Bcl-2的比值顯著升高（P<0.01）；
　　4.與正常對照組大鼠相比，8周糖尿病大鼠

13、腎臟Sirt3的蛋白和mRNA表達(dá)顯著升高，12周糖尿病大鼠腎臟Sirt3的蛋白和mRNA表達(dá)顯著下降（P<0.01）。大鼠腎臟免疫組化染色結(jié)果顯示，與對照組相比，12周糖尿病大鼠腎臟Sirt3的表達(dá)明顯下降，且Sirt3主要分布于遠(yuǎn)曲腎小管細(xì)胞，腎小球和腎間質(zhì)未見明顯的表達(dá)；
　　5.在HK-2細(xì)胞， Sirt3的蛋白和mRNA表達(dá)于高糖刺激12h時顯著增高，當(dāng)高糖刺激達(dá)到48h時，Sirt3的蛋白和mRNA表達(dá)顯著降低（P<0

14、.01），高糖對Sirt3的改變呈時間依賴性。Sirt3主要分布于細(xì)胞質(zhì)，少量存在于細(xì)胞核。
　　第二部分：Sirt3對高糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞氧化損傷的影響及分子機制
　　目的：
　　Sirt3是一種核DNA編碼的NAD+依賴的去乙酰化酶，它是Sirtuins家族中的一員。作為線粒體內(nèi)主要的去乙?；?，Sirt3調(diào)控線粒體內(nèi)多種蛋白的乙?；脚c活性，影響著線粒體內(nèi)的多種生物學(xué)作用，如呼吸鏈反應(yīng)?三羧酸循環(huán)?脂肪酸的

15、β氧化、抗氧化通路等，進(jìn)而影響了細(xì)胞的代謝反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及細(xì)胞凋亡等。Sirt3可調(diào)控線粒體電子轉(zhuǎn)移鏈中復(fù)合體Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活性，從而影響線粒體ROS和ATP的產(chǎn)生。Sirt3通過調(diào)控細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶SOD2的表達(dá)和活性，與三羧酸循環(huán)中的異檸檬酸脫氫酶（isocitrate dehydrogenase2，IDH2）相互作用等方式，加快ROS的清除，降低ROS的毒性作用。Sirt3不僅可以影響線粒體的功能還對線粒體的結(jié)構(gòu)具有調(diào)控作用。Sir

16、t3可調(diào)節(jié)線粒體動力學(xué)相關(guān)蛋白—動力相關(guān)蛋白1（dynamin related protein1，Drp1）、視神經(jīng)萎縮蛋白1（optic atrophy1，Opa1）的乙?；胶突钚裕绊懢€粒體的動力學(xué)穩(wěn)態(tài)。在心肌細(xì)胞內(nèi)，Sirt3可去乙?；H環(huán)素（cyclophilin D，CypD）并阻止線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mitochondrial permeablity transition pore，mPTP）的開放，保持線粒體的內(nèi)穩(wěn)態(tài)，

17、抑制了細(xì)胞的凋亡。近來，研究發(fā)現(xiàn)Sirt3還可去乙酰并激活糖原合成酶激酶-3β（Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β），阻斷TGF-β信號通路，抑制組織纖維化的發(fā)生。Sirt3可通過其抗氧化應(yīng)激、抗凋亡等特性抑制多種疾病的發(fā)生與發(fā)展。
　　第一部分實驗提示我們，Sirt3很可能參與了糖尿病腎病的發(fā)病，在本部分的實驗中，我們將運用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)，在體外培養(yǎng)的人腎小管上皮細(xì)胞中過表達(dá)Sirt3，觀察它對高

18、糖環(huán)境下腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激及凋亡的影響，并進(jìn)一步探索可能的分子機制。
　　方法：
　　1.檢測高糖對HK-2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及Akt/FoxO信號通路的影響：將正常培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞經(jīng)同步化處理后，分別給予正常糖濃度培養(yǎng)基（normal control group，5.5 mmol/L D-glucose，NG），高糖培養(yǎng)基（high glucose，30 mmol/L D-glucose，HG）6小時、12小時、24小

19、時、48小時、72小時，并于相應(yīng)的時間收取細(xì)胞用于提取細(xì)胞蛋白及RNA，并運用Western blot檢測Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、FoxO1、p-FoxO1、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白表達(dá)。
　　2.轉(zhuǎn)染質(zhì)粒，在HK-2細(xì)胞過表達(dá)Sirt3：運用不同比例的FuGene HD轉(zhuǎn)染試劑與Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HK-2細(xì)胞找出轉(zhuǎn)染的最佳條件。運用最佳轉(zhuǎn)染條件向HK-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染Si

20、rt3質(zhì)粒，并運用Western blot和Real-time PCR檢測 Flag的蛋白及Sirt3的mRNA表達(dá)，驗證轉(zhuǎn)染是否成功。
　　3.為檢測過表達(dá)Sirt3對細(xì)胞生物學(xué)作用和信號通路的影響，將正常條件培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為4組：空載質(zhì)粒pCMV-vector轉(zhuǎn)染對照組（control）、pCMV-Sirt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（Sirt3）、高糖+空載質(zhì)粒pCMV-vector對照組（HG+control）、高糖+pCMV-Si

21、rt3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組（HG+Sirt3）。所有高糖刺激的組別應(yīng)使用高糖培養(yǎng)基刺激48h。刺激完成后，收集細(xì)胞的總蛋白，運用Western blot檢測SOD2、catalase、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Bim、FasL、Akt、p-Akt、FoxO1、p-FoxO1、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白；運用MitoSOX進(jìn)行細(xì)胞染色、電子顯微鏡攝像技術(shù)觀察線粒體內(nèi)ROS水平；運用細(xì)胞流式實驗技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)R

22、OS的水平；運用TUNEL法檢測細(xì)胞內(nèi)的凋亡水平；分別提取細(xì)胞的核蛋白與質(zhì)蛋白，運用Western blot檢測細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)FoxO1和FoxO3a的蛋白表達(dá)，運用細(xì)胞免疫熒光檢測FoxO1和FoxO3a在細(xì)胞的表達(dá)和分布。
　　4.為檢測抗氧化劑與細(xì)胞凋亡及Akt/FoxO信號通路之間的關(guān)系，將細(xì)胞分為5組：正常糖對照組（NG，5.5 mmol/L D-glucose），滲透壓對照組（M，5.5 mmol/L D-gluco

23、se+24.5 mmol/L mannitol），高糖組（HG，30 mmol/L D-glucose）、NAC對照組（N，5 mmol/L NAC），高糖+NAC組（HG+N，30 mmol/L D-glucose+5 mmol/L NAC）。提取細(xì)胞總蛋白，運用Western blot檢測Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、FoxO1、p-FoxO1、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白；細(xì)胞

24、流式實驗技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平。
　　結(jié)果：
　　1.HK-2細(xì)胞以Fugene HD4μl和pCMV6-Sirt32μg為比例混合轉(zhuǎn)染時可取得最佳的轉(zhuǎn)染效率；
　　2.Western blot結(jié)果顯示，與control組相比，高糖干預(yù)48 h時，SOD2和catalase在HK-2細(xì)胞的蛋白表達(dá)量顯著下降，Sirt3過表達(dá)可以減弱高糖對SOD2和catalase的抑制作用，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。Mit

25、oSOX染色結(jié)果顯示，與control組相比，Sirt3過表達(dá)降低了高糖刺激導(dǎo)致的線粒體ROS聚集，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。細(xì)胞流式實驗表明，與control組相比，高糖組細(xì)胞內(nèi)的ROS增加了3倍，而Sirt3的過表達(dá)和抗氧化劑NAC明顯的減弱了高糖對細(xì)胞內(nèi)ROS的聚集作用，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；
　　3.在HK-2細(xì)胞中，與NG組相比，高糖刺激48h時，Bax與Bcl-2的比值以及Cleaved caspa

26、se-3的蛋白表達(dá)顯著增高。與HG組相比，在HG+Sirt3組，Bax/Bcl-2的比值及Cleaved caspase-3、Bim、FasL的表達(dá)顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。TUNEL細(xì)胞染色實驗說明Sirt3過表達(dá)顯著降低了高糖導(dǎo)致的HK-2細(xì)胞凋亡；
　　4.Western blot結(jié)果顯示，與NG組相比，p-Akt（Ser473）、p-FoxO1（Ser256）和p-FoxO3a（Ser253）的表達(dá)在高糖

27、刺激48h后明顯降低（P<0.01）。與HG+ control組相比，Sirt3過表達(dá)可以顯著增高p-Akt、p-FoxO1和p-FoxO3a的蛋白表達(dá)（P<0.05）。與HG+control組相比，Sirt3過表達(dá)可顯著降低細(xì)胞核內(nèi)FoxO1和FoxO3a的表達(dá)（P<0.01）。細(xì)胞免疫熒光實驗說明，與HG+control組相比，HG+Sirt3組FoxO1和FoxO3a在細(xì)胞核的表達(dá)顯著降低；
　　5.Western blot

28、結(jié)果顯示，與HG組相比，NAC可以顯著降低Bax/Bcl-2的比值和Cleaved caspase-3的蛋白表達(dá)，并顯著增加Akt、FoxO1和FoxO3a的磷酸化水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　第三部分：山奈酚對高糖刺激下腎小管上皮細(xì)胞的保護(hù)作用及其機制
　　目的：
　　山奈酚（3，4'，5，7-四羥基黃酮）是一種廣泛存在于植物中的多酚類非甾體成分，它是一種天然存在的植物雌激素，具有抗氧化應(yīng)激、抗凋亡、

29、抗炎等生物學(xué)作用。山奈酚廣泛存在于茶、花椰菜、豆類、番茄、草莓、葡萄等多種蔬菜與水果中，另外，它也存在于一些傳統(tǒng)中醫(yī)藥植物中，如銀杏、辣木等。近年的研究發(fā)現(xiàn)，山奈酚對氧化應(yīng)激相關(guān)疾病具有保護(hù)和治療作用，如：心血管疾病、糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、肥胖等。山奈酚的生物學(xué)作用受到了廣泛關(guān)注，但是關(guān)于山奈酚與糖尿病腎病之間關(guān)系的研究還非常少，我們推測山奈酚對糖尿病腎病的發(fā)生與發(fā)展有保護(hù)作用，并將在本課題中初步檢測山奈酚對高糖刺激下腎小管上皮細(xì)胞氧化應(yīng)

30、激和凋亡的影響。目前，山奈酚發(fā)揮生物學(xué)作用的分子機制也并不是很清楚，有研究報道山奈酚可以增加Sirt3的表達(dá)，本部分研究檢測了山奈酚與Sirt3表達(dá)之間的關(guān)系，并對山奈酚發(fā)揮生物學(xué)作用的可能分子機制做了初步探討。
　　方法：
　　1.為尋找山奈酚對HK-2細(xì)胞的安全、有效濃度，運用MTS實驗檢測在正常糖濃度和高糖濃度下，不同濃度山奈酚（0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L

31、、15μmol/L、20μmol/L、50μmol/L）對HK-2細(xì)胞的活力影響。
　　2.將正常條件下培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞分為5組：正常糖對照組（NG，5.5 mmol/L D-glucose），滲透壓對照組（M，5.5 mmol/L D-glucose+24.5 mmol/L mannitol），高糖組（HG，30 mmol/L D-glucose）、山奈酚對照組（KMP，10μmol/L kaempferol）、高糖+KMP組

32、（HG+KMP，30 mmol/L D-glucose+10μmol/L kaempferol）。收集細(xì)胞總蛋白和RNA，運用Western blot和Real-time PCR檢測Sirt3、SOD2、catalase的蛋白和mRNA表達(dá)；運用Western blot方法檢測細(xì)胞內(nèi)Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Akt、p-Akt、FoxO3a、p-FoxO3a的蛋白表達(dá)；運用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡；運用細(xì)胞

33、流式實驗技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的水平；運用SOD酶活性檢測試劑盒檢測HK-2細(xì)胞SOD的活性。
　　結(jié)果：
　　1.MTS結(jié)果顯示，山奈酚的工作濃度為0.01、0.1、1、5、10、15、20μmol/L時，對HK-2細(xì)胞的活性沒有明顯的影響。當(dāng)山奈酚的工作濃度為50μmol/L時，它會對HK-2細(xì)胞的活性產(chǎn)生明顯的抑制作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。與NG組相比，HG組HK-2細(xì)胞的活性顯著降低。與HG組相比，當(dāng)10

34、μmol/L的山奈酚與高糖共同作用于HK-2細(xì)胞時，HK-2細(xì)胞的活性明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。綜合以上的實驗結(jié)果，我們選用10μmol/L的山奈酚作為后續(xù)實驗的使用濃度；
　　2.Western blot結(jié)果顯示，與NG組比，高糖顯著降低了抗氧化蛋白SOD2和catalase的蛋白和mRNA表達(dá)（P<0.05）。與HG組相比，在HG+KMP組，SOD2和catalase的蛋白和mRNA表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)

35、意義（P<0.01）。SOD活性測試實驗表明，與HG組相比，10μM山奈酚可以顯著增加SOD的活性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。細(xì)胞流式實驗表明，與高糖組相比，山奈酚可以顯著降低HK-2細(xì)胞中的ROS水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；
　　3.Western blot結(jié)果顯示，在HK-2細(xì)胞，與NG組相比，高糖顯著增加了Bax/Bcl-2的比值及Cleaved caspase-3的表達(dá)。而在KMP+ HG組，山奈酚顯著

36、抑制了高糖對Bax/Bcl-2及Cleaved caspase-3的增加作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。TUNEL實驗結(jié)果表明，山奈酚可以顯著降低高糖環(huán)境下HK-2細(xì)胞的凋亡；
　　4.Western blot和Real-time PCR的實驗結(jié)果顯示，在HK-2細(xì)胞，與HG組相比，山奈酚可以顯著抑制高糖對Sirt3的降低作用，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。HK-2細(xì)胞的免疫熒光染色結(jié)果表明，與高糖組相比，山奈酚可以顯

37、著增加Sirt3在HK-2細(xì)胞的表達(dá)；
　　5.Western blot的結(jié)果顯示，在HK-2細(xì)胞，與NG組相比，高糖顯著降低了Akt和FoxO3a的磷酸化水平。與HG組相比，在HG+KMP組，山奈酚顯著增加了p-Akt/Akt和p-FoxO3a/FoxO3a的比值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.在糖尿病大鼠腎組織及高糖培養(yǎng)的HK-2細(xì)胞中Sirt3的表達(dá)下降，且與SOD2、Bax/Bcl-2