蟲草制劑對糖尿病小鼠腎小管上皮間質(zhì)化的拮抗作用及機(jī)制研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　糖尿病腎?。―iabeticnephropathy，DN）是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥，其以進(jìn)行性腎臟纖維化為特征，并導(dǎo)致腎功能進(jìn)行性減退，最后進(jìn)展為終末期腎?。‥SRD），已成為致死性腎病的主要原因之一，對人類健康構(gòu)成重大威脅。腎小管上皮間質(zhì)化（Epithelialmesenchymaltransition，EMT）在促進(jìn)糖尿病時腎臟間質(zhì)纖維化中發(fā)揮重要的作用，是糖尿病腎病發(fā)生腎間質(zhì)纖維化的關(guān)鍵因素：在EM

2、T過程中，細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellularmatrix，ECM）的產(chǎn)生過多和降解失衡是DN發(fā)生的重要機(jī)制，至DN終末期腎組織將出現(xiàn)廣泛腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化的病理改變。
　　絲裂原活化蛋白激酶38（mitogen-activatedproteinkinases，p38MAPK）屬于胞內(nèi)一類重要的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在紫外光輻射、滲透壓變化、各種生長因子或炎癥/細(xì)胞因子等的刺激下，其激活并介導(dǎo)細(xì)胞的生物學(xué)反應(yīng)，病理條

3、件下該通路的異?？蓪?dǎo)致相應(yīng)疾病的發(fā)生。在人類DN腎組織中該通路處于明顯激活狀態(tài)。研究表明，糖尿病高糖環(huán)境、炎癥因子、氧化應(yīng)激等存在時，p38MAPK激活后即可介導(dǎo)TGF-β的表達(dá)，上調(diào)TGF-β/Smad等多條信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)，TGF-β的存在可促進(jìn)腎臟組織細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化和細(xì)胞外基質(zhì)合成，最終出現(xiàn)DN進(jìn)行性腎臟纖維化的特征。
　　冬蟲夏草是我國傳統(tǒng)的名貴中草藥，主要化學(xué)成分是蟲草多糖，具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗纖維化等作用。研究證實(shí)，蟲

4、草制劑可以抑制腎間質(zhì)肌成纖維細(xì)胞激活、抑制TGF-β引起的腎小管上皮間質(zhì)化改變以及通過抑制ROS產(chǎn)生而減輕白蛋白對腎小管上皮細(xì)胞的損傷。目前關(guān)于蟲草制劑在治療糖尿病腎病療的確切作用機(jī)制尚未完全明確，仍需進(jìn)一步探索。
　　本研究通過藥物誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，使用發(fā)酵蟲草菌粉提取物（蟲草制劑）干預(yù)后，檢測相關(guān)指標(biāo)：通過檢測上皮細(xì)胞表型的標(biāo)志蛋白E-Cadherin，肌成纖維細(xì)胞表型的標(biāo)志蛋白α-SMA以及促進(jìn)上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化的重要因子

5、TGF-β1，研究蟲草有效成分對糖尿病小鼠腎組織病理改變、腎小管上皮間質(zhì)化及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響，進(jìn)一步明確其治療糖尿病腎病的機(jī)制，為臨床治療糖尿病腎病提供新的思路。
　　方法：
　　雄性8周齡SPF級C57BL/6j小鼠，按50mg·kg-1·d-1劑量連續(xù)5天予鏈脲佐菌素腹腔注射制成1型糖尿病模型，分為糖尿病組（DM組）、糖尿病+低劑量蟲草制劑治療組（百令蟲草菌液0.54g/kg，DM+L組）、糖尿病+高劑量蟲草制劑治

6、療組（百令蟲草菌液1.34g/kg，DM+H組）和正常對照組（CTL組）。造模成功6周后測定各組小鼠體重、血糖、尿蛋白肌酐比（PCR）等生理指標(biāo)變化；取腎組織測量體積和重量變化，光鏡下觀察病理改變；利用免疫組化或免疫印跡技術(shù)檢測E-Cadherin、α-SMA、TGF-β1、p-p38MAPK等蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、與CTL組比較，DM組、DM+L組、DM+H組體重明顯減輕、血糖水平和尿PCR顯著升高（P<0.

7、05），而DM+L組和DM+H組（蟲草制劑治療組）尿PCR顯著低于DM組（P<0.05）。同時糖尿病小鼠腎臟體積增大，腎臟占體重之比上升（P<0.05），腎小球系膜基質(zhì)增寬并體積增大（P<0.05）、腎小管萎縮、間質(zhì)小圓形細(xì)胞浸潤和間質(zhì)成分增多，膠原纖維含量顯著增多（P<0.05）；而蟲草制劑治療組（DM+L、DM+H組）上述病理改變顯著緩解，且DM+H組腎小球體積和膠原纖維含量低于DM+L組（P<0.05）。
　　2、小鼠糖尿病

8、腎組織中TGF-β1和α-SMA的蛋白表達(dá)明顯高于正常對照組（P<0.05），而蟲草制劑治療組TGF-β1和α-SMA的蛋白表達(dá)顯著低于DM組（P<0.05），且DM+H組低于DM+L組（P<0.05）。糖尿病小鼠腎組織中E-Cadherin的蛋白表達(dá)明顯減低（P<0.05），而蟲草制劑治療組E-Cadherin的蛋白表達(dá)明顯高于DM組并且DM+H組高于DM+L組（P<0.05）。
　　3、小鼠糖尿病腎組織中磷酸化p38MAPK蛋

9、白表達(dá)明顯高于正常對照組（P<0.05），而蟲草制劑治療組磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)顯著低于DM組并且DM+H組高于DM+L組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、經(jīng)腹腔注射鏈脲佐菌素，可誘導(dǎo)1型糖尿病小鼠模型，出現(xiàn)發(fā)生腎小球增大、腎小管萎縮、細(xì)胞外基質(zhì)增多和腎組織纖維化，伴尿蛋白排泄率增高，蟲草制劑可以減輕上述病理改變和腎損害表現(xiàn)。
　　2、糖尿病小鼠腎組織TGF-β1表達(dá)上調(diào)，伴腎小管上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物E-Ca