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文檔簡介
1、研究目的:
本研究擬觀察益氣健脾方劑黃芪六一湯對2型糖尿病模型大鼠的治療作用,探討其可能通過影響由SGL、2/GLUT2介導(dǎo)的腎小管上皮葡萄糖重吸收的作用機(jī)制;本研究從腎臟葡萄糖重吸收觀察黃芪六一湯的作用,為中藥防治糖尿病的研究嘗試新的方法,并且可為探討黃芪六一湯益氣健脾利尿在糖尿病中的治療應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
研究方法:
1、采用高脂高糖喂養(yǎng)合并腹腔注射鏈脲佐菌素復(fù)制2型糖尿病大鼠模型。觀察實(shí)驗(yàn)大鼠一般癥狀
2、,檢測實(shí)驗(yàn)動物空腹血糖、糖化血紅蛋白、胰腺及腎臟組織病理學(xué)觀察,比較觀察25mg/kg,30mg/kg,35mg/kg,40mg/kg四種不同劑量STZ腹腔注射的造模效應(yīng),篩選最適宜的STZ腹腔注射劑量,并了解該大鼠糖尿病模型的發(fā)生、發(fā)展變化過程,為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
2、復(fù)制2型糖尿病大鼠模型,分別給予達(dá)格列凈0.5mg/kg,黃芪六一湯3.15g/kg、6.30g/kg、12.60g/kg灌胃治療,觀察黃芪六一湯對糖尿病大
3、鼠的一般狀態(tài)包括體重、攝食量、空腹血糖,并于給藥6周后,取血檢測糖化血紅蛋白、血脂4項(xiàng)、血漿胰島素,留取腎臟、胰腺組織用于組織病理學(xué)檢查及腎組織中SGLT2、GLUT2蛋白表達(dá)及mRNA表達(dá)。
3、分別采用免疫組化和western blot方法觀察模型組和各治療組對大鼠腎小管上皮SGLT2及GLUT2蛋白表達(dá)的影響。
4、熒光定量PCR方法檢測觀察各組大鼠腎臟組織中slc5a2及slc2a2基因表達(dá)的差異。
4、 5、綜合上述研究結(jié)果分析探討黃芪六一湯的療效及其可能通過調(diào)節(jié)經(jīng)SGLT2/GLUT2的腎小管上皮葡萄糖重吸收的作用機(jī)制。
研究結(jié)果:
1、通過比較研究發(fā)現(xiàn),高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后,30mg/kg體重劑量給予大鼠一次性腹腔注射STZ,能造成類似2型糖尿病的大鼠動物模型,該動物模型較為穩(wěn)定??崭寡牵?1.1 mmol/L,造模成功率高,而且其損傷相對較輕,腹腔注射后6周內(nèi)未見動物死亡,30mg/kg劑量STZ較適宜本
5、研究應(yīng)用。
2、成功復(fù)制了2型糖尿病大鼠模型,造模組大鼠見有明顯多飲、多食、多尿、體重減輕“三多一少”的癥狀,同時出現(xiàn)大便溏稀、毛發(fā)脫落,喜臥懶動等類似脾虛癥狀;血糖及糖化血紅蛋白明顯升高;造模大鼠胰島結(jié)構(gòu)尚且清晰可見;HE染色觀察各組大鼠的腎臟腎小球、集合小管、近端小管及遠(yuǎn)端小管的結(jié)構(gòu)完整,并無明顯實(shí)質(zhì)性病理損害;造模大鼠血漿胰島素水平未見明顯改變。造模組大鼠經(jīng)過6周的黃芪六一湯灌胃治療,脾虛大鼠的一般癥狀有所好轉(zhuǎn);血糖及糖
6、化血紅蛋白等指標(biāo)均優(yōu)于模型對照組;大鼠造模、給藥均未對血脂造成明顯影響。
3、免疫組織化學(xué)方法觀察結(jié)果表明,高脂高糖飲食合并STZ腹腔注射致糖尿病大鼠模型腎小管中SGLT2及GLUT2表達(dá)增高,黃芪六一湯灌胃治療6周后有一定程度降低其蛋白表達(dá)的作用;Western Blot檢測腎臟組織中的SGLT2、GLUT2蛋白表達(dá)結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型組大鼠腎臟SGLT2表達(dá)增高,黃芪六一湯治療后表達(dá)量減少;模型組大鼠腎臟組織中GLUT2表達(dá)降低
7、,黃芪六一湯治療后其蛋白表達(dá)升高。
4、qPCR研究結(jié)果表明,與模型組對比,黃芪六一湯沒有提高腎組織slc5a2基因表達(dá)的趨勢;與模型組對比,黃芪六一湯低劑量、黃芪六一湯中劑量對slc2a2基因表達(dá)有上調(diào)的作用趨勢,但沒統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
研究結(jié)論:
黃芪六一湯對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠具有較好的治療作用,可以降低實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的血糖、糖化血紅蛋白。高糖高脂飲食合并腹腔注射鏈脲佐菌素致糖尿病大鼠腎組織SGLT2及GLU
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