高葡萄糖環(huán)境下尿酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞NLRP3炎性通路作用的研究.pdf

1、高尿酸血癥是糖尿病腎臟疾病(DKD)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。研究顯示尿酸可通過激活腎臟的NLRP3炎性體通路，調(diào)節(jié)IL-1β及IL-18產(chǎn)生增多而同慢性腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)；而糖尿病的高糖環(huán)境亦可介導(dǎo)NLRP3炎性體的激活。腎小管病變是DKD的重要部分，已有研究證實(shí)人腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)NLRP3炎性體通路主要成分且具有很強(qiáng)的產(chǎn)生IL-1β及IL-18的能力，但尚不明確高糖環(huán)境是否促進(jìn)尿酸對(duì)腎小管上皮細(xì)胞NLRP3炎性體的激活而直接影響D

2、KD的發(fā)生、發(fā)展。
　　目的:
　　探討高葡萄糖環(huán)境下不同濃度尿酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞NLRP3炎性通路的影響及兩者之間可能存在的協(xié)同作用。
　　方法:
　　1.體外培養(yǎng)人腎小管上皮細(xì)胞HK-2。
　　2.采用MTT法檢測(cè)不同濃度尿酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞活力的影響。
　　3.采用2×4析因分析設(shè)計(jì)：根據(jù)不同葡萄糖(5.5MM及25MM)、尿酸(依次為空白、0.2MM、0.4MM、0.8MM)濃度分為八組，

3、相應(yīng)為低糖空白組、0.2MM尿酸低糖組、0.4MM尿酸低糖組、0.8MM尿酸低糖組；高糖空白組、0.2MM尿酸高糖組、0.4MM尿酸高糖組、0.8MM尿酸高糖組，各組培養(yǎng)72h。
　　4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)各組NLRP3炎性體通路主要成分包括NLRP3、 ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18的mRNA表達(dá)水平；Western-Blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18的蛋

4、白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.葡萄糖及尿酸對(duì)5種因子基因表達(dá)的影響：
　　1)整體影響：不同葡萄糖濃度及尿酸濃度對(duì)5種因子的基因表達(dá)具有明顯影響(P<0.05)。在低及高糖濃度下，隨尿酸濃度升高，5種因子的mRNA表達(dá)呈上升趨勢(shì)，但0.8MM的尿酸濃度均抑制5種因子的表達(dá)(P<0.05)；不同葡萄糖濃度與尿酸濃度對(duì)5種因子的表達(dá)具有交互作用(P<0.05)。
　　2)對(duì)每種因子的影響強(qiáng)度：不同葡萄糖濃度對(duì)NL

5、RP3、Caspase-1、 IL-18基因表達(dá)的影響較明顯(P<0.05)：在高葡萄糖濃度下，NLRP3、Caspase-1、 IL-18基因表達(dá)呈上升趨勢(shì)；不同尿酸濃度對(duì)Caspase-1、IL-18基因表達(dá)的影響較明顯(P<0.05)：隨著尿酸濃度升高，Caspase-1、IL-18基因表達(dá)呈上升趨勢(shì)，當(dāng)尿酸濃度達(dá)0.8MM則抑制這兩種基因的表達(dá)(P<0.05)；葡萄糖與尿酸對(duì)其他因子表達(dá)影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。葡萄糖與

6、尿酸對(duì)Caspase-1表達(dá)具有交互作用(P<0.05)。
　　2.葡萄糖及尿酸對(duì)5種因子蛋白水平的影響：
　　1)整體影響：不同葡萄糖濃度及尿酸濃度對(duì)于5種因子蛋白的表達(dá)影響未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；
　　2)對(duì)每種因子的影響強(qiáng)度：葡萄糖濃度對(duì)于IL-1β及IL-18蛋白表達(dá)具有較明顯的影響，高葡萄糖濃度下，IL-1β及IL-18蛋白的表達(dá)呈上升趨勢(shì)(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.高糖濃度