醛酮還原酶家族1的C1亞型在膽管癌發(fā)生發(fā)展中作用及機(jī)制.pdf

1、目的：近年來(lái)，關(guān)于腫瘤代謝相關(guān)研究越來(lái)越多，代謝異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移相關(guān)，且許多代謝相關(guān)蛋白已用作腫瘤診斷的標(biāo)記物或治療的靶點(diǎn)。消化系統(tǒng)的腫瘤膽管癌是指源于肝管和肝外膽管的癌，約占腫瘤發(fā)生率的3％。目前，膽管癌的研究已成為熱門，雖然有很多學(xué)說(shuō)來(lái)解釋其發(fā)病機(jī)制，但并不全面，所以，深入研究膽管癌的發(fā)生機(jī)制，有可能為膽管癌的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移提供新思路，為非手術(shù)治療提供新的突破口。醛酮還原酶(Aldo-keto reduct

2、ases AKRs)是參與氧化還原反應(yīng)的三大酶類超家族之一，廣泛地分布于原核生物和真核生物。AKRs以煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(triphosphopyridine nucleotide NADPH)為輔酶，參與氧化還原反應(yīng)。本文旨在研究AKRIC1(Aldo-keto reductase family1 member C1)在膽管癌中的表達(dá)，并初步探討其在膽管癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。
　　方法：采用消化系腫瘤組織芯片和免疫組化

3、分析方法，檢測(cè)癌組織和正常組織AKR1C1的表達(dá);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腫瘤細(xì)胞株AKR1C1的表達(dá);蛋白免疫印跡western blot檢測(cè)腫瘤細(xì)胞株及10例膽管癌病人腫瘤組織、癌旁組織和正常組織AKR1C1的表達(dá);在膽管癌細(xì)胞株QBC939中感染沉默AKR1C1的病毒質(zhì)粒及空質(zhì)粒，CCK-8(Cell Counting Kit-8)比色法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖;劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的遷移情況;流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)檢測(cè)

4、各實(shí)驗(yàn)組QBC939細(xì)胞的周期阻滯和凋亡情況;RT-PCR和Western-blot方法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組QBC939細(xì)胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的mRNA和蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.消化系腫瘤組織芯片和免疫組化分析顯示:AKR1C1在食管癌、肝癌及膽管癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性;AKR1C1在腸癌中為弱陽(yáng)性表達(dá);在胃癌中，隨著分化程度的降低表達(dá)逐漸增強(qiáng);A

5、KR1C1在胰腺癌中幾乎呈弱陽(yáng)或陰性表達(dá)。
　　2.49例膽管腫瘤組織芯片和免疫組化結(jié)果顯示:不同類型的癌組織與正常組織相比，癌組織中均高表達(dá)AKR1C1;western blot驗(yàn)證10例膽管癌患者腫瘤組織、癌旁組織和正常組織AKR1C1表達(dá)，確定AKR1C1在腫瘤組織中呈高表達(dá);
　　3.為繼續(xù)研究AKR1C1與膽管癌的關(guān)系，選用膽管癌細(xì)胞株進(jìn)行相關(guān)功能學(xué)檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和western blot檢測(cè)顯示:膽管癌

6、細(xì)胞QBC939高表達(dá)AKR1C1;
　　4.CCK-8比色法檢測(cè)感染沉默AKR1C1病毒質(zhì)粒組細(xì)胞與空質(zhì)粒對(duì)照組細(xì)胞，沉默組細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);
　　5.流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，感染沉默AKR1C1病毒質(zhì)粒組出現(xiàn)細(xì)胞周期阻滯，凋亡增加;
　　6.transwell檢測(cè)結(jié)果顯示，感染沉默AKR1C1病毒質(zhì)粒組的細(xì)胞遷移率明顯降低;
　　7.Real time-PCR和We

7、stern-blot方法分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組QBC939細(xì)胞survivin、Bcl-2、Bax、caspase-3、β-catenin和E-cadherin的mRNA和蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)，survivin、caspase-3和E-cadherin變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。證明了上述多個(gè)分子與膽管癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移有關(guān)，但具體通路仍不清楚，需要后續(xù)研究驗(yàn)證。
　　結(jié)論:AKR1C1在膽管腫瘤組織與肝外膽管癌細(xì)胞株QBC939中高表達(dá)，其表達(dá)狀態(tài)與