過表達(dá)miR-21通過下調(diào)PDCD4促進妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的發(fā)生發(fā)展.pdf

1、目的：microRNA是一類能通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達(dá)的內(nèi)源性短鏈非編碼RNA， miRNA-21(miR-21)是其中一員，因在許多腫瘤中扮演癌基因樣角色而備受關(guān)注。程序性死亡因子4(PDCD4)和PTEN是抑癌基因，功能下調(diào)或缺失會促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病(GTD)的發(fā)病機制尚未完全明了，本研究通過檢測miR-21、PDCD4和PTEN的表達(dá)、三者相關(guān)性和下游作用因子，以及對滋養(yǎng)細(xì)胞功能的影響，旨在明確GTD發(fā)生和妊娠滋養(yǎng)

2、細(xì)胞腫瘤(GTN)發(fā)展的調(diào)控機制，為耐藥性 GTN尋求新的分子治療靶點，并為葡萄胎(HM)的隨訪提供新的分子標(biāo)記監(jiān)測物。
　　方法：
　　1)采用qRT-PCR檢測20例正常早孕絨毛及16例HM新鮮組織中miR-21的表達(dá)；
　　2)采用ISH、FISH檢測23例早孕絨毛和42例HM石蠟切片中miR-21的表達(dá)及分布；
　　3)用IHC檢測53例正常早孕絨毛，98例HM和10例侵襲性HM石蠟切片中PDCD4的表達(dá)

3、；
　　4)早孕絨毛和葡萄胎組織各10例，采用qRT-PCR和Western blot分別檢測其中PDCD4和PTEN的mRNA和蛋白的表達(dá)；
　　5)采用CCK8法、Transwell法、流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染miR-21 mimic/inhibitor后對絨癌細(xì)胞JAR和JEG-3功能的影響；
　　6)熒光素酶報告實驗驗證PDCD4與miR-21是否存在靶向關(guān)系，并用qRT-PCR、Western blot檢測調(diào)控關(guān)系

4、；
　　7)采用qPCR-array技術(shù)檢測PDCD4下游作用因子。
　　結(jié)果：
　　1) miR-21在HM組織中的表達(dá)顯著高于正常早孕絨毛（P<0.05），在絨癌細(xì)胞株 JAR和 JEG-3中的表達(dá)顯著高于原代培養(yǎng)的正常滋養(yǎng)細(xì)胞（P<0.05， P<0.01）；
　　2) PDCD4在HM中表達(dá)顯著低于正常早孕絨毛（P<0.001），在侵襲性HM中幾乎失表達(dá)(P<0.001)，在絨癌細(xì)胞株JAR和JEG-3中

5、的表達(dá)低于原代培養(yǎng)的滋養(yǎng)細(xì)胞PHT(P<0.01，P<0.01)；
　　3) PDCD4和PTEN均受miR-21的負(fù)調(diào)控；
　　4)過表達(dá)miR-21能促進絨癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲、抑制凋亡，抑制miR-21減弱癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲、增加凋亡；
　　5)沉默絨癌細(xì)胞中 PDCD4后金屬基質(zhì)酶 MMP3、MMP7顯著增加(P<0.001， P<0.001)，金屬基質(zhì)酶抑制物TIMP1顯著降低(P<0.001)。<