線粒體未折疊蛋白反應(yīng)在Sir2抑制帕金森轉(zhuǎn)基因果蠅的作用.pdf

1、目的：帕金森病(idiopathic Parkinson's disease，PD)，簡稱PD，是第二大常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，近幾十年的研究表明，PI NK1(PTEN-induced putative kinase1)的缺失能夠?qū)е戮€粒體形態(tài)功能異常，而線粒體的功能紊亂是PD發(fā)病的一個重要原因。Sir2(Silent information regulator2)屬于sirtuin蛋白家族的一員，最近的研究發(fā)現(xiàn)，Sir2能夠誘

2、導線粒體未折疊蛋白反應(yīng)(unfolded protein response， UPRmt)，改善線粒體功能。目前已經(jīng)構(gòu)建包括PD等許多神經(jīng)變性疾病轉(zhuǎn)基因果蠅模型，本研究意在探討Sir2對PD轉(zhuǎn)基因果蠅是否具有神經(jīng)保護作用及其與UPRmt的相關(guān)性。
　　方法：選用Mhc-GAL4啟動子，利用經(jīng)典的GAL4-UAS系統(tǒng)，構(gòu)建Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)Pink1B9 PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型，通過遺傳干預(yù)使Si r2在Mhc-GAL4/UA

3、S系統(tǒng)PD轉(zhuǎn)基因果蠅運動神經(jīng)元內(nèi)過表達，分別進行飛行、翅膀異翅率統(tǒng)計，ATP及mRNA水平檢測等觀察Sir2過表達對果蠅運動神經(jīng)元變性是否具有神經(jīng)保護作用，然后通過RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)抑制UPRmt相關(guān)基因Hsp60、GCN-2的表達，構(gòu)建Sir2過表達而UPRmt抑制的雙平衡系PD轉(zhuǎn)基因果蠅，進行飛行、翅膀異常率統(tǒng)計，相關(guān)分子伴侶mRNA檢測以及蛋白免疫印跡等試驗，觀察Sir2過表達對抑制果蠅運

4、動神經(jīng)元變性的作用，以及驗證這種作用是否與UPRmt相關(guān)。
　　結(jié)果：成功構(gòu)建Mhc-GAL4/UAS系統(tǒng)Pink1B9 PD轉(zhuǎn)基因果蠅模
　　型、Sir2過表達的PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型以及UPRmt抑制而Sir2過表達的雙平衡系PD轉(zhuǎn)基因果蠅模型。Sir2過表達抑制了PD轉(zhuǎn)基因果蠅運動神經(jīng)元變性，飛行能力得到改善，翅膀異常率下降，ATP含量升高，顯著改善了果蠅運動能力，而在UPRmt被抑制后，Sir2的保護作用明顯減弱。