TMEM48在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用與機(jī)制研究.pdf

1、肺癌是當(dāng)今世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其中以非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）占絕大多數(shù)。盡管近年來隨著診治技術(shù)和設(shè)備的不斷發(fā)展，但NSCLC的5年總體生存率仍徘徊在15%~20%。TMEM48是位于核孔復(fù)合體（NPC）上面的一種轉(zhuǎn)膜核孔蛋白，既參與其重要組成又起到橋梁作用將其錨定于核膜上面。已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)核孔蛋白突變及異常表達(dá)可導(dǎo)致NPC通道的功能異常引起惡性腫瘤的發(fā)生，而TMEM48與惡性腫瘤之間的關(guān)系尚未見報(bào)道。本研究將分為五部

2、分,就TMEM48基因在NSCLC中的表達(dá)及其促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用與機(jī)制進(jìn)行體內(nèi)外系統(tǒng)研究，并為 TMEM48成為NSCLC生物學(xué)行為及預(yù)后一個(gè)新的評(píng)價(jià)指標(biāo)或是新的基因靶點(diǎn)治療NSCLC提供一定理論依據(jù)。
　　本課題組前期對(duì)10對(duì) NSCLC組織及配對(duì)癌旁組織高通量測序發(fā)現(xiàn)TMEM48在腫瘤組織中存在著異常高表達(dá)，進(jìn)一步通過TCGA數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)TMEM48的高表達(dá)與 NSCLC患者預(yù)后總體生存時(shí)間（OS）呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。隨后我們?cè)诒?/p>

3、文第一部分?jǐn)U大NSCLC與癌旁標(biāo)本病例數(shù)至60對(duì)，經(jīng)Real-time PCR檢測進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)TMEM48基因同樣在腫瘤組織中存在高表達(dá)(P<0.0001)，且基因表達(dá)量愈高的患者，腫瘤體積愈大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移幾率更高、術(shù)后病理分期更晚，Kaplan-Meier生存分析顯示無瘤生存時(shí)間（DFS）和OS均愈短(P<0.05)。第二部分我們成功構(gòu)建了 TMEM48慢病毒干擾質(zhì)粒載體，以穩(wěn)定沉默目的基因TMEM48的表達(dá)。第三部分通過慢病毒介導(dǎo)的R

4、NA干擾（RNAi）技術(shù)沉默了A549和H1299 NSCLC細(xì)胞系中TMEM48的表達(dá)水平后，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組兩種細(xì)胞的凋亡數(shù)量均明顯增加，增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移能力均顯著減弱(P<0.01)。第四部分里面我們將TMEM48 RNAi的A549細(xì)胞株注入裸鼠腋下皮下，飼養(yǎng)60天后發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組裸鼠成瘤的瘤體體積生長速度與重量均明顯小于對(duì)照組(P<0.01)。最后一部分我們繼續(xù)通過Real-time PCR和Western blot方法檢測相關(guān)下

5、游分子發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期相關(guān)基因 CyclinB1、CDK1、CDC6及 DNA復(fù)制相關(guān)基因PCNA、RFC均明顯下調(diào)；促細(xì)胞凋亡基因Bax表達(dá)上調(diào)而抗凋亡基因Bcl-2、XIAP、Survivin表達(dá)下調(diào)；促進(jìn)侵襲相關(guān)基因 MMP-2和 MMP-9表達(dá)下調(diào)（P<0.01）。因此，我們的研究結(jié)果提示TMEM48可能是NSCLC一個(gè)早期微轉(zhuǎn)移診斷及預(yù)后評(píng)估的重要指標(biāo)；由于它可以通過作用于多個(gè)與細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲相關(guān)基因促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，它也成