尿路上皮癌胚抗原1(UCA1)對(duì)口腔鱗癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】口腔鱗狀細(xì)胞癌是口腔頜面部最常見(jiàn)的惡性腫瘤，口腔癌患者的5年生存率一直為50％左右，大部分患者多因腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致死亡。伴隨著全基因組和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，長(zhǎng)鏈非編碼RNA日益受到關(guān)注，許多研究已經(jīng)表明LncRNA(Long non-coding RNA)不僅僅是從DNA到蛋白質(zhì)之間的中間產(chǎn)物，而且很多時(shí)候是作為一個(gè)具有細(xì)胞調(diào)節(jié)功能的重要角色，參與到生物生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中。因此，研究口腔癌侵襲相關(guān)基因是目前的熱點(diǎn)問(wèn)題。大量

2、的研究表明， LncRNA的異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但目前的研究尚屬對(duì)UCA1在口腔中組織形態(tài)學(xué)的研究，而對(duì)其在口腔癌中的具體分子機(jī)制仍未涉及。因此，對(duì) LncRNA RNA UCA1(urothelial cancer associated1)對(duì)口腔癌細(xì)胞系Scc15和Cal27生物學(xué)功能的一些影響進(jìn)行探討，為口腔鱗癌早期診斷、治療，研制新的基因靶向藥物提供重要的實(shí)驗(yàn)線索和依據(jù)。
　　【方法】以Scc15和Cal27

3、口腔鱗癌細(xì)胞系為研究對(duì)象，通過(guò)將UCA1-siRNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞中，探討沉默LncRNA RNA UCA1后對(duì)細(xì)胞的生物學(xué)功能的影響。采用qRT-PCR方法驗(yàn)證UCA1-siRNA的干擾效果；通過(guò)Western Blot檢測(cè)兩組中MMP-9蛋白的表達(dá)水平；運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)研究?jī)山M細(xì)胞侵襲及遷移能力的改變；通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)、Hoechst33258染色和流式細(xì)胞學(xué)分析檢測(cè)其細(xì)胞增殖、凋亡的情況；采用細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上

4、述兩組細(xì)胞中β-catenin蛋白的改變。所得試驗(yàn)數(shù)據(jù)以-x±S-x表示，并采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)分析。
　　【結(jié)果】qRT-PCR結(jié)果顯示：與control組相比，Scc15細(xì)胞干擾組UCA1表達(dá)水平下降近90%，而Cal27細(xì)胞干擾組下降值為85。Western Blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：兩組細(xì)胞干擾組中MMP-9蛋白表達(dá)水平均較control組下降。劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：在劃痕24 h后，干擾組較contr

5、ol-siRNA組劃痕遷移細(xì)胞的數(shù)量及劃痕愈合的速度明顯下降。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：兩組細(xì)胞control-siRNA組穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對(duì)照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細(xì)胞分別為437.2±54.75個(gè)（n=5）和145.8±23.31個(gè)(n=5)；Cal27的對(duì)照組與干擾組遷移穿膜細(xì)胞分別為719.2±92.36個(gè)（ n=5）和208.0±25.58個(gè)（ n=5）。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯

6、示：兩組細(xì)胞control-siRNA組穿過(guò)小室的細(xì)胞數(shù)目顯著高于干擾組，Scc15對(duì)照組與干擾組遷移與侵襲穿膜細(xì)胞分別為437.2±54.75個(gè)（ n=5）和145.8±23.31個(gè)(n=5)；Cal27的對(duì)照組與干擾組侵襲穿膜細(xì)胞分別為363.4±45.96個(gè)和164.8±24.68個(gè)(n=5)。CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：隨著細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，Scc15和Cal27細(xì)胞干擾組與control-siRNA組比較細(xì)胞增殖能力下降。Hot

7、chest33258染色結(jié)果顯示，兩組細(xì)胞干擾組與control-siRNA組比較，凋亡的細(xì)胞均明顯較多。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)：兩組細(xì)胞的干擾組較control-siRNA對(duì)照凋亡率分別為18.54%和1.45%（Scc15，p=0.0175),11.24%和4.43%（Cal27， p=0.0019)。細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩組細(xì)胞的干擾組胞核中的β-catenin蛋白從胞核中移出至胞漿，并且總的β-catenin蛋白在細(xì)胞中的