多梳蛋白CB X2和CB X7在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的功能互作及靶向動(dòng)態(tài)性分析.pdf

1、多梳蛋白家族Pc G是一類在染色質(zhì)水平上通過表觀遺傳修飾調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄因子，主要以多梳蛋白抑制復(fù)合物1和2（PRC1和PRC2）的形式存在。CBX蛋白家族是PRC1的核心組分之一，在哺乳動(dòng)物中有CBX2，4，6，7，8五個(gè)同源蛋白。在小鼠胚胎干細(xì)胞（ESC）中已知CBX7是主要發(fā)揮作用的C BX蛋白且含有CBX7的PRC1能夠不同程度地反饋抑制其他CBX同源蛋白編碼基因的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)室前期工作中對CBX蛋白在ESC的表達(dá)及功能進(jìn)行系統(tǒng)

2、檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)在ESC中有一定程度的CBX2表達(dá)；進(jìn)一步C hIP-qPCR結(jié)果顯示CBX2與C BX7共同靶向到諸多已知的P RC1的靶基因上，但在單分子靶基因位點(diǎn)上二者是否共同協(xié)同工作以及這種工作方式的生物學(xué)意義目前未知。本論文中主要采用生物信息學(xué)和基因GO注釋的方法對ESC中CBX2與CBX7共同調(diào)控的靶基因進(jìn)行功能學(xué)分類，并進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)檢測和比較了在小鼠胚胎干細(xì)胞E14TG2a和小鼠睪丸畸胎瘤F9細(xì)胞中二者靶向性的異同；利用免疫共沉淀

3、法和連續(xù)染色質(zhì)免疫共沉淀法探究二者在ESC中的分子相互作用和共調(diào)控靶基因的機(jī)制。研究結(jié)果顯示Cbx2基因在ESC中被CBX7蛋白部分抑制的情況下仍然發(fā)揮功能，CBX2與C BX7在全基因組范圍內(nèi)的靶基因群有著較高的重合度，其中包括大量多能性維持相關(guān)基因。免疫共沉淀結(jié)果顯示C BX2與CBX7在F9細(xì)胞中存在相互作用E14TG2a和F9細(xì)胞中的靶向性存在差異，揭示了胚胎分化過程中包含不同C BX同源蛋白的P RC1復(fù)合體的靶向識別具備特異