哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在SD大鼠睪丸中的表達(dá)及功能初探.pdf

1、目的：
　　精子發(fā)生是男性生殖中的主要過程，精原細(xì)胞的不斷分裂增殖又保證了精子發(fā)生的順利進(jìn)行。隨著年齡的不斷增長，男性精子的數(shù)量、質(zhì)量出現(xiàn)下降趨勢。mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞增殖分化中發(fā)揮著中心調(diào)控作用，因此mTOR信號通路可能在精子發(fā)生過程中有著重要的地位。通過檢測mTOR在大鼠睪丸組織中的表達(dá)規(guī)律，探討其與精子發(fā)生的關(guān)系，為進(jìn)一步研究具體機(jī)制打下重要基礎(chǔ)。
　　方法：
　　采用免疫組化方法對mTOR進(jìn)行組織學(xué)定位，

2、RT-PCR方法研究mTOR在SD性成熟雄性大鼠心臟、肝臟、腎臟、腦、睪丸組織中的表達(dá)水平。
　　利用熒光定量PCR、western blot方法檢測mTOR在不同發(fā)育階段的SD雄性大鼠睪丸中的表達(dá)情況。用HE染色觀察不同發(fā)育階段過程中SD大鼠睪丸組織形態(tài)學(xué)上的改變。
　　構(gòu)建雷帕霉素SD大鼠模型，用熒光定量PCR檢測mTOR mRNA在正常組、雷帕霉素組、對照組中的表達(dá)情況。再采用western blot方法檢測mTOR蛋

3、白以及mTOR下游靶蛋白P-P70S6K/P70S6K的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示mTOR陽性免疫染色主要位于睪丸生精小管的精母細(xì)胞及少量初級精母細(xì)胞的胞質(zhì)中。
　　2、與性成熟SD大鼠的其他各個(gè)主要器官相比，睪丸組織中mTOR的表達(dá)相對較高。隨著SD大鼠年齡的增長，mTOR在睪丸中的表達(dá)逐漸降低，并且伴隨著生精小管空泡化的逐漸產(chǎn)生；mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率也逐漸降低。

4、>　　3、雷帕霉素處理SD雄性大鼠后，睪丸中生精小管出現(xiàn)類似老齡鼠的空泡化以及mTOR下游靶蛋白P70S6K的磷酸化效率降低。
　　結(jié)論：
　　1、我們首次發(fā)現(xiàn)mTOR在大鼠生精小管精母細(xì)胞表達(dá)。
　　2、隨著年齡的增長，由于mTOR表達(dá)下降及其對下游靶蛋白P70S6K的磷酸化能力下降，導(dǎo)致大鼠精子數(shù)量減少、生精小管空泡化增多。
　　3、mTOR通過對P70S6K的磷酸化，調(diào)控促進(jìn)精原細(xì)胞增殖的蛋白合成，從而促進(jìn)