BmNPV的iap2基因的克隆、序列分析及其對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞凋亡的作用.pdf

1、目的：探討B(tài)mNPV-iap2基因?qū)Σ溉閯?dòng)物細(xì)胞Hela，PC12細(xì)胞凋亡作用以及是否會(huì)對(duì)帕金森病產(chǎn)生的影響。 實(shí)驗(yàn)方法：克隆了浙江BmNPV的iap2基因，它與鎮(zhèn)江BmNPV的iap2基因、BmNPV－T3的iap2、AcNPV的iap2、RmNPV的iap2相比較具有很高的同源性。并且根據(jù)哺乳動(dòng)物常用的表達(dá)載體pcDNA3.1(+)的要求設(shè)計(jì)了引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增得到了抗細(xì)胞凋亡基因iap2的DNA片段。將擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pG

2、EM－T－easy載體上,再進(jìn)一步將插入片段酶切并連接到表達(dá)載體pcDNA3.1(+)上。構(gòu)建pcDNA3.1(+)-iap2表達(dá)載體，再用類(lèi)似的方法構(gòu)建pcDNA3.1(+)-EGFP載體。 重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP載體共轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞命名為Hela-pcDNAiap2（實(shí)驗(yàn)組）。真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的載體共轉(zhuǎn)染的He

3、la細(xì)胞命名為Hela-pcDNA（對(duì)照組）。真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)加pcDNA3.1(+)-EGFP的載體共轉(zhuǎn)染的PC12細(xì)胞命名為PC12-pcDNA（對(duì)照組）。pcDNA3.1(+)-iap2加pcDNA3.1(+)-EGFP載體共轉(zhuǎn)染的細(xì)胞命名為PC12-pcDNAiap2（實(shí)驗(yàn)組）。親本細(xì)胞PC12作為未轉(zhuǎn)染（空白組）對(duì)照。利用一種共轉(zhuǎn)染的方法用脂質(zhì)體將包含BmNPV-iap2的外源基因轉(zhuǎn)染進(jìn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，G41