納豆固體發(fā)酵和納豆激酶的催化特性.pdf

1、納豆是一種亞洲東方傳統(tǒng)的發(fā)酵產(chǎn)品，納豆中的納豆激酶是一種枯草桿菌蛋白激酶，可口服吸收，溶解血栓，明顯縮短纖維蛋白的溶解時(shí)間；相比傳統(tǒng)的尿激酶和鏈激酶等藥物，有快速溶解血栓、半衰期長、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。因此納豆激酶是一種具有開發(fā)潛力的食源性溶栓藥物，引起醫(yī)藥及食品研究領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。
　　 在納豆固體發(fā)酵中，接種量為8％時(shí)，納豆激酶的活性達(dá)到了972IU/g樣品，比傳統(tǒng)4％接種量提高了約64％。固體發(fā)酵24h，納豆激酶活性達(dá)到709

2、IU/g，培養(yǎng)時(shí)間延長酶活反而下降。發(fā)酵結(jié)束后，納豆表面覆蓋厚厚的白色粘物，能拉出很長的細(xì)絲。
　　 當(dāng)豆子被切成2瓣時(shí)菌株在納豆表面的生長最旺盛。納豆固體發(fā)酵最佳條件為：大豆破碎2瓣、接種量為8％、發(fā)酵時(shí)間24h，納豆激酶活力最高為976IU/g。用纖維蛋白平板法，比較了液體發(fā)酵和固體發(fā)酵的酶活力，液體發(fā)酵中納豆激酶的酶活為142IU/mL，固體的最佳酶活為976IU/g。
　　 在納豆芽孢桿菌BN-3菌株液體發(fā)酵中，

3、發(fā)酵液的殘?zhí)橇吭谧畛?6h以內(nèi)是快速下降，從32mg/mL降至9mg/mL，說明此時(shí)菌株消耗糖迅速生長，在16h以后糖的消耗變化不大，說明菌株生長穩(wěn)定，開始大量表達(dá)蛋白。納豆激酶的酶活和蛋白質(zhì)濃度變化基本一致，都在40達(dá)到最高值，時(shí)間延長酶活和蛋白質(zhì)含量都將下降，發(fā)酵時(shí)間在40h左右，蛋白濃度達(dá)到的最大值0.214mg/mL，最高酶活力為174.72IU/mL。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示在納豆激酶液體發(fā)酵中納豆桿菌活菌濃度、蛋白質(zhì)濃度和納豆激酶酶活

4、之間存在很好的相關(guān)性，可以通過測(cè)定活細(xì)胞濃度來監(jiān)控發(fā)酵進(jìn)程。
　　 取BN-3菌株的發(fā)酵液離心，進(jìn)行硫酸銨分級(jí)鹽析沉淀，(NH4)2SO4飽和度范圍為35％～70％，此時(shí)沉淀的蛋白質(zhì)含量較高為29.77mg。確定分級(jí)鹽析飽和度之后透析、濃縮；經(jīng)過DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子層析，用0.1mol/L NaCl進(jìn)行階段洗脫，具有纖溶酶活性的脫峰冷凍干燥后，調(diào)節(jié)蛋白濃度為2.0mg/mL后進(jìn)行Sephadex

5、G-100層析，獲得了SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳兩條帶的纖溶酶，用纖維蛋白平板法測(cè)其酶活。結(jié)果：比活力為24325IU/mg，活性得率為47％，純化倍數(shù)7.5。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用脫脂牛乳為原料，分析納豆激酶在固體介質(zhì)和液體介質(zhì)中的催化乳蛋白水解特征，研究底物濃度、酶與底物濃度比(E/S)和酶解時(shí)間對(duì)酶水解的影響。本研究旨在為納豆激酶的活性測(cè)定和乳蛋白的酶解條件做初步探索。在固體平板上，納豆激酶水解乳蛋白的最佳酶解條件為酶解溫度3