基于等溫放大反應(yīng)檢測microRNA.pdf

1、microRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性的非編碼單鏈小分子RNA，約18~25個堿基，它通過與目標信使RNA結(jié)合來調(diào)控基因的表達，據(jù)推測，miRNA調(diào)節(jié)著人類約60%的基因表達，并且miRNA的表達水平與人類某些重大疾病如癌癥密切相關(guān)。因此miRNA的定量檢測和表達分析對深入研究其生物功能、臨床診斷與治療以及相關(guān)基因藥物的開發(fā)等具有重大意義。
　　環(huán)誘導(dǎo)等溫放大反應(yīng)能夠通過一步操作實現(xiàn)miRNA的靈敏檢測，但是該方法的一個缺點是

2、必須使用一條很長的DNA模版，而且需要利用三條不同的引物(FIP，BIP和B3)發(fā)生多次反應(yīng)來生成該反應(yīng)的起始結(jié)構(gòu)——一條兩端成環(huán)狀的啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板，該DNA模板引發(fā)了自動循環(huán)的鏈取代DNA的合成，最終產(chǎn)生DNA指數(shù)擴增。在本文中，我們直接設(shè)計了一條雙環(huán)啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板，其3′端懸著一段與miRNA互補的序列，該方法僅用一條引物（BIP），以miRNA引發(fā)等溫放大反應(yīng)，只需一步反應(yīng)就能產(chǎn)生這條雙環(huán)啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板。利