基于多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)高靈敏度檢測(cè)多重microRNA.pdf_第1頁
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1、MicroRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性的非編碼小分子RNA,通過與目標(biāo)信使 RNA(mRNA)結(jié)合形成基因沉默復(fù)合物(RISC)調(diào)控基因的表達(dá)。MiRNA在細(xì)胞代謝、分化、免疫反應(yīng)和腫瘤發(fā)生等生物過程中有重要的調(diào)控作用。許多研究表明,癌癥組織中miRNA的表達(dá)異常通常與多種miRNA(一般是2-15個(gè))有關(guān)。因此,建立一種靈敏度高、精密度好、可以同時(shí)檢測(cè)多種miRNA的方法不僅在癌癥的早期臨床診斷和治療方面有重要作用,對(duì)于深入了解腫

2、瘤發(fā)生的機(jī)理也有重要的意義。
　　本文建立了一種基于多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)(MLPA)高靈敏度檢測(cè)多重miRNA的方法,使用RNA堿基修飾的DNA探針,以miRNA為模板,能夠被T4 RNA ligase2高效連接。利用PCR對(duì)連接的探針擴(kuò)增,毛細(xì)管電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離檢測(cè),可檢測(cè)低至0.2 fmol/L的let-7a,并且能區(qū)分miRNA序列中單個(gè)堿基的錯(cuò)配。我們隨機(jī)選取了5種序列不相關(guān)的miRNA:mir-92a、mir-3

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