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文檔簡(jiǎn)介
1、生物體由蛋白質(zhì)、DNA、RNA等生物大分子組成,這些生物大分子在生物體各種調(diào)控通路中相輔相成,共同維持生命體的正常運(yùn)轉(zhuǎn)。它們主要通過(guò)DNA與RNA、蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用進(jìn)行生物信息的傳遞,最終完成生物體的一系列活動(dòng)。
其中,秀麗隱桿線蟲MEX-3蛋白質(zhì)的KH結(jié)構(gòu)域與擬南芥PUF類蛋白質(zhì)APUM5都是通過(guò)與mRNA的3'不翻譯區(qū)相互作用,進(jìn)而激活或抑制mRNA的翻譯過(guò)程,調(diào)控整個(gè)生命進(jìn)程。而斑馬
2、魚精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT9通過(guò)修飾某些蛋白質(zhì)精氨酸的甲基化,使甲基化的蛋白質(zhì)某種功能被激活或被抑制,進(jìn)而影響生物體一系列下游調(diào)控過(guò)程。
MEX-3蛋白質(zhì)在秀麗隱桿線蟲的P granule中被發(fā)現(xiàn),具有串聯(lián)的KH結(jié)構(gòu)域,它通過(guò)結(jié)合RNA調(diào)控生殖細(xì)胞系全能干細(xì)胞的更新及早期胚胎發(fā)生時(shí)期細(xì)胞的分化。PUF類蛋白質(zhì)存在于多種生物體中,擬南芥APUM5通過(guò)其PUF結(jié)構(gòu)域結(jié)合病毒基因組從而實(shí)現(xiàn)自我防御的功能。而精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT9
3、通過(guò)甲基化剪接因子參與選擇性剪接的相關(guān)調(diào)控。通過(guò)研究蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)作用的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ),能幫助我們進(jìn)一步的了解生物體中各種調(diào)控過(guò)程的分子機(jī)制。
我們主要利用大腸桿菌體外表達(dá)了秀麗隱桿線蟲MEX-3 KH結(jié)構(gòu)域、擬南芥APUM5 PUF結(jié)構(gòu)域,昆蟲細(xì)胞體內(nèi)表達(dá)了精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT9。通過(guò)NTA親和層析柱、Hiload 16/60 Supdex 75/200、MonoS/Q等分離純化手段獲得純度較高、狀態(tài)良好的目的
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