簡介：復旦大學博士學位論文新型抗腫瘤轉(zhuǎn)移多肽P肽的基因工程制備及其生物學效應研究牛姓名學科、專監(jiān)學校代碼學號導師2004年5月王松梅生物證學與分予生物學10246999L臻99查錫良教授劉銀坤教授摘要劑量效應相關(guān)關(guān)系?；蚬こ藼3對HCCLM6細胞與FN粘附的抑制作用強于15L露彝2，與83類鬣；_瓣盈在低裁鬟10，20PMOL／L囂荬穗瓣穩(wěn)裁{蕈霜與GRGDS類似，商劑量50，100PMOL／L的粘附抑制作用大于GRGDS。在與細胞共培養(yǎng)后不同時問，基工133、化合B1和GRGDS對HCCLM6細胞及SMMC．7721纓照與FN的糙黠都表璦了特異鵑攙鍘饞蠲，星璦時聞簸應相關(guān)關(guān)系。對纓照與FN的赫辮抑裁作用強度依次為鏊工133GRGDS純合131。而且，各種多肽對HCCLM6細胞與FN的粘附抑制作用大于SMME，772L細胞。我們又利用TRANSWEU小室及鋪就MATRIGEL的TRANSWELL小窳研究腫瘤細胞的迂移戇力。在翅入100MOL／L弱鏊二轉(zhuǎn)3惹，SMMC一772T綏熬襄HCCLM6緩魏細胞的斌移和侵襲都鼴到了明顯抑制，遷移抑制率分別為32．7％和40．7％，侵襲抑制率分別為35．2％和5L3％。為了輯突基工133瓣瓣瘙綴魅綦震會疆蛋巍酶MATRIXMETALLOPROTEINASE。MMP酌影響，我們用ELISA的方法撿測了腫瘤綱胞培養(yǎng)上清中MMP1、MMP一2和MMP一9的蛋白含燎。發(fā)現(xiàn)基工B3作用后，下調(diào)了SMMC．7721細胞及HCCLM6細胞MMP一9的表達，對MMP2盼表達影響不大。我們又用明膠酶譜法遺一爹羧溺綏麓豹MMP．2褻MMP9豹含蘩及活洼，發(fā)蠛萋C133對鬃縫豹MMP一2和MMP一9的涌性形式都有不同的抑制作用。提示基工133主要是通過抑制了MMP一9的蛋白表達量以及減少MMP．2和MMP．9的活性形式的相對含最來攙割SMMC一7721綴藏及HCCLM6纓蕤懿侵襲熊力豹。露量ELISA結(jié)果發(fā)現(xiàn)基工F33對HCCLM6緇施的MMP一1有明顯的棉制中翔，其意義遙有待進一步確定。用PETHIS表達載伴高效表達出了基工133，分離純化容易。這一載體是適合P3的表達的。表達出的基工B3具鴦抑囂4胂瘤纓臌與基質(zhì)糖附的作用，及擲鐿且申癃粲魏逶移靜作賃，并透過影穩(wěn)耱瘸綢戇豹MMP豹含量移滔瞧，最終改變緇麓的侵襲能力。因此，使用基因工程B3可能成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的新的手段。關(guān)鍵詞藏因工程粘附分子肝癌粘附轉(zhuǎn)移侵襲2

簡介：安徽理工大學博士學位論文煤炭生物降解轉(zhuǎn)化新菌種基因工程的構(gòu)建研究姓名徐敬堯申請學位級別博士專業(yè)環(huán)境工程指導教師張明旭20090615摘要ABSTRACTTHEBIODEGRADATIONANDCONVERSIONOFCOALISANEWCROSSSUBJECTOFBIOTECHNOLOGYMINERALPROCESSINGANDCOALCHEMICALINDUSTRYITMAKESTHECOALREALIZETHE‘GREEN”CLEANCONVERSIONANDCREATETHENEWWAYOFPERSISTENTDEVELOPMENTFORTHECOALINDUSTRYTHEBIODEGRADATIONANDCONVERSIONOFCOALHASTHEBENEFITSOFLOWENERGYCONSUMPTIONTEMPERATECONDITIONANDGREENENVIRONMENTITISTHEWAYTOEARLYOUTTHECLEANCOALTECHNOLOGYFORCHINATHEPAPERISBASEDONTHECONDITIONTHATCHINAHASLARGEOFCOALFORPRODUCTIONANDCONSUMPTIONITDETERMINESTHATTHEGREENCOALTECHNOLOGYTHEBIODEGRADATIONANDCONVERSIONOFCOALISAPROSPECTIVEFUNDAMENTALRESEARCHINTHEFIELDOFBIOMININGTECHNOLOGYTHEPAPERCARRIESOUTTHEEXPERIMENTSOFCOALBIODEGRADATIONANDCONVERSIONWITLLTWOBACTERIASYSTEMATICALLYTHATISAMERICANBKM。F1767PHANEROCHAETECHRYSOSPORIUM、析TLLENZYMETODEGRADELIGNMANDRHODOPSEUDOMONASSPHEROIDS、析THENZYMETODEGRADEAROMATICCOMPOUNDWITHTHEMETHODOFGENETICENGINEERING，WETRYEXPERIMENTSOFCELLFUSIONANDGENERECOMBINATIONOFPHANEROCHAETECHRYSOSPORIUMANDRHODOPSEUDOMONASSPHEROIDSANDWEGETSUPERENGINEERINGBACTERIAFORCOALBIODEGRADATIONANDCONVERSIONINADDITIONS，WEMUTAGENESISTHEABOVEMENTIONEDBACTERIAANDITSPROTOPLAST、析MCLASSICALMEANSOFULTRAVIOLETANDMICROWAVEARRAYRADIATIONANDWEBREEDNEWELITEBACTERIAFORCOALBIODEGRADATIONANDCONVERSIONTHEFEATURESOFTHEDEGRADEDPRODUCTSARESTUDIEDINTHEPAPERWEUSESOMEKINDSOFMODEMTESTINGTECHNIQUESSUCHASFTIR、MS、XRDANDTGDTATOCOMPAREANDSTUDYORIGINALCOAL、THECOALPRETREATEDWITLLNITRICACID，CINDERAFTERDEGRADATIONANDDEGRADATIONPRODUCTTHERESULTSSHOWTHATBIGMOLECULARSTRUCTURESHAVEBEENGREATLYCHANGED，ANDTHECHARACTEROFCALORICHASBEENCHANGEDTHEDEGRADATIONPRODUCTISDEPOSITEDAFTERADDINGACIDTHEDEGRADATIONPRODUCTINTHESTATEOFSOLIDISLIKECOAL，BRIGHTANDBLACKITCANBEDISSOLVEDBYALKALIANDCANNOTBEDISSOLVEDBYETHAN01THEPAPERALSOSTUDIESTHERULESOFBIODEGRADATIONANDCONVERSIONTHERESEARCHSHOWTHATITISTHEDEGRADINGLIGNINENZYMEOFPHANEROCHAETECHRYSOSPORIUMANDDSZAB，CANDREDUCTIONENZYMEOFRHODOPSEUDOMONASSPHEROIDSTODEGRADECOALHOWEVERTHEFUSANTOFTHETHEABOVEMENTIONEDBACTERIACANSECRETETWOBIOENZYMESYSTEMSAT

簡介：色氨酸作為必需的氨基酸之一，對于人和動物的生長發(fā)育及其新陳代謝都有著重要的意義。廣泛應用于醫(yī)藥、食品和飼料添加領(lǐng)域，國內(nèi)國際市場對色氨酸的需求量也在不斷增加。而傳統(tǒng)的化學合成法和酶法轉(zhuǎn)化等方法的工藝成本又居高不下，這些原因的存在導致我國至今尚未實現(xiàn)色氨酸生產(chǎn)的工業(yè)化。近年來，微生物發(fā)酵法生產(chǎn)色氨酸因原料來源十分廣泛易得、適宜大規(guī)模投產(chǎn)而成為研究熱點，因此利用基因工程技術(shù)重新設(shè)計大腸桿菌代謝系統(tǒng)，構(gòu)建色氨酸工程菌是本實驗研究內(nèi)容。目的改造大腸桿菌色氨酸生物合成的中心代謝途徑，構(gòu)建PZA31PPSATKTA重組質(zhì)粒，并與之前構(gòu)建的PZEL2AROCFBRTRPEDFBR重組質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)化入ECOLIMG1655△RTR菌株，構(gòu)建高產(chǎn)色氨酸菌株；并進行實驗室發(fā)酵的初步實驗，分別對培養(yǎng)基、裝量、糖濃度變化和PH變化進行摸索比較，選取最優(yōu)的培養(yǎng)基和裝量，并得到針對此工程菌科學的補充碳、氮源的時間頻率。方法根據(jù)PPSA和TKTA基因序列分別合成引物進行PCR擴增，將PCR擴增所得PL1ACO1TKTAT1片段和PZA31質(zhì)粒連接，經(jīng)篩選鑒定正確的PZA31TKTA重組質(zhì)粒和PCR擴增所得PL1ACO1PPSAT1片段連接，構(gòu)建PZA31PPSATKTA重組質(zhì)粒，并進行測序鑒定。將鑒定正確的PZA31PPSATKTA和PZE12AROCFBRTRPEDFBR重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化至ECOLIMG1655△RTR，獲得的重組菌株命名為ECOLIMG1655△RTRPZA31PPSATKTAPZE12AROGFBRTRPEDFRB工程菌。對工程菌進行發(fā)酵瓶發(fā)酵實驗。首先根據(jù)工程菌在不同培養(yǎng)基中的生長狀況，確定了適合工程菌發(fā)酵的培養(yǎng)基，然后采用正交實驗設(shè)計方法，研究了發(fā)酵瓶裝量，糖濃度以及誘導劑濃度三個試驗因素對工程菌生長以及色氨酸產(chǎn)量的影響。以PZE12AROGFBRTRPEDFBR重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至ECOLIMG1655△RTR得到的重組菌株ECOLIMG1655△RTRPZE12AROGFBRTRPEDFBR作為對照菌株，加入05MM異丙基ΒD硫代半乳糖苷IPTG誘導表達，3HR后收集部分菌體行PPSA、TKTA酶活性測定，其余發(fā)酵液繼續(xù)培養(yǎng)45HR后，監(jiān)測調(diào)整培養(yǎng)基中葡萄糖濃度和PH值保持不變，48HR后檢測色氨酸產(chǎn)量。結(jié)果PCR擴增所得片段均與預期DNA表達片段大小一致；PZA31PPSATKTA重組質(zhì)粒測序顯示，克隆的TKTA和PPSA基因序列與報告序列完全相同。工程菌PPSA和TKTA酶活性U與對照菌株比較，分別提高了3和35倍分別為025±004VS008±002，P005；021±003VS006±002，P005；確定了適合工程菌發(fā)酵的培養(yǎng)基，工程菌實驗室發(fā)酵瓶發(fā)酵的最優(yōu)條件為發(fā)酵瓶裝量為100ML、葡萄糖濃度為1％、誘導劑濃度為05MM。色氨酸產(chǎn)量GL與對照菌株比較，提高了13倍110±005VS080±005，P005。結(jié)論成功克隆中心代謝途徑上兩個關(guān)鍵酶基因PPSA和TKTA，與對照菌株比較，重組菌酶活分別提高了3和35倍。改造了大腸桿菌色氨酸生物合成的中心代謝途徑，使碳源流向中心代謝途徑，為構(gòu)建高產(chǎn)色氨酸基因工程菌，進一步提高色氨酸產(chǎn)量打下基礎(chǔ)。實驗室發(fā)酵瓶發(fā)酵的實驗摸索了最適培養(yǎng)基和優(yōu)化了培養(yǎng)條件，工程菌ECOLIMG1655△RTRPZA31PPSATKTAPZE12AROGFBRTRPEDFBR色氨酸產(chǎn)量達到13GL。為下一步利用發(fā)酵罐發(fā)酵工程菌打下了基礎(chǔ)。

簡介：該文對浸礦微生物嗜中溫的氧化亞鐵硫桿菌氧化硫硫桿菌和氧化亞鐵微螺旋菌在硫化礦物氧化過程中的作用機理及其生物氧化體系中各種物理化學因素的影響做了詳細研究依據(jù)嗜中溫細菌的生長特性和硫化礦物的物理化學性質(zhì)利用生物氧化過程各種參數(shù)的變化對含砷難處理的含金硫化礦物生物氧化過程進行了系統(tǒng)的分析和探討完善了生物氧化預處理工藝并進行了工業(yè)應用對黃鐵礦和毒砂兩種單礦物進行了生物氧化和化學氧化的微觀機理研究從而提出了生物對硫化礦物選擇性接觸氧化機理及其作用模型論文對生物氧化預處理體系的工程化系統(tǒng)進行了詳細的闡述對高效節(jié)能生物反應器、多孔溶氧充氣攪拌剪切分散系統(tǒng)、生物氧化后有害離子的脫除分離系統(tǒng)、氧化廢液中和處理系統(tǒng)、生物氧化工藝所需的輔助系統(tǒng)、生物安全性和環(huán)境保護等問題進行了詳細討論對影響含砷難處理金礦石生物氧化預處理工藝的各種因素的系統(tǒng)研究解決了中國首次靠自己技術(shù)建立的工業(yè)化生物氧化預處理提金廠所遇到的技術(shù)問題使工藝條件更加完善生產(chǎn)技術(shù)指標達到了世界先進水平

簡介：由交通事故、建筑事故、工傷、腫瘤及各種疾病導致的骨缺損病人數(shù)量日益增加。目前，最常應用的自體移植雖能較快的修復骨缺損，但自然資源相當有限；作為外科骨重建基本方法的脫鈣骨基質(zhì)缺乏自體骨所具有的生物活性，而且可能會有攜帶疾病的危險并有免疫排斥反應。傳統(tǒng)的生物材料，包括生物陶瓷、玻璃、金屬和高分子材料，因為不具有生物活性，對骨組織進行修復之后，會產(chǎn)生許多固有的問題，如結(jié)合差、磨損、腐蝕，特別是無法形成“活”的具有生物功能的骨組織，難以從根本上解決患者的痛苦和實現(xiàn)缺損部位的功能。組織工程為骨缺損修復提供了一種最佳的解決方案。國內(nèi)外生物材料科學工作者在骨組織工程支架材料方面進行了大量的研究工作，也取得了一定的研究成果，并且某些產(chǎn)品已經(jīng)應用于臨床，但目前仍存在大量問題，陶瓷材料難以降解，聚乳酸PLA和聚乳酸羥基乙酸共聚物PLGA降解產(chǎn)物為酸性，不利于新組織的生長。膠原蛋白羥基磷灰石納米晶復合支架材料具有良好的生物相容性和骨組織修復能力，可以真正實現(xiàn)“骨組織體內(nèi)重建”，是一種有應用前景的骨組織工程支架材料。然而，高質(zhì)量的膠原蛋白提純成本高，并且需要去除末端肽以降低抗其原性，所以價格昂貴，這是材料難以推廣應用的原因之一。此外，傳統(tǒng)膠原海綿支架是將膠原溶解，通過戊二醛等交聯(lián)劑進行交聯(lián)重建得到的，而戊二醛會隨著膠原支架在體內(nèi)降解后釋放，這可能會對機體產(chǎn)生毒性；高分子及其復合支架材料的初始強度都較低。因此，目前世界范圍內(nèi)迫切需要成本較低、生物活性高、可實現(xiàn)體內(nèi)骨組織重建和初始強度高的高性能骨組織工程支架材料。豬皮脫細胞真皮基質(zhì)PADM已經(jīng)作為皮膚修復材料用于燒傷和其它皮膚缺損的治療，由于其良好的降解特性，天然的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)和優(yōu)異的生物相容性和生物活性，取得了很好的治療效果。而且PADM主要由I型膠原組成，與骨組織主要有機組成相似。本研究以PADM為有機基質(zhì)，納米羥基磷灰石為無機組成，通過仿生礦化法制備了具有二級三維多孔結(jié)構(gòu)，價格低廉，力學強度高，易于立體裁剪，可控生物降解，生物相容性好的PADM羥基磷灰石PADMHAP骨組織工程復合支架材料，并研究了其生物活性。本論文主要包括以下幾個方面的工作1豬脫細胞真皮基質(zhì)的提取及表征綜合堿處理、酶處理、表面活性劑SDS處理和鹽處理四種制備脫細胞真皮基質(zhì)方法的優(yōu)點，探索出了新的PADM制備工藝。蘇木精伊紅HE染色和掃描電鏡SEM分析都表明采用本方法制備的支架材料中沒有細胞殘余，膠原的天然結(jié)構(gòu)被完整保存。支架的連通孔結(jié)構(gòu)及孔徑大小隨PH值改變而變化，傅里葉變換紅外光譜FTIR結(jié)果表明PADM與市售的SIGMA公司的高純膠原的圖譜一致?？偘被岷糠治霰砻?，隨著酶濃度的增加，所制備的PADM支架中總氨基酸含量逐漸降低。隨著酶濃度的增加及處理時間的增長，羥脯氨酸的含量升高，極限拉伸強度降低，PADM體外降解速率加快。2二級三維多孔結(jié)構(gòu)PADMHAP復合支架的體外構(gòu)建及表征豬脫細胞真皮基質(zhì)為軟組織來源，而且在提取過程中，天然膠原結(jié)構(gòu)被完整保存，膠原分子中氨基酸殘基較少，因此原膠原分子表面有利于無機納米羥基磷灰石HAP成核的活性位點變少?；诖?，本研究提出了兩步礦化法，即預鈣化和模擬體液中SBF中仿生礦化。預鈣化過程對促進HAP在PADM支架中快速成核生長起到重要作用，而在SBF中仿生礦化過程有利于HAP納米網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的形成。通過兩步礦化過程將HAP納米結(jié)構(gòu)組裝到PADM中，構(gòu)建了具有二級三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的HAPPADM支架。在SBF中礦化15天后的HAPPADM支架，不僅保存了來源于天然PADM的大孔100ΜM，而且在大孔的孔壁表面自組裝形成HAP納米結(jié)構(gòu)網(wǎng)絡(luò)3二級三維PADMHAP網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)形成機理研究對兩步礦化過程中片狀羥基磷灰石在PADM中的形成過程進行了研究。FTIR和能譜分析EDS結(jié)果表明在預鈣化過程中有CA2和HPO42被PADM支架所吸附，但它們并沒有直接沉淀形成磷酸鈣晶體，而是以離子的形式吸附在膠原分子表面。SEM觀察結(jié)果顯示礦化八天后有片狀HAP晶體在PADM表面形成，高分辨電子顯微鏡HRTEM及電子衍射結(jié)果表明片狀HAP晶體沿C軸在PADM孔道表面生長。FTIR和熱重差熱綜合熱分析TGDTA證明該過程形成的羥基磷灰石為含碳酸鹽磷灰石。本文在分子水平上對兩步礦化過程進行了初步模擬，借助雙電層EDL理論解釋了預鈣化過程中HPO42和CA2在膠原表面的吸附能夠促進羥基磷灰石在PADM中快速形成。4PADMHAP復合支架的蛋白吸附性能研究及其對細胞活性的影響通過兩步礦化法，改變生物礦化時間，制備出兩種PADMHAP十天礦化PADMS10D，十五天礦化PADMS15D復合支架，通過測量計算得PADM、S10D和S15D的孔隙率分別為875％、875％和80％。纖維蛋白原和白蛋白吸附實驗表明PADM比S10D和S15D有更高的蛋白吸附能力，在412小時內(nèi)蛋白吸附達到最大量。支架的蛋白吸附和脫附性能明顯影響了MC3T3E1細胞在支架上及支架周圍的活性。對三種支架進行培養(yǎng)基預吸附，培養(yǎng)48天后，種植在PADM及S10D支架上的細胞表現(xiàn)出明顯的增殖，而S15D支架上的細胞卻因胎牛血清FBS濃度過底而沒有增殖現(xiàn)象。結(jié)果表明，羥基磷灰石在支架中的含量增加減弱支架的FBS吸附能力。5HAPPADM的生物相容性及生物活性研究將不同礦化時間的支架材料移植到大鼠肌肉中進行體內(nèi)生物相容性分析。HE染色結(jié)果表明PADM、S10D和S15D都有良好的體內(nèi)生物相容性。肌肉種植30天后，支架中都有不同程度的成血管現(xiàn)象，60天后，血管現(xiàn)象明顯。羥基磷灰石在支架中含量越多，支架的降解速率越慢，體內(nèi)種植60天后，PADM被完全降解掉，S10D被大部分降解，S15D中因含有較多納米羥基磷灰石而在120天后才明顯降解。支架材料移植到大鼠體內(nèi)后，材料及降解產(chǎn)物都沒有明顯的免疫排斥反應。將PADM及S15D移植到大鼠下頜骨4MM臨界骨缺損處，15周后取出下頜骨缺損部位進行HE、X光和MICROCT分析，結(jié)果表明修復過程是由缺損周邊向中間進行，羥基磷灰石在PADM中的的組裝明顯加快骨缺損修復。

簡介：菊糖作為一種天然功能性食品配料，其所發(fā)揮的巨大保健作用及品質(zhì)改良作用正逐漸得到體現(xiàn)。但是國內(nèi)生產(chǎn)菊糖的廠家不多，提取工藝不盡相同，不同的原料預處理方式，提取時溶劑的選擇，時間，PH值，溫度，固液比等因素的控制，以及不同的后處理方法，對菊糖的得率及純度會產(chǎn)生很大的影響。為了提高菊糖的提取得率及純度，有必要對現(xiàn)有的幾種工藝進行優(yōu)化，尋找出一條簡便、合理的工藝路線應用于菊糖的工業(yè)生產(chǎn)中。為了擴大菊糖的應用范圍，本論文也初步研究了菊糖在酵母菌上的應用。在本論文中，通過分析檢測菊芋提取液中的總糖吸光度、還原糖吸光度、提取液的顏色等指標來考察不同預處理方法對菊糖提取率的影響，以及不同原料形態(tài)對菊糖提取率的影響，從中確定出合適的預處理方法和原料形態(tài)；在考察對菊糖提取影響較大的提取溫度、提取料液比和提取時間時，分別進行了它們的單因素試驗，確定了菊芋提取時的溫度、料液比和時間的最適范圍；并對這三個因素進行了正交設(shè)計試驗，對菊糖的提取工藝進行了優(yōu)化；在考察提取液的脫色處理時，通過檢測提取液脫色前后顏色的變化程度和總糖的損失率來判斷可用于提取液脫色的活性炭種類；通過單因素試驗，考察了脫色過程中的脫色時間、脫色溫度和活性炭用量對脫色效果和總糖損失率的影響，確定了脫色時合適的時間、溫度和用量范圍；通過正交設(shè)計試驗，對提取液的脫色工藝進行了優(yōu)化；對提取液的醇沉進行了研究，探討了合適的醇沉濃度；在研究菊糖在酵母菌中的應用時，將菊糖作為碳源部分替代葡萄糖，加入到酵母的培養(yǎng)基中，通過比較加菊糖與不加菊糖的培養(yǎng)基中的酵母菌的生長狀態(tài)，考察菊糖對幾種酵母菌的生長是否有促進作用。試驗結(jié)果表明干制菊芋片的菊糖提取率較高，且易于儲存，是一種較為合適的菊芋預處理方法；菊芋的原料形態(tài)對提取結(jié)果影響很大，粉末狀菊芋有利于加速菊糖的溶解；提取時的時間、溫度和料液比對菊糖的提取率的影響顯著，合適的提取時間范圍為3545MIN，提取溫度范圍是8595℃，料液比范圍是1165195；由提取正交試驗結(jié)果可知，三個因素對菊糖提取率的影響程度為提取溫度＞固液比＞提取時間，得到的優(yōu)化工藝條件為提取溫度90℃，固液比118，提取時間為45MIN，此時提取液中的菊糖濃度可以達到23097MGML；在提取液脫色時，粉末活性炭比顆粒狀活性炭的脫色效果更明顯；脫色時的時間、溫度和活性炭用量對脫色效果和總糖保留率影響顯著，通過單因素試驗確定的工藝范圍是脫色時間510MIN，脫色溫度7585℃，活性炭用量3545％；由脫色正交試驗結(jié)果可知，三個因素對脫色的影響程度為活性炭用量＞脫色溫度＞脫色時間，優(yōu)化的脫色工藝為活性炭用量為40％，脫色溫度75℃，脫色時間75MIN和活性炭用量為35％，脫色溫度為80℃，脫色時間10MIN兩組工藝條件；9095％的乙醇濃度對提取液的醇沉效果明顯通過菊糖的應用試驗表明，菊糖可以作為活性干酵母和啤酒酵母的碳源，但對酵母菌生長的影響不顯著。本論文系統(tǒng)的研究了菊糖提取時的多個影響因素，并對提取工藝進行了優(yōu)化，也研究了提取液的脫色方法和影響因素，優(yōu)化了提取液的脫色工藝，對研究該天然產(chǎn)物的提取工藝有一定的參考價值；本論文中也初步探討了菊糖在酵母菌生長中的應用，為擴大菊糖在生物工程領(lǐng)域內(nèi)的應用范圍提供了思路。

簡介：黃姜皂素是合成皮質(zhì)激素、性激素、蛋白同化類激素等1000多種藥物的理想原料，占甾體激素藥物原料的60％左右，被譽為“藥用黃金”。黃姜皂素在薯蕷屬植物中以黃姜皂苷形式存在，被黃姜細胞壁中大量的木質(zhì)纖維素、半纖維素和果膠質(zhì)等物質(zhì)包裹，一直以來，黃姜皂素的生產(chǎn)提取技術(shù)均離不開大量酸水解，對周圍環(huán)境尤其是南水北調(diào)工程水質(zhì)造成了極其嚴重的污染。為解決黃姜皂素產(chǎn)業(yè)“污染大、收率低、成本高”等瓶頸問題，本研究建立了一種利用微生物技術(shù)清潔生產(chǎn)黃姜皂素的新工藝，并對其過程機理及工程化應用展開了詳細研究。（1）首次對儲藏過程中鮮黃姜的有用成分如水解糖和黃姜皂素的含量變化規(guī)律展開研究，確定了室外全天露天這種儲藏方式下水解糖含量及黃姜皂素含量最高，且儲藏期為27天時黃姜皂素積累最高，這時進行黃姜皂素生產(chǎn)加工較為理想。并確定了影響黃姜儲藏過程中皂素含量變化的主要因素是糖基轉(zhuǎn)移酶、糖苷酶等一系列植物內(nèi)源酶的轉(zhuǎn)化作用，能分泌相關(guān)酶的根際微生物也會起到類似作用，且本實驗結(jié)果表明植物內(nèi)源酶所起到的轉(zhuǎn)化作用大于根際微生物的作用。（2）通過對比分析微波、超聲、低壓蒸汽膨化這三種預處理方式對黃姜皂苷釋放百分數(shù)及其對應的皂素提取率的影響，表明了低壓蒸汽膨化預處理技術(shù)最能促進黃姜中皂苷釋放，提高皂素提取率。并通過原子力顯微鏡（AFM）及掃描電鏡圖片（SEM）對比分析三種預處理技術(shù)對黃姜顆粒微觀結(jié)構(gòu)的影響，揭示了低壓蒸汽膨化預處理對皂苷釋放具有更好效果的機理AFM與SEM結(jié)果表明低壓蒸汽膨化預處理對黃姜顆粒表面結(jié)構(gòu)破壞程度最大，它不僅可以從一定程度上瓦解黃姜顆粒的細胞壁層，還能最大程度分散并破壞淀粉顆粒等，從而顯著提高后續(xù)酶解效率及細胞內(nèi)黃姜皂苷釋放百分數(shù)。（3）根據(jù)不同酶處理對黃姜皂苷釋放百分數(shù)及對應皂素提取率的影響的研究結(jié)果，篩選并純化獲得了6株能有效降解黃姜組織并釋放黃姜皂苷的菌株，將其中效果最好的19＃菌株進行菌種鑒定并命名為BACILLUSPUMILUSHR19。采用響應面分析方法優(yōu)化得到其最佳微生物處理條件是處理時間421H，接種量1558％，發(fā)酵溫度為3414℃。此時，黃姜皂苷的釋放百分數(shù)達到8560±134％，對應的皂素提取率為325G100G黃姜干粉。另外，通過對微生物處理過程機理的研究，確定了微生物處理比復合酶處理更能促進黃姜皂苷釋放的原因其一，微生物處理過程中因自身代謝需要及時利用了降解產(chǎn)物從而解除了產(chǎn)物抑制作用，使分泌的酶活一直處于較高水平；其二，微生物能根據(jù)環(huán)境中底物組成及代謝需要合理分泌各種酶以高效降解黃姜原料；第三，微生物對黃姜原料的趨向性也增強了酶降解效率。在此基礎(chǔ)上，本研究首次建立了利用微生物技術(shù)清潔生產(chǎn)黃姜皂素及可發(fā)酵糖的新工藝，與傳統(tǒng)工藝對比，新工藝黃姜皂素提取率增加了621％，提取過程中的水，酸和有機溶劑用量分別減少了925％，970％和970％以上，具有較強的產(chǎn)業(yè)化應用潛力。（4）采用微生物技術(shù)清潔生產(chǎn)黃姜皂素新工藝分別在200L和3T發(fā)酵罐的中試規(guī)模下展開工程化應用研究，由中試生產(chǎn)得到的黃姜皂素產(chǎn)品為白色結(jié)晶粉末，其皂素含量在94％以上，達到了薯蕷皂素控制項目指標（DB42T22772004）。同時，本工藝還得到一種含多種氨基酸和維生素的可發(fā)酵糖液，它可作為發(fā)酵生產(chǎn)眾多發(fā)酵產(chǎn)品的優(yōu)質(zhì)碳源，提供比普通葡萄糖更豐富的營養(yǎng)元素。更重要的是，該新工藝的中試放大研究證實了微生物技術(shù)清潔生產(chǎn)黃姜皂素工藝能從源頭解決黃姜皂素產(chǎn)業(yè)酸用量大、廢水量大，污染嚴重等重大問題。與傳統(tǒng)工藝對比可知，新工藝技術(shù)在提高黃姜皂素收率的同時，極大地減少了生產(chǎn)過程中水和酸的用量（用水量不到傳統(tǒng)方法的10％），并最大限度地減少了廢水的排放，大大降低了廢水COD、BOD、總氮、總磷等各項指標，表現(xiàn)出了顯著的經(jīng)濟效益和環(huán)境效益。

簡介：點擊查看更多連續(xù)流糖蜜廢水活性污泥法生物制氫工程控制技術(shù)的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：該文從當前中水回用處理方法的研究熱點膜生物反應器入手針對中國建筑生活雜排水進行中水回用的膜生物反應器技術(shù)與經(jīng)濟的研究在污染物CODBOD油SSLAS等去除率等方面取得了相應的有實用價值的設(shè)計運行參數(shù)根據(jù)取得的試驗數(shù)據(jù)通過對膜生物反應器設(shè)計實例與傳統(tǒng)工藝設(shè)計相比較在進行技術(shù)經(jīng)濟分析后認為膜生物反應器處理工藝在投資與運行成本上與傳統(tǒng)工藝基本持平而在占地、維護管理、處理水質(zhì)、自動化程度等方面比傳統(tǒng)工藝有較大優(yōu)勢特別適合中水設(shè)施場地不足、原水波動大、管理人員少、出水水質(zhì)要求高的賓館、飯店和公共建筑由此得出膜生物反應器是一項技術(shù)適用經(jīng)濟合理具有市場競爭力的中水回用技術(shù)該文對中水回用方案進行了技術(shù)經(jīng)濟分析應用多目標權(quán)重評分法和序數(shù)評價法對膜生物處理工藝和傳統(tǒng)工藝進行了方案比選并根據(jù)中國國情提出了11項合理化建議這對中水回用技術(shù)膜生物反應器的推廣應用及相關(guān)政策、法規(guī)的建立和完善都有較好的指導意義和參考價值

簡介：生物質(zhì)氣化技術(shù)作為將生物質(zhì)燃料轉(zhuǎn)化為潔凈能源的新興技術(shù)而受到中國政府各級領(lǐng)導和科研人員的高度重視在氣化設(shè)備及燃燒設(shè)備都相繼得到逐步完善的情況下生物質(zhì)氣化集中供氣系統(tǒng)工程質(zhì)量的優(yōu)劣事關(guān)生物質(zhì)氣化集中供氣系統(tǒng)的安全運行和該項技術(shù)的示范推廣正是在這種背景下該文對生物質(zhì)氣化集中供氣系統(tǒng)工程進行了優(yōu)化設(shè)計生物質(zhì)氣化集中供氣系統(tǒng)一般由三部分組成生物質(zhì)氣化機組、燃氣輸配系統(tǒng)和用戶燃氣系統(tǒng)該文對燃氣輸配管網(wǎng)進行了詳細的設(shè)計計算并在多次實踐使用的基礎(chǔ)上對其進行了完善尤其對輸配管網(wǎng)的附屬設(shè)備排水器設(shè)計出了更加安全的新型產(chǎn)品該文對輸氣管道的布線、連接以及敷設(shè)方法都進行了更加合理的設(shè)計對貯氣柜的科學使用及合理施工都有較詳細的介紹并對燃氣使用中最為關(guān)鍵的部分安全距離作了全方位的設(shè)計使得用戶的人身安全及財產(chǎn)安全都有效的得到了保障將理論分析應用于工程實踐以檢驗實際應用效果和運行的經(jīng)濟性

簡介：該論文的研究主要針對生物質(zhì)熱轉(zhuǎn)化利用技術(shù)中的熱解工藝過程由于具有許多獨特的優(yōu)越性生物質(zhì)熱解不但是一種獨立的生物質(zhì)能高效利用轉(zhuǎn)化手段而且是各種熱化學轉(zhuǎn)化過程中非常重要的一個初始階段對該過程進行深入的研究有利于提高中國生物質(zhì)能源的轉(zhuǎn)化利用水平、促進中國對生物質(zhì)能資源的開發(fā)和使用在對生物質(zhì)能利用意義和各種生物質(zhì)能轉(zhuǎn)化利用技術(shù)簡要介紹的基礎(chǔ)上論文首先對生物質(zhì)氣化的研究發(fā)展現(xiàn)狀進行了綜述分別對美國、歐洲和中國目前的生物質(zhì)氣化項目的組織開發(fā)、重要工程和技術(shù)特點等基本情況進行了比較系統(tǒng)、全面的介紹為了對熱解氣化有較深入的了解論文以單顆粒反應系統(tǒng)為研究對象對纖維素和生物質(zhì)在典型流化床反應器中的熱解方程進行了數(shù)值模擬由于堿金屬給生物質(zhì)利用帶來的嚴重危害論文對堿金屬及相關(guān)元素在生物質(zhì)熱解中的析出過程展開了開創(chuàng)性的研究通過分析各種無機元素在生物質(zhì)中的存在形式和在熱解中可能的轉(zhuǎn)化途徑建立了稻桿中鉀元素的熱解析出模型論文最后介紹了一種面向中國農(nóng)村的新穎的中熱值燃氣熱解制氣技術(shù)的開發(fā)與研究

簡介：組織工程學是應用細胞生物學和工程學的原理，研究、開發(fā)修復和改善損傷組織結(jié)構(gòu)和功能的生物替代物的一門科學。將具有良好生物相容性和生物降解吸收性能的生物材料制成具有特定形狀和孔結(jié)構(gòu)的三維多孔細胞支架。多孔支架作為細胞種植、增殖、分化和遷移的載體或基質(zhì)，引導種植在支架多孔結(jié)構(gòu)中的細胞和從周圍組織遷移來的細胞的生長，引導細胞外基質(zhì)的形成和組織再生，同時，支架被逐漸降解排出體外，最終被新生組織接替。其中，支架材料表面與組織細胞直接接觸，材料表面基本性質(zhì)對實現(xiàn)其細胞外基質(zhì)的功能起到非常重要的作用。常常支架本體性能是首選的，而其表面性質(zhì)并不能滿足要求，表面改性提高其生物相容性便很重要了，不可或缺本文首先通過對可生物降解的外消旋聚丙交酯PDLLA和丙交酯乙交酯共聚物PLGA膜進行等離子體表面改性，提高其表面細胞相容性；用等離子體聚合接枝PEG，提高其表面血液相容性；用銅網(wǎng)和PDMS作為圖案罩子貼附在PLGA以及玻璃表面，用等離子體表面改性處理，得到唯圖案罩子鏤空處細胞粘附生長的細胞選擇性生長圖案；并對三維多孔支架的細胞相容性進行了初步的評價；用等離子體等對支架進行表面改性用于提高組織工程支架細胞相容性1組建了細胞學及表征實驗室，參與設(shè)計射頻等離子體反應器，建立生物材料表面改性及細胞學評價的研究平臺。2在PLGA膜表面進行等離子體接枝處理，接枝上PEG，對該膜進行理化學表征，并進行細胞學用NIH3T3成纖維細胞、血小板用源于大白兔的含豐富血小板的血漿相容性試驗。結(jié)果表明細胞相容性明顯提高，血小板表面粘附率明顯降低。3在我們實驗室參與研制兩種應用于組織工程的三維支架，并對它們進行細胞相容性試驗，結(jié)果表明兩種支架在研制過程中，細胞在支架表面和內(nèi)部均能很好地粘附、增值，并分泌細胞外基質(zhì)，沒有造成細胞毒性。因此，PDLLA和PLGA三維多孔支架具有良好的細胞相容性，可用于組織工程領(lǐng)域。4用氧等離子體等對支架進行表面改性，支架親水性明顯提高；用等離子體接枝的方法通過接枝異丙胺錨定膠原對支架表面改性，結(jié)果表明細胞相容性明顯提高。這表明等離子體表面改性的方法是一種提高組織工程支架細胞相容性的良好途經(jīng)。

簡介：本研究通過對釀酒酵母中與乙醇代謝和甘油代謝密切相關(guān)的基因的遺傳操作來提高釀酒酵母乙醇的產(chǎn)量，降低副產(chǎn)物甘油的產(chǎn)生。主要通過三條途徑來研究1缺失編碼甘油由胞內(nèi)向胞外滲透的通道蛋白FPS1P的FPS1，2缺失編碼甘油3磷酸脫氫酶的GPD1和GPD2，3過量表達GLN1和GLT1來解決細胞內(nèi)還原力問題。本文以野生型釀酒酵母菌株DC124為出發(fā)菌株，利用一步基因置換法缺失GPD1和GPD2，利用兩步基因置換法過量表達GLN1和GLT1，利用遺傳學原理通過不同基因型酵母細胞的融合及等位基因的分離及遺傳分析得到了對FPS1，GPD1，GPD2，GLN1，GLT1五個基因進行修飾的各種組合共30株突變菌株。對菌株DC124，L2，ZAL63，ZAL64，ZAL66，ZAL69，ZAL805，ZAL806，ZAL807，ZAL808，ZAL809，ZAL912進行發(fā)酵試驗。通過對試驗結(jié)果的分析發(fā)現(xiàn)，與野生型相比，突變株L2FPS1△∷LEU2ZAL66FPS1△∷LEU2GPD1△∷URA3，ZAL69FPS1△∷LEU2GPD2△∷URA3，ZAL64GPD1△∷URA3，ZAL63GPD2△∷URA3甘油產(chǎn)量分別降低了17％，23％，51％，17％和46％。突變株ZAL63GPD2△∷URA3和ZAL69GPD2△∷URA3FPS1△∷LEU2的乙醇產(chǎn)量較高。突變株ZAL806GLT1PGK1GLN1PGK1的甘油產(chǎn)量與野生型相比有降低趨勢，但乙醇產(chǎn)量沒有升高的趨勢。GPD1和GPD2同時被缺失的ZAL809FPS1△∷LEU2GPD1△∷URAGPD2△∷URAGLT1PGK1GLN1PGK1和ZAL912GPD1△∷URA3GPD2△∷URA3GLT1PGK1GLN1PGK1這兩株突變株雖然沒有甘油產(chǎn)生，但是其乙醇產(chǎn)量不僅沒有提高，相反，有明顯下降趨勢，這可能與GLN1和GLT1的表達量不足有關(guān)。本文還介紹了質(zhì)粒PUC18RYUR的構(gòu)建，利用此質(zhì)?？梢詫崿F(xiàn)對URA3標記基因的重復利用。

簡介：金霉素CHITETRACYCLINE屬于廣譜抗生素，它是從土壤微生物金黃色鏈霉菌中（STREPTOMYCESAUREOFACIENS）分離出來，是四環(huán)素類抗生素家族第一個被發(fā)現(xiàn)的成員。該家族抗生素通過與細菌核糖體30S小亞基的氨酰TRNA位點（A位點）的特異性結(jié)合，阻止肽鏈的延伸，抑制細菌蛋白質(zhì)的合成，從而發(fā)揮抗菌作用。由于抗菌譜廣，治療感染等疾病效果顯著，四環(huán)素類抗生素在臨床上取得了巨大的成功。加上四環(huán)素類抗生素具有獨特的化學結(jié)構(gòu)和抗菌機制，一直到現(xiàn)在，科學家們依然對其保持著濃厚的研究興趣。四環(huán)素類抗生素的研究已經(jīng)涵括了生物化學、微生物學、結(jié)構(gòu)生物學、合成化學、合成生物學和細胞生物學等多個學科。早期關(guān)于四環(huán)素類抗生素生物合成機制的研究，主要集中在金黃色鏈霉菌一些隨機突變株產(chǎn)生的中間體上。但是由于遺傳操作瓶頸，四環(huán)素類生物合成的機制，特別是一些關(guān)鍵步驟，并沒有非常明確的結(jié)論。最近幾年，UCLA唐奕小組通過異源表達和體外生化實驗，報道了龜裂鏈霉菌（STREPTOMYCESRIMOSUS）所產(chǎn)土霉素的生物合成的研究，包括起始單元和后修飾中的幾步氧化反應，人們逐漸了解了四環(huán)素類生物合成的一些細節(jié)。本研究從一株經(jīng)過長期誘變、高產(chǎn)金霉素的金黃色鏈霉菌工業(yè)菌株出發(fā)，首次建立了金黃色鏈霉菌的遺傳操作體系，旨在通過中斷目標基因所積累產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和體外酶促生化反應，揭示金霉素生物合成的分子機制，為合成新的四環(huán)素類化合物和其它Ⅱ型PKS的研究提供理論依據(jù)。本研究根據(jù)已報道的四環(huán)素生物合成基因簇中氯代酶基因序列設(shè)計探針，從金黃色鏈霉菌基因組FOS文庫中成功克隆到完整的金霉素生物合成基因簇。前期工作中，用傳統(tǒng)穿梭質(zhì)粒介導的同源重組方法，始終無法建立金黃色鏈霉菌的遺傳操作體系。根據(jù)分子生物學重組原理，我們改進了方法利用FOS兩個較大同源臂（至少有一個在20KB以上）具有相對較高的同源重組效率，成功地進行了金黃色鏈霉菌的基因敲除。首先在ECOILBW25113中通過入RED重組酶介導同源重組，在FOS11D1包含金霉素合成完整基因簇CTC上將目標基因用ITSPEC片段置換然后利用ECOLIET12567與STREPTOMYCES之間的接合轉(zhuǎn)移體系，將突變后的FOS與金黃色鏈霉菌染色體進行同源重組，得到最終的金黃色鏈霉菌突變株。本研究先后中斷了金霉素生物合成過程中氯代酶基因（CTCP）、合成起始相關(guān)基因（CTCTCTCL）、所有環(huán)化酶基因（CTCDFH）和兩個氧化酶基因CTCXE，通過對突變株產(chǎn)物進行分析，更清晰地闡明了金霉素生物合成途徑。與其它四環(huán)素類抗生素生物合成過程不同，金霉素生物合成過程中存在一步氯化反應，本研究首先將負責氯化反應的氯代酶CTCP進行了中斷。本研究的出發(fā)菌株金霉素的產(chǎn)量達到15GL92％，含有78％左右的四環(huán)素副產(chǎn)物（約12GL）工業(yè)生產(chǎn)過程中，通過向培養(yǎng)基中添加20％GL的溴化鉀KBR抑制氯化反應，用來生產(chǎn)四環(huán)素。將氯代酶基因敲除之后，突變菌株ZT04發(fā)酵產(chǎn)物只積累“干凈”的四環(huán)素，其產(chǎn)量達到工業(yè)水平18GL。分別在天然啟動子和紅霉素強啟動子控制下，將CTCP基因回補到突變株ZT04，均恢復了產(chǎn)金霉素的能力。據(jù)此，我們初步推斷氯代酶負責的氯化反應應該是發(fā)生在最后一步催化四環(huán)素在C7位加上一個氯原子得到金霉素。為了進一步驗證氯代酶CTCP的功能，用在大腸桿菌中異源表達的CTCP（及其輔酶CTCQ）在體外重構(gòu)了該步氯化反應。在體外實驗中，CTCP具有酶分子典型特征既具有酶分子催化底物的立體專一性，又表現(xiàn)出一定的底物柔性。在體外反應中，CTCP專一性地催化4S絕對構(gòu)型的四環(huán)素底物KCAT051±001H1，但是不能夠催化4R構(gòu)型的底物。實驗證實，4S構(gòu)型的四環(huán)素類在體外能夠自發(fā)異構(gòu)為4R產(chǎn)物。我們推測這種轉(zhuǎn)變是一種熱力學平衡過程，4R構(gòu)型在熱力學上更穩(wěn)定，發(fā)酵產(chǎn)物中4S構(gòu)型產(chǎn)物同樣向4R構(gòu)型產(chǎn)物自動轉(zhuǎn)化。與此同時，CTCP能夠催化兩種四環(huán)素結(jié)構(gòu)類似物2乙酰基2脫胺甲酰四環(huán)素2ADTC和6脫甲基四環(huán)素6DMTC產(chǎn)生了痕量的氯代產(chǎn)物，只能通過LCMS檢測到另一種四環(huán)素結(jié)構(gòu)類似物土霉素則不能被氯代。根據(jù)以上實驗結(jié)果，本研究在工業(yè)菌株中提高了氯代酶基因的表達水平，試圖將發(fā)酵過程中少量的四環(huán)素積累完全轉(zhuǎn)化為金霉素。構(gòu)建具有紅霉素強啟動子PERME的基因表達載體，串聯(lián)重復CTCP基因1至5個拷貝，通過鏈霉菌整合型質(zhì)粒分別將它們整合到金黃色鏈霉菌的基因組上，5組突變株不同程度的提高了金霉素產(chǎn)量，最終篩選到一株金霉素產(chǎn)量提高至173％26GL的突變株。RTPCR結(jié)果顯示，金霉素產(chǎn)量的提高與氯代酶轉(zhuǎn)錄水平的提高相一致。但是，所有突變株四環(huán)素積累并不能夠完全消除，只是比例比原始菌株的78％略微下降55％71％，推測原因可能是由于四環(huán)素和金霉素在發(fā)酵一開始就會被外排出細胞。至此，可以得出結(jié)論氯代酶在金霉素生物合成過程中是最后一步反應，負責在四環(huán)素C7位置上加載氯原子，并且由于氯代酶催化效率不高，氯代反應不完全，導致在金霉素發(fā)酵產(chǎn)物中還存在少量四環(huán)素。在Ⅱ型PKS中，四環(huán)素類具有的一個特殊結(jié)構(gòu)是其2氨甲酰結(jié)構(gòu)。已有文獻報道，天冬酰胺轉(zhuǎn)氨酶負責以丙二酸單酰COA合成該起始單元，但是其反應底物和具體反應機制還沒有弄清楚。將CTC基因簇中的天冬酰胺轉(zhuǎn)氨酶基因CTCT中斷，意外地發(fā)現(xiàn)突變株積累以乙?；鶠槠鹗紗卧膬煞N產(chǎn)物2乙?；?脫氨甲酰四環(huán)素4S和4R，約12GL。同時在CTC基因簇中，我們推測另外一個酰基COA連接酶基因CTCL與起始單元2氨甲酰合成有關(guān)該基因只存在于四環(huán)素類生物合成基因簇中，將CTCL中斷，突變株仍產(chǎn)金霉素和四環(huán)素，只是產(chǎn)量均降低到出發(fā)菌株的1％左右。據(jù)此，我們認為四環(huán)素類生物合成過程中，天冬酰胺合成酶CTCT負責起始單元的轉(zhuǎn)氨，?；鵆OA連接酶CTCL負責產(chǎn)物加載到COA上推測基因組上其它的酰基COA連接酶能夠識別乙?；鹗紗卧倭炕パaCTCL的功能，這個特征在其它Ⅱ型PKS中也有報道。將三個環(huán)化酶基因敲除后，根據(jù)突變株積累的產(chǎn)物，本研究明確了金霉素環(huán)化酶對應順序環(huán)化酶CTCH負責金霉素B環(huán)的形成，環(huán)化酶CTCD負責金霉素A環(huán)的形成環(huán)化酶CTCF與土霉素基因中OXYK同源，后者被證實負責第一個環(huán)D環(huán)的形成至于金霉素（包括四環(huán)素類）結(jié)構(gòu)中C環(huán)的形成機制，仍然有待研究。最后，我們通過基因敲除研究了氧化酶的功能將氧化酶基因CTCX敲除后，金霉素（約5GL）和四環(huán)素產(chǎn)量均不到出發(fā)菌株的40％，而且金霉素的比例從92％下降為68％。據(jù)此，本研究推斷CTCX可能不是四環(huán)素結(jié)構(gòu)合成的必需酶，而是可能起輔助其它酶分子的氧化作用。將氧化酶基因CTCE敲除之后，突變株積累和ACTCD相同的化合物而不產(chǎn)金霉素和四環(huán)素，我們推測敲除CTCE時影響了臨近下游基因CTCD的功能，有待進一步實驗驗證。

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