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簡介:中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文組蛋白分子伴侶RTT106的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能研究姓名黃鴻達申請學(xué)位級別博士專業(yè)結(jié)構(gòu)生物學(xué)指導(dǎo)教師施蘊渝吳季輝20100425ABSTRACTIIABSTRACTWEHAVERESOLVEDTHESTRUCTUREOFTHECEDOMAINOFRTT106RTT106MWHICHISASACOMYCESCEREVISIAEHISTONECHAPERONEWITHROLESINHETEROCHROMATINSILENCINGNUCLEOSOMEASSEMBLYRTT106MADOPTSANUNUSUAL“DOUBLEPLECKSTRINHOMOLOGY”DOMAINARCHITECTURETHATREPRESENTSANOVELSTRUCTURALMODEFHISTONECHAPERONESAΒSHEETΒHAIRPINSTRUCTUREINRTT106MWASFOUNDOUTTOBINDHISTONEH3H4APOSITIVELYGEDCONSERVEDREGIONWASIDENTIFIEDINONESURFACEOFRTT106MTHISREGIONWASTHENFOUNDTOBINDDOUBLESTREDDNADSDNAMUTAGENESISSTUDIESREVEALTHATTHEHISTONEDNABINDINGACTIVITIESOFRTT106AREINVOLVEDINSIRPROTEINMEDIATEDHETEROCHROMATINFMATIONTHEREAREANINTRODUCTIONOVERVIEWOFHISTONECHAPERONEINCHAPTER1THEEUKARYOTICGENOMEDNAISCOMPACTEDINTOCHROMATINWHICHHASCOMPLEXDIFFERENTLEVELSOFSTRUCTURETHESTRUCTUREOFOMATINISDYNAMICLYCHANGEDDURINGTRANIONREPLICATIONDNARAPAIREPIGEICINFMATIONINHERITANCEMANYCELLULARPROTEINSAREINVOLVEDINREMODELINGTHESTRUCTUREOFCHROMATININCLUDINGTHEATPDEPENDENTCHROMATINREMODELINGCOMPLEXHISTONECHAPERONETHEHISTONECHAPERONESPLAYIMPTANTROLESINDNAREPLICATIONDEPENDENTTRANIONDEPENDENTNUCLEOSOMEDISASSEMBLYASSEMBLYTHEHISTONECHAPERONESAREALSOINVOLVEDINCELLULARHISTONESSTAGETRANSFERWEFOCUSONSTRUCTUREFUNCTIONOFHISTONECHAPERONESCHAPTER2INTRODUCESTHECELLULARFUNCTIONOFRTT106OURSTUDIESONTHISIMPTANTHISTONECHAPERONERTT106MADOPTSA“DOUBLEPH”DOMAINARCHITECTUREPH1PH2RTT106PH2DOMAINCLOSELYRESEMBLESTHESTARDPHDOMAINWHILEPH1ISADERIVANTOFPHDOMAINWITHIONSEQUENCEINLOOPREGIONSTHETWOPHDOMAINSAREINTIMATELYASSOCIATEDWITHEACHOTHERTHROUGHHYHOBICTYPECONSERVEDRESIDUESTHEOVERALLSTRUCTUREOFRTT106MPOB3MISSIMILARWIEHANRMSDOF27APOSITIVELYGEDREGIONSTRETCHINGACROSSONESIDEOFTHETWOPHDOMAINSISFOUNDTOBINDDSDNATHEPH2DOMAINCOULDBINDH3H4THEΒHAIRPINFMEDBYS12S13STRSISCRITICALINTHISINTERACTIONTHERESIDUESINTHELOOPREGIONOFTHEΒHAIRPINAREHIGHLYCONSERVEDWHENMUTATEDTHEINTERACTIONBETWEENRTT106MH3H4ISABOLISHEDRTT106COULDBINDBOTHDSDNAH3H4INDEPENTLYTHETPEIMMUNOFLUESCENCECHIPEXPERIMENTSREVEALTHAT
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簡介:廈門大學(xué)碩士學(xué)位論文深海PAHS降解菌的多樣性分析及重要降解菌的分子生物學(xué)研究姓名崔志松申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師邵宗澤徐洵20060701摘要第三部分,大西洋沉積物中PAHS降解菌的研究以PAHS混合物萘、菲、芘為碳源富集得到了5個不同的PAHS降解菌群。采用DGGE16SRDNA的V3區(qū)序列、單菌篩選、平板菌落計數(shù)相結(jié)合的方法對這些菌群的結(jié)構(gòu)進行了解析。通過單菌和菌群的DGGE條帶對應(yīng),確定可培養(yǎng)優(yōu)勢菌主要有跟PSEUDOALTEROMONASGANGHWENSIS、NOVOSPHINGOBIUMPENTAROMATIVORANS、MARINOBACTERKOREENSIS、MARINOBACTERVINULENTU、HALOMONASMEEL“DIANA,ALCANIVOROXVENUSTI、DLCNNIVOFAXDIESELOLEI、TISTRELLAMOBILIS、RHALASSOSPIRALUCENTENSIS近緣的菌種,其中PSEUDOATERO岍ONAS、NOVOSPHINGOBIUM、MARINOBACTER、HALOMONAS屬的細菌都有報道過的PAHS降解菌。ALCANIVORAX屬的細菌是報道過的非常重要的烷烴降解菌。而跟“ISTRELJAMOBILIS、THAJASSOSPIRAUCENTENSIS近緣的菌種則沒有PAHS降解的有關(guān)報道。同時對DGGE圖譜中沒有和已分離單菌對應(yīng)的菌群條帶進行回收測序,確定的未培養(yǎng)優(yōu)勢菌主要有解環(huán)菌屬、食烷菌屬的多株細菌、跟THALASSOSPIRA/UCENTENSIS、A1TETOMONASLITOREA、MARINOBACTERSEDIMINUM、MNRINOBACTERIUMGEORG/ENSE、艙£緲LOPHAGNMURATA、銅綠假單胞菌、糞產(chǎn)堿桿菌、食芳香物新鞘氨醇桿菌近緣的細菌,以及一株屬于紅螺旋菌科的細菌。/DARINOBACTER,墟ARINOBNCTERIUM、解環(huán)菌屬、假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、新鞘氨醇桿菌屬中都曾報道過PAHS降解菌,其中解環(huán)菌是海洋環(huán)境中最重要的PAHS降解菌。關(guān)鍵詞多環(huán)芳烴;生物降解雙加氧酶基因
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簡介:石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文黃瓜芽黃突變的分子細胞生物學(xué)特性初步研究姓名李娟娟申請學(xué)位級別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師高劍峰20090601THEPRELIMINARYRESEARCHONTHEMOLECULARANDCELLBIOLOGYOFTHECUCUMBERMUTANTOFVIRESCENTPOSTGRADUATELIJUANJUANBIOCHEMISTRYANDMOLECULARBIOLOGYSUPERVISORPROGAOJIANFENGABSTRACTOBJECTIVE1BASEDONSIXNORMALVARIETIESOFCUCUMBERSANDONEMUTANTOFVIRESCENT,WECOUNTEDTHECELLCHROMOSOMENUMBERSANDSTUDIEDTHEKARYOTYPEANALYSISOFCUCUMBERWHICHPROVIDEDAREFERENCEONTHEGENELOCATIONRELATEDTHECUCUMBERMUTANTOFVIRESCENT2DISCUSSIONABOUTTHEDIFFERENTIALLYEXPRESSEDGENESBETWEENTHEMUTANTOFVIRESCENTANDWILDTYPELEAFTISSUEMETHOD1WEANALYZEDTHERESETSWHICHWEPREPAREDCHROMOSOMESUSINGCUCUMBERROOTSBYCONVENTIONALCOMPRESSIONMETHOD,ANDTHENMADETHEMICROSCOPICALEXAMINATIONSANDMICROGRAPHY2THESUBTRACTIVEHYBRIDIZATIONLIBRARYOFTHEVIRESCENTMUTANTCUCUMBERWASCONSTRUCTEDBYSSHIDENTIFICATIONTHECLONESOFSUPPRESSIONSUBTRACTIVEHYBRIDIZATIONLIBRARYBYRESTRICTIONENZYMEDIGESTIONANDSEQUENCEDTHECLONESWHOSEFRAGMENTSAREBETWEEN200~900BPBYRESTRICTIONENZYMEDIGESTIONNESEQUENCESWEREBLASTEDINTHEGENBANKNUCLEICACIDDATABASEWHICHWEREREMOVEDRESTRICTIONSITESRESULTANDCONCLUSION1INACCORDANCEWITHTHENORMALANDTHEMUTANTCUCUMBERKARYOTYPEANALYSIS,THERESULTSSHOWEDTHATTHENORMALANDTHECUCUMBERMUTANTOFYELLOWVIRESCENT’SCHROMOSOMESAREBOTH2N14THATBELONGTODIPLOIDPLANTANDTHEBASICNUMBEROFCHROMOSOMEIS7KARYOTYPESBELONGTO1AANDTHEYARESYMMETRICALKARYOTYPETHEVARIANCEANALYSISOFDIFFERENTOFCUCUMBERVARIETIESOFCHROMOSOMES’LENGTHMOWEDTHATPO05ITSHOWEDTHATTHEREWASNODIFFERENCEBETWEENNORMALANDTHECUCUMBERMUTANTOFYELLOWVIRESCENTATTHELEVELOFCHROMO∞MES2WEIDENTIFIEDATOTALOF240POSITIVECLONES,INCLUDING152FORWARDSUBTRACTIVELIBRARYPOSITIVECLONESAND88REVERSESUBTRACTIVELIBRARYCLONES206SEQUENCESHAVEBEENSEQUENCEDSUCCESSFULLYAFTERMASTEDANALYSISOF159SEQUENCESWHICHWERETRANSFORMEDTOTHEF’ASL’AFORMATANDSUBMITTEDTOTHEGENBANK,ATLASTWEGOTASERIALSOFNUMBERSFROMGH270133TOGH270291KEYWORDSCUCUMBERMUTANTOFYELLOWVIRESCENTSUPPRESSIONSUBTRACTIVEHYBRIDIZATIONSSH,DIFFERENTIALLYEXPRESSIONGENEN
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簡介:知夫李側(cè)卜七學(xué)巾幼敘文一1一紫杉醇前體生物合成的分子生物學(xué)和抗癌菇類叫噪生物堿的代謝工程指導(dǎo)教師遺傳學(xué)專業(yè)博士研究生唐克軒廖志華教授學(xué)號011023456復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,遺傳工程國家重點實驗室,復(fù)旦一交大一諾丁漢植物生物技術(shù)研發(fā)中上海市邯鄲路220號,中國,200433遺傳學(xué)研究所心摘要紫杉醇的生物合成來源于經(jīng)典的MVA途徑和新近發(fā)現(xiàn)的DXP途徑。為研究紫杉醇前體生物合成途徑的分子生物學(xué),本文首先建立了從成熟的曼地亞紅豆杉等裸子植物的各種成熟組織中提取高質(zhì)量RNA的方法在此基礎(chǔ)上,采用RACE方法從曼地亞紅豆杉中首次克隆了MVA途徑上三個重要基因的全長CDNA,包括TMHMGR曼地亞紅豆杉3經(jīng)基一3一甲基戊二酞COA合成酶基因,TMFPS曼地亞紅豆杉法呢基焦磷酸合成酶基因,TMIPI曼地亞紅豆杉異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶基因同時克隆了DXP途徑上的兩個限速酶TMDXS曼地亞紅豆杉5磷酸脫氧木酮糖合成酶基因和TMDXR曼地亞紅豆杉5磷酸脫氧木酮糖還原異構(gòu)酶基因的全長CDNA克隆了為紫杉醇提供二裕骨架20碳原子的TMGGPPS曼地亞紅豆杉香葉基香葉基焦磷酸合成酶基因的基因組序列,并獲得全長CDNA由于這些基因都是首次從裸子植物中獲得,故對這些基因及其編碼的酶進行了詳盡的生物信息學(xué)分析采用遺傳功能互補的方法驗證了TMHMGRTMFPSTMGGPPS基因的功能,結(jié)果顯示,TMHMGR能夠彌補酵母IRY2394缺失的HMGR功能,TMFPS能夠彌補酵母CC25缺失的FPS功能,TMGGPPS能夠彌補酵母SFNY368缺失的GGPPS功能,證明它們編碼相應(yīng)的功能蛋白在大腸桿菌中過量表達TMIPI推動DXP途徑代謝流向下游流動,促進P一胡蘿卜素的生物合成而驗證了TMIPI的功能SOUTHEM雜交結(jié)果表明,TMHMGRTMFPSTMIPITMDXS在曼地亞紅豆杉中都是其相應(yīng)基因家族的成員NORTHERN雜交結(jié)果表明,TMHMGR在曼地亞紅豆杉根、莖和葉中都有表達,但表達量有差異,TMHMGR在地上部分的表達高于地下部分,這與紫杉醇的藥用部位相一致TMFP‘在根、莖、葉中都有表達,在根和樹千中的表達量沒有明顯差異,在針葉中的表達量高于根和樹千。首次發(fā)現(xiàn)IMGGPPS是一個沒有內(nèi)含子的基因,有本底表達水平,在用甲基茉莉酸處理曼地亞紅豆杉細權(quán)S尖I栩阮七口沈彭淪歲仁WAM戴偉長犯翻洲身月T執(zhí)茜習(xí)腳陽拉摘習(xí)荊跳四I嘴犯書潤自均代月擴口醫(yī)花TIM代謝組的影響提供了重要的材料,同時為利用轉(zhuǎn)基因毛狀根開展長春花抗癌FE類ALL噪生物堿代謝工程莫定了堅實的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞曼地亞紅豆杉、紫杉醉、生物合成途徑、分子克隆、生物信息學(xué)、3輕基一3甲基戊二酞COA還原酶基因、法尼基焦磷酸合成酶基因、異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶基因、5磷酸脫氧木酮糖合成酶基因、5一脫氧木酮糖還原異構(gòu)酶基因、香葉基香葉基焦磷酸合成酶基因、RACE、基因組步移、遺傳互補、功能驗證、抗癌菇類叫噪生物堿、色氨酸脫狡酶、異胡豆昔合成酶、10香葉醇脫氫酶、ORCA3、喜樹、輕基喜樹堿、喜樹堿、長春花、毛狀根、遺傳轉(zhuǎn)化、代謝工程、轉(zhuǎn)基因GENBANKACCESSIONNUMBERSAY277740TMHMGR全長MRNA己釋放AY461811TO功BS全長MRNAAY505129TMD“全長MRNAAY588482TMDRR全長MRNAAY566309TMGGPPS基因組序列已釋放AY453404TMGGPP‘全長MRNA已釋放縮略詞表AACTACETYCOAACETYCOACACETYLTRANSFERASE,乙酞COA乙酞COA一酞基轉(zhuǎn)運酶CDPME4CYTIDINE5DIPHOSPHO2CMETHYLDERYTHRITOL45’一焦磷酸胞昔2C一甲基一D一赤醉醇CDPMEP4CYTIDINE5DIPHOSPHO2CMETHYLDERYTHRITOL2PHOSPHATE45一焦磷酸胞昔卜2C一甲基一D一赤醉醇一磷酸CMK4CYTIDINE5DIPHOSPHO2CMETHYLDCRYTHRITOLKINASE45’一焦磷酸胞昔2C一甲基D赤醉醇激酶DMAPPDIMETHYLALLYLDIPHOSPHATE,二甲基烯丙基焦磷酸DXP1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATE1一脫氧一木酮糖一5磷酸DXPS1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASE1脫氧一木酮糖5磷酸合成酶
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簡介:復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文國產(chǎn)石杉科藥用植物的分子生物學(xué)研究姓名姬生國申請學(xué)位級別博士專業(yè)生藥學(xué)指導(dǎo)教師潘勝利20070401摘要摘要石杉科HUPERZIACCAE植物是一類多年生小型草本植物,土生、附生或生于苔蘚叢中,直立或下垂生長,喜陰涼潮濕環(huán)境。近年來隨著對石杉科植物的開發(fā)和利用,使得石杉科植物資源逐漸減少。因此,對石杉科植物資源有效的合理保護與科學(xué)的開發(fā)利用工作己迫在眉睫。本課題針對這一狀況,為了解決石杉科藥用植物的資源匱乏問題,保證石杉科藥用植物資源的可持續(xù)開發(fā)和利用,進行設(shè)計和研究。本論文首先對我國的石杉科植物的生態(tài)狀況、資源情況、分類情況以及石杉堿甲在石杉科植物中的分布、研究狀況、藥理作用等作了詳細的分析和描述,并著重進行如下研究。1對石杉科植物的分子生物學(xué)研究利用基因組學(xué)對石杉科藥用植物進行研究。通過對不同種石杉科植物的總DNA的提取,選擇葉綠體基因而CL,RPLL6,MATK及PSBATRNH間區(qū)進行PCR擴增并測序,通過序列比對并構(gòu)建系統(tǒng)進化樹進行分析,結(jié)果闡明了石杉科植物系統(tǒng)位置和分類關(guān)系。系統(tǒng)進化樹中石杉科與石蔥屬PHYLLOGLOSUM位于系統(tǒng)樹的姊妹枝,共同組成的進化枝與石松科LYCOPODIACEAE植物平行排列,這一結(jié)果與形態(tài)學(xué)上的分類方法是一致的,支持了將石杉科獨立于石松科植物的分類觀點。對石杉科的屬下分類,系統(tǒng)進化拓撲樹表明,該科植物中明顯的包含了兩個進化枝,即石杉屬植物進化枝和馬尾杉屬植物進化枝,這一結(jié)果提示了石杉科植物中兩個屬的劃分的正確性,確立了石杉科植物的系統(tǒng)分類關(guān)系,即石杉屬HUPERZIA與馬尾杉屬PHLEGMARIURUS的分類方法。這一方法與形態(tài)學(xué)的分類方法相輔相成,這一結(jié)果是對于捷克植物學(xué)家HOLUB對該屬分類的不確定性的有力的答復(fù)。并對屬下的分類做了進一步的研究,系統(tǒng)樹上石杉屬中石杉組和小杉蘭組的植物明顯地被分為兩個聚群,這一結(jié)果同張麗兵、孔憲需的分類學(xué)觀點相一致。由于馬尾杉屬的供試材料不足,其屬內(nèi)系統(tǒng)演化結(jié)果尚不明朗,有待于進一步的研究。本研究還確立了長柄石杉應(yīng)為蛇足石杉的一個變種,這一觀點得到了系統(tǒng)樹的支持。伏貼石杉雖然與小杉蘭在形態(tài)學(xué)上很難區(qū)分,在系統(tǒng)樹上該兩種植物分別聚于不同的演化枝,并有很高的BOOTSTRAP支持率,這一結(jié)果可以明顯的把小杉蘭和伏貼石杉區(qū)分開,伏貼石杉應(yīng)該為一個獨立的種。
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簡介:浙江大學(xué)博士學(xué)位論文硫磺礦硫化葉菌(SULFOLOBUSSULFATARICUSP2)小熱激蛋白(HSP20)分子生物學(xué)特征和功能姓名李東哲申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物化學(xué)及分子生物學(xué)指導(dǎo)教師楊衛(wèi)軍20110610浙江大學(xué)學(xué)位論文似的功能。所有體外和體內(nèi)的分析顯示,SSOHSP20能幫助硫磺礦硫化葉菌抵抗不適環(huán)境的變化。研究硫磺礦硫化葉菌的小熱激蛋白SHSP有助于認識古菌的基本蛋白質(zhì)折疊過程及其熱適應(yīng)性基礎(chǔ),為生命的起源和進化提供更多的信息。關(guān)鍵詞古菌;硫磺礦硫化葉菌;SHSP20;分子伴侶VI
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簡介:內(nèi)蒙古師范大學(xué)碩士學(xué)位論文內(nèi)蒙古園蛛屬蜘蛛的分子生物學(xué)研究(蜘蛛目園蛛科)姓名盧曉亮申請學(xué)位級別碩士專業(yè)動物學(xué)指導(dǎo)教師唐貴明20100501內(nèi)蒙古師范大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTITWASTHEFIRSTTIMEREPORTEDTHATANALYZEDASEQUENCEDATASETOFAPORTIONOFMITOCHONDRIAL12SRRNAGENESEQUENCESOFTHESPIDERSOFPARDOSA9SPECIESININNERMONGOLIA,ANDUSEDCYCIOSACONICAWHICHWASDOWNLOADFROMTHENETWORKANDPARDOSAASTRIGERAWHICHWASDETERMINEDBYOTHERSASOUTSIDEGROUPSBASEDONTHEOBTAINEDDATA,ACONSENSUSPHYLOGENETICTREEOFTHEARANEUSWASCONSTRUCTEDUSINGNJANDMPANDMEMETHODSOFPHYLIPSOFTWAREANDUPGEMAMETHODOFMEGASOFTWARETHEEXPERIMENTALRESULTSASFOLLOWS1PCRAMPLIFICATIONANDDNASEQUENCINGWEREUSEDBYPRIMERS12STL一145035GGTGGCATTTTATTTTATTAGAGC一3’AND12SBIH一142145AAGAGCGACGGGCGGGCGATGTGT3’WECANGETTHEBANDABOUT300BPAFTERTHEELECTROPHORESIS’2AFTERSEQUENCINGFORALLINDIVIDUALS,THELENGTHOFAPORTIONOF12SRRNAGENEWHOSEAVERAGELENGTHIS275BP,ITSAVERAGEBASEISMDAEUPA379%、T372%IC126%、G123%,THEANALYZEDSEQUENCESOF9SPECIESHADANAVERAGEA/THIGHERTHANG/C3AFTERMULTIPLESEQUENCEALIGNING,OFTHESE227VARIABLEAND48WEREALSOPHYLOGENTICALLYINFORMATIVEINPARSIMONYANALYSIS,MUTATIONRATEWAS175%,ITWASPROVEDTHAT12SRRNAGENESEQUENCEISACONSERVATIVESEQUENCE,ANDITWASSUITABLEFORTHESTUDYOFSYSTEMATICDEVELOPMENTINTHESPECIES4THEHIGHESTAMOUNTOFTVANDTSAMONGDIFFERENTSEQUENCESIS47ANDTHELOWEST5THEOCCURINGOFTSISMAINLYCENTEREDONTA,ATANDTVISMAINLYCENTEREDONCTTC5DIFFERENTMETHODSOFPHYLOGENETICTREECONSTRUCTEDBASICALLYTHESAME,9KINDSDIVIDEDINTOTHREETHEGRANITEGRANITEGARDENSPIDERGARDENSPIDERANDTHETYPEANDDISTRIBUTIONOFAFATGARDENSPIDERNORTHERNGARDENSPIDERGARDENSPIDERISONEWITHTHECROSS,CRACKSUDDENGARDENSPIDERGARDENSPIDERTATARMISCELLANEOUSSPOTSGARDENSPIDERBIGBELLIEDASAFOURKINDSOFGARDEN
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簡介:華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文SK66抗菌肽的分子設(shè)計、優(yōu)化表達和生物學(xué)功能研究姓名馮志國申請學(xué)位級別博士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師陳正望20081030華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文II菌強,對抗菌藥物的開發(fā)有重要意義。4SK66-HIS能殺滅子宮頸癌細胞HELA。經(jīng)SK66-HIS處理后,子宮頸癌細胞HELA的貼壁性很快被破壞,大量細胞懸浮并死亡。通過MTT實驗,我們發(fā)現(xiàn)SK66-HIS能夠顯著抑制子宮頸癌細胞HELA的增殖。采用膜片鉗技術(shù),發(fā)現(xiàn)SK66-HIS能在DRG細胞上形成陽離子通道。說明SK66-HIS對癌細胞和細菌的殺滅機制可能相同細胞膜出現(xiàn)大量穿孔、原生質(zhì)泄漏,細胞破裂死亡。5為了研究SK66的抗菌機制,我們?nèi)诤媳磉_并純化了一個融合蛋白TRXSK66,用腸激酶(ENTEROKINASE)裂解該融合蛋白將裂解后的溶液多肽進一步用反相高效液相色譜(RPHPLC)分離、收集各洗脫峰、凍干成功制備了AMASK66,該蛋白在SK66的氮端加了三個非極性氨基酸2個丙氨酸和一個甲硫氨酸。通過對SK66-HIS、AMASK66和TRX-SK66三個蛋白殺滅細菌和癌細胞活性的比較,TRX-SK66沒有殺滅細菌和癌細胞活性,AMASK66殺滅細菌和癌細胞活性大大降低,表明氮端氨基酸對SK66殺滅細菌和癌細胞活性很重要,尤其氮端氨基酸的極性??傊?,我們發(fā)現(xiàn)了一個新的衍生于果蠅的富甘氨酸具有生物活性的多肽,該多肽有抗菌和抗癌多種功能,能夠很方便的大規(guī)模生產(chǎn),具有潛在的商業(yè)價值。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞抗菌肽,序列分析,原核表達,離子交換層析,殺菌活性,抗癌活性,膜片鉗,
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簡介:蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文鼠抗人CD40突變體分子的單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能研究姓名鄭舒丹申請學(xué)位級別碩士專業(yè)免疫學(xué)指導(dǎo)教師張學(xué)光20090501鼠抗人CD40突變體分子的單克隆抗體的研制及其生物學(xué)功能研究中文摘要基因轉(zhuǎn)染細胞L929/CD40WT為陰性篩選細胞,通過間接免疫熒光標記法對雜交瘤細胞株進行篩選,經(jīng)多次克隆化培養(yǎng),最終獲得3株持續(xù)、穩(wěn)定分泌鼠抗人CD40MU單克隆抗體的雜交瘤細胞株,命名為3E4、684和10C5,其重鏈分別為IGG2B、IGGL、IGG3,輕鏈為1C鏈。三株抗體均可用于免疫組織化學(xué)分析,3E4和10C5可用于WESTERNBLOT檢測。雜交瘤細胞株經(jīng)體外連續(xù)傳代40代培養(yǎng),液氮凍存半年后復(fù)蘇,仍生長良好,穩(wěn)定分泌抗體。2鼠抗人CD40MU單克隆抗體的體外生物學(xué)特性研究運用制備的單抗檢測發(fā)現(xiàn),部分惡性B細胞株及上皮性腫瘤細胞株表達CD40MU,其在新鮮腫瘤組織中也有高水平的表達。三株單抗與野生型CD40單抗5C11識別的抗原位點不同,對細胞株的識別譜也不相同。不同于已報道的抗人CD40單克隆抗體,三株單抗能識別多種腫瘤細胞株H08910,H460等以及腫瘤’新鮮組織表達的CD40分子,其中10C5不識別血管內(nèi)皮細胞株EAHY926以及一些正常組織表達的CD40分子。繼而采用抗CD40MU單抗對表達CD40MU的人卵巢癌細胞株H08910的體外實驗初步表明,單抗3E4能夠促進H08910細胞的體外生長,單抗10C5能夠抑制H08910細胞的體外生長,并且促使其凋亡。綜上所述,本研究成功制備了3株特異性鼠抗人CD40MU單克隆抗體,初步探討了CD40MU在腫瘤中的表達及其生物學(xué)意義,證實了腫瘤細胞表達突變的CD40分子;單抗激發(fā)表達相應(yīng)突變的腫瘤細胞后引起了生物學(xué)效應(yīng)促進/抑制腫瘤細胞的體外生長,并且誘導(dǎo)其凋亡。三株特異性抗體的獲得為深入探討腫瘤細胞表達CD40MU分子的生物學(xué)意義提供了物質(zhì)基礎(chǔ),也為腫瘤的靶向生物治療提供了新思路。關(guān)鍵詞CD40,突變體,雜交瘤,單克隆抗體,腫瘤細胞Ⅱ碩士研究生鄭舒丹指導(dǎo)教師張學(xué)光教授
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簡介:湖南師范大學(xué)博士學(xué)位論文多倍體魚轉(zhuǎn)座子的遺傳變異和雌核發(fā)育魚性腺發(fā)育的分子生物學(xué)研究姓名劉東申請學(xué)位級別博士專業(yè)發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師劉少軍20090501雜交后代四倍體鯽魴基因組中完全切離,而在雜交后代三倍體鯽魴基因組中,TRAM序列僅發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換和插入突變,表明在遠源雜交過程中,轉(zhuǎn)座子具有2種分子遺傳變異方式1垂直失活,轉(zhuǎn)座子以點突變的方式積累突變;2隨機丟失,轉(zhuǎn)座子以切除方式脫離于雜交后代基因組。3、通過PCR方法,在4NRB基因組中檢測到一種新的轉(zhuǎn)座子,命名為TTEL屬于TCL家族的第1群。斑點雜交檢測,在大小為176PG的四倍體鯽魴基因組中,該轉(zhuǎn)座子具有880個拷貝數(shù)。本研究首次報道了脊椎動物遠源雜交導(dǎo)致了轉(zhuǎn)座子迸發(fā)。4、利用RACE技術(shù),獲得了三倍體鯽魴、四倍體鯽魴、紅鯽和團頭魴的高遷移率族蛋白1基因MRNA全長序列,其開放閱讀框包含579NT,翻譯成193個氨基酸。序列比較分析表明核苷酸水平上,四倍體鯽魴與母本紅鯽的同源性99%高于同父本團頭魴的同源性97%,三倍體鯽魴與父母本同源性95%低于親本之間的同源性98OA;氨基酸水平上,四倍體鯽魴與父母本的同源性100%高于三倍體鯽魴與雙親的同源性97%。結(jié)果表明遠源物種間的雜交對兩性不育的三倍體鯽魴HMGL基因造成了一定的沖擊,分子遺傳效應(yīng)表現(xiàn)為三倍體鯽魴HMGL基因位點發(fā)生了變異;四倍體鯽魴HMGL氨基酸序列與雙本的完全一致性,克服了等位基因的雜交不親和性,為兩性可育的異源四倍體鯽魴遺傳穩(wěn)定奠定了基礎(chǔ)。5、采用抑制性消減雜交技術(shù),G。卵巢生長期CDNA為驅(qū)動方,異源四倍體鯽鯉雌核發(fā)育第3代第4代G卵巢增殖期CDNA為檢測方,構(gòu)建了一個正向消減CDNA文庫。通過斑點雜交篩選文庫,獲得了73個特異于G。表達的克隆,對其中部分克隆進行了測序。BLASTX搜索結(jié)果表明,一些克隆EDNA推測的編碼蛋白與NCBI數(shù)據(jù)庫內(nèi)已知序列具有明顯的同源性。這些蛋白包括信號識別顆粒9蛋白,
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簡介:分類號學(xué)校代碼10542密級學(xué)號墊0921411018不同倍性鯽鯉相關(guān)分子生物學(xué)特征研究STUDYONRELATEDMOLECULARBIOLOGYOFDIFFERENTPLOIDYCYPRINIDS研究生姓名指導(dǎo)教師姓名、職稱學(xué)科專業(yè)研究方向湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會辦公室二零一二年六月摘要通過紅鯽旱CARASSIUSAURATUSREDVFLR.和鯉魚杏CYPRINUSCARPIOL.屬問遠緣雜交,在其后代成功培育出了異源四倍體鯽鯉群體,目前已繁殖了19代F。一F2,。該群體兩性可育,遺傳性狀穩(wěn)定,為探討魚類多倍體的形成提供了重要研究模型,為多倍體進化的相關(guān)遺傳和表觀遺傳研究提供了良好的實驗材料。以雄性異源四倍體鯽鯉與雌性二倍體日本白鯽CARASSIUSCUVIERI的倍性雜交形成了不育的三倍體湘云鯽。該三倍體、四倍體魚的形成為開展不同倍性魚的生物學(xué)比較研究提供了重要的生物學(xué)平臺。不改變DNA序列而能影響生物體基因表達與表現(xiàn)型的表觀遺傳效應(yīng),對雜交多倍體生物的形成與進化適應(yīng)具有重要的調(diào)控作用。DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的最主要方式,進行異源四倍體鯽鯉及其親本,紅鯽和鯉魚的DNA甲基化研究,探討異源四倍體魚與親本相比所發(fā)生的DNA甲基化模式的變化,甲基化水平增加或降低的程度,甲基化對相關(guān)序列的修飾等內(nèi)容,有助于了解雜交四倍體魚形成所經(jīng)歷的表觀遺傳效應(yīng)。另外,在已有的有關(guān)不同倍性魚育性研究的基礎(chǔ)上,本文開展了促性腺激素FSH和LH的兩類旁分泌調(diào)節(jié)物質(zhì),活化素ACTIVIN及卵泡抑素FOLLISTATIN基因的分子克隆及序列分析,為進一步從遺傳學(xué)角度探討三倍體湘云鯽不育和四倍體鯽鯉可育的機制奠定了基礎(chǔ)。本論文的研究結(jié)果如下1.利用甲基化敏感擴增多態(tài)性MSAP方法分析了紅鯽、鯉魚和異源四倍體鯽鯉的DNA胞嘧啶甲基化模式。根據(jù)條帶的位置和有無情況,顯示在變性聚丙烯酰胺凝膠上的甲基化條帶呈4種不同模式非甲基化CCGG模式;內(nèi)胞嘧啶全甲基化CMCGG模式;外胞嘧啶半甲基化MCCGG模式;還有一種模式在MSPI和HPAII的泳道中都沒有條帶,該位點上可能所有胞嘧啶都被甲基化,
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簡介:中國海洋大學(xué)博士學(xué)位論文鰈形目分類檢索及分子生物學(xué)應(yīng)用模式研究姓名楊俊杰申請學(xué)位級別博士專業(yè)海洋生物學(xué)指導(dǎo)教師張全啟20090601引體系和數(shù)據(jù)庫模式,為分類檢索系統(tǒng)的開發(fā)奠定了數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。2設(shè)計了可兼容不同GTI數(shù)據(jù)庫分類目錄的數(shù)字化分類階元系統(tǒng)?;跇湫蛿?shù)據(jù)窗口TREEVIEWDATAWINDOW,建立了可擴展上下級階元、可任意組合不同階元的數(shù)字化分類階元系統(tǒng)模塊,為動態(tài)應(yīng)用階元組合動態(tài)整合數(shù)據(jù)、開展信息比較分析、構(gòu)建專項數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)操作等奠定了索引目錄結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。3、提出了定距式二歧檢索表BIOSKEY算法。建立了以數(shù)據(jù)過濾模式調(diào)取檢索表的特征性狀并進行組合查詢的方法,討論了傳統(tǒng)二歧檢索表的樹數(shù)據(jù)結(jié)構(gòu)的同組層無序化特征,及其將之與二叉樹結(jié)構(gòu)進行辨分的必要性,為紙質(zhì)分類檢索表的數(shù)字化提供了新的工具。同時,基于各種系統(tǒng)的樹結(jié)構(gòu)相似性、階層體系相似性和物種階元單位的高度一致性,探索了將BIOSKEY算法應(yīng)用于建立支序回溯系統(tǒng),用以集成各類系統(tǒng)信息的可行性。4從序列信息檢索直觀化角度出發(fā),基于MTDNA和NDNA基因組結(jié)構(gòu)和數(shù)據(jù)窗口DATAWINDOWDW,建立了直觀的分子標記熱鍵檢索模式;設(shè)計了通過鼠標控制函數(shù)檢索DNA條碼、分子標記等序列信息,并與分類系統(tǒng)目錄進行階元關(guān)聯(lián)的方法。5研究了大尺寸數(shù)據(jù)庫的快速處理技術(shù),同時建立了不同DOS模式的BLAST、CLUSTAL、PHYLIP軟件包的WINDOWS平臺運行的優(yōu)化環(huán)境。為加速數(shù)據(jù)檢索、提取和數(shù)據(jù)庫重建,設(shè)計了將數(shù)據(jù)存儲DATASTORE嵌入內(nèi)存數(shù)據(jù)塊進行索引化操作的快速算法,為WINDOWS系統(tǒng)中大文件訪問與處理中的I/O與內(nèi)存限制的瓶頸技術(shù)問題。6研究了以平臺模塊方式處理不同分類學(xué)信息的系統(tǒng)設(shè)計與構(gòu)建方法。按分別設(shè)計、系統(tǒng)集成模式,開發(fā)了9個數(shù)據(jù)模塊、9個分類學(xué)功能模塊和3個數(shù)據(jù)處理輔助模塊。各種標準化數(shù)據(jù)用于有序化伺服系統(tǒng)初始化、數(shù)據(jù)庫和檢索索引,或通過程序內(nèi)建函數(shù)轉(zhuǎn)化為分類學(xué)專業(yè)格式如林奈分類目錄、分類檢索表、分子序列表和系統(tǒng)發(fā)育樹等,或為系統(tǒng)的可見與不可見控件如選擇列表、數(shù)據(jù)存儲索引等提供初始化參數(shù)。7針對GTL分類學(xué)信息門戶,基于微軟WEB瀏覽控件建立了物種WEB信息瀏覽與編輯工具,方便于使用者自定制WEB信息的采集與管理,并基于復(fù)合索引實現(xiàn)了WEB信息與系統(tǒng)階元目錄的有效關(guān)聯(lián)。關(guān)鍵詞鰈形目;分類學(xué)信息;數(shù)據(jù)庫;分類檢索表;DNA條碼;系統(tǒng)發(fā)育樹II
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簡介:中山大學(xué)碩士學(xué)位論文大蕉MPRCI基因鹽脅迫應(yīng)答機制的分子生物學(xué)研究姓名張碧佩申請學(xué)位級別碩士專業(yè)遺傳學(xué)指導(dǎo)教師王金發(fā)20100601與其對NA/K的協(xié)調(diào)相關(guān)。4為了探究MPRCI基因?qū)χ仓牦w內(nèi)NA/K水平的影響,我們用ICPAES原子發(fā)散測定脅迫下擬南芥體內(nèi)鈉鉀含量,發(fā)現(xiàn)植株地上莖葉部分的高NA和高K積累直接導(dǎo)致了表型上的敏感。在高NA環(huán)境中,轉(zhuǎn)基因植株的地上莖葉部分NA含量相比野生型和RCI2A突變體最低,而在高K環(huán)境中,該植株地上莖葉部分則顯著積累L,提示MPRU基因可能參與植株地上部分的NA■K調(diào)控過程。5為了研究MPRCI蛋白對質(zhì)膜的物理性質(zhì)的影響,我們分離了擬南芥葉細胞的原生質(zhì)體測定質(zhì)膜流動性,檢測到無論在高NA還是高K處理后,葉細胞的質(zhì)膜流動性會比正常條件的下降,但轉(zhuǎn)基因植株的質(zhì)膜流動性下降程度相對最小,提示MPRCI基因所編碼蛋白可以在高NA或高K環(huán)境中穩(wěn)定膜的流動性以維持膜的功能。6根據(jù)我們的研究結(jié)果并結(jié)合已有的文獻報道,我們提出了一個可能的模型為了闡釋MPRCI及其同源蛋白ATRCL2A的調(diào)控NA/K吸收和排放的作用機制。關(guān)鍵字MPRCIRCL2,擬南芥ARABIDOPSISTHALIANA,鹽脅迫應(yīng)答,細胞質(zhì)膜N
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簡介:II復(fù)Ⅱ太博畢業(yè)論女指導(dǎo)老師管坤良教授熊躍教授雷群英教授趙世民教授限黼峰燃隧愀澄陲T。摘要3ABSTRACT4第一章引言目錄IIM_十∞H∞P硼路5I2哺乳動物的HIPPOJ自路8L3轉(zhuǎn)錄共澈≠TAZ13第二章TEAL轉(zhuǎn)錄因子家族成員介導(dǎo)了轉(zhuǎn)錄共激活子TAZ促進細胞增殖、細胞遷移以及誘導(dǎo)上皮細胞向間充質(zhì)細胞轉(zhuǎn)化的功能2ITEAL家族成員是與轉(zhuǎn)錄菇擻活子TAZ栩E結(jié)合的主要轉(zhuǎn)錄因子2822TEAD家族&璺介0T錄菸№TAZ誘0∞G目轉(zhuǎn)I表達2923TEALI女錄日子與轉(zhuǎn)I共№FTAZ的結(jié)NFTAZ刺馓細M增殖£的孫24TEAD家族轉(zhuǎn)錄因子與轉(zhuǎn)錄共激活于TAZ∞結(jié)對TAZ誘上蝴№向目≈質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)化是需3625TEAL家族轉(zhuǎn)錄目子與轉(zhuǎn)錄井№镕1址白勺結(jié)合NFTAZ促進目№Ⅱ£M的3826討論及參考文獻39第三章ASPP2協(xié)同蛋白磷酸酶IPPL調(diào)控轉(zhuǎn)錄共激活子TAZ的去磷酸化3L自磷&IPROTEINPHOSPHATICLPPI是月拉轉(zhuǎn)錄菇№活予TAZ∞女磷&M日勰32ASPP2促進轉(zhuǎn)錄共融曬子TAZ與蛋自酸酶PPLA的結(jié)合ITAZ的磷№他M平5133ASPP2和蛋自磷酸酶PPIA可U促M擻镕FTAZ曲核定位5434ASPP2和蚩自磷酸酶PPIA日以Ⅷ控轉(zhuǎn)IJ々激镕FTAZ的F游耙基目的基目達5635蛋自碡&酶PROTEINPHOSPL㈣L,PPLT是調(diào)控轉(zhuǎn)共擻活YAP的碡酸酶5836H№與參考女58第四章激酶CⅪ£協(xié)同激酶LATS調(diào)控依賴于SCFL3啊P的E3泛素連接酶的轉(zhuǎn)錄共激活子TAZ的泛素化蛋白質(zhì)降解4I轉(zhuǎn)錄澉活于TAZ的蛋自質(zhì)降解F&鞍F26S蛋自酶體6342轉(zhuǎn)錄撒活子TAZ與SCF小’的町泛索毒矮酶目分目互作月6443I№干TAZ的SET31I&ANQT;/№自LATS磷&化S。R31I的磷酸化對FTAZ與BTRCP∞臺是需的黼44№C∞啪KJM∞1£觸目LAFS∞怍F碡睛化轉(zhuǎn)I菇№十1他目FAZSOTRCP∞結(jié)合6945M自CASEINKIMSEL&M酶LATS∞M”F月拉轉(zhuǎn)R,激镕FTAZ自M7246A№FLM的女索化%GM目LAGS、№目CASEINKI目SC一附的E3泛4接酶7447C%M≈F轉(zhuǎn)I“№F1他∞生日&中的月控作用7648自∞№酶TIPROEINPH僻PHAI戰(zhàn)1,PPIM月轉(zhuǎn)I馓%FTAZ與口TRFP∞結(jié)“日促進TAZ雖
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簡介:學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作和取得的研究成果。本論文中除引文外,所有實驗、數(shù)據(jù)和有關(guān)材料均是真實的。本論文中除引文和致謝的內(nèi)容外,不包含其他人或其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。其他同志對本研究所做的貢獻均已在論文中作了聲明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名輯斌日期訓(xùn)。肜學(xué)位論文使用授權(quán)聲明研究生在校攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬南京師范大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保存本學(xué)位論文的電子和紙質(zhì)文檔,可以借閱或上網(wǎng)公布本學(xué)位論文的部分或全部內(nèi)容,可以采用影印、復(fù)印等手段保存、匯編本學(xué)位論文。學(xué)??梢韵驀矣嘘P(guān)機關(guān)或機構(gòu)送交論文的電子和紙質(zhì)文檔,允許論文被查閱和借閱。保密論文在解密后遵守此規(guī)定保密論文注釋本學(xué)位論文屬于保密論文,保密期限為年。靴論文作者簽名夠獻日期沙/,.F.,礦指導(dǎo)教師簽名芴糯日期必糾.S.訕C蘆’L’√。摘要摘要洲ILLIIL1LLLLILLIILLY192204220072010年,中國黃海海域連續(xù)4年發(fā)生大規(guī)模綠潮,綠潮的優(yōu)勢種是滸苔ULVAPROLIFERA。衛(wèi)星數(shù)據(jù)分析表明這次綠潮是在黃海南部海域江蘇外海形成,并在季風(fēng)和海洋環(huán)流的作用下漂移到青島,部分研究認為江蘇近海的紫菜栽培區(qū)和海水養(yǎng)殖池塘等區(qū)域是黃海綠潮滸苔的可能來源地。弄清江蘇海域綠潮生物的具體物種、分布范圍、發(fā)生特點,對研究黃海綠潮的發(fā)生機制顯得尤為重要。2009年4月,江蘇省啟動了“江蘇海域綠潮生物調(diào)查”的項目。作者隨項目組在2009年4月至2010年3月間,對江蘇近海海區(qū)、海島、岸基、河口、沿海養(yǎng)殖池塘和紫菜栽培區(qū)的6個居群、27個站位,約5萬KM2的區(qū)域32.34AN、119.1220E進行了定期調(diào)查,系統(tǒng)分析了調(diào)查區(qū)域內(nèi)綠潮物種、分布、發(fā)生及其與環(huán)境因子間的關(guān)系。本研究以形態(tài)學(xué)鑒定為主,結(jié)合分子系統(tǒng)學(xué)研究的手段獲得的結(jié)果表明,調(diào)查區(qū)域內(nèi)生存的綠潮藻物種至少有10種,ULVAPROLIFERA和ULINZA是優(yōu)勢物種,UINTESTINALIS和UCOMPRESSA是常見物種;主要物種形態(tài)多變,UPROLIFERA隨棲息環(huán)境、生長季節(jié)表現(xiàn)出復(fù)雜的形態(tài)變化特點;根據(jù)我國以往的海藻區(qū)系研究,UPROLIFERA屬于長江以南沿海分布的物種,ULINZA分布生長在山東半島至遼寧的黃、渤海區(qū)域。海洲灣以南至長江口的黃海南部海域,幾乎沒有綠藻的分類學(xué)研究報道。黃海綠潮的出現(xiàn)引起了各方對該區(qū)域的關(guān)注,目前對本地滸苔群體分類研究中,有學(xué)者根據(jù)分子系統(tǒng)學(xué)研究結(jié)果提出了ULVALINZAPROCERAPROLIFERALPP進化枝。本論文的形態(tài)學(xué)鑒定也總結(jié)出4種具有交叉特征的滸苔物種,結(jié)合前人對滸苔雜交測試的研究,經(jīng)過系統(tǒng)的比較認為部分ULVA近緣種可以互交甚至出現(xiàn)某些變種,該區(qū)域滸苔物種的形態(tài)多樣性與生物學(xué)變遷機制相關(guān)。根據(jù)逐月對養(yǎng)殖池塘和紫菜栽培區(qū)的生物量、溫度、繁殖體等調(diào)查發(fā)現(xiàn)這兩個調(diào)查區(qū)內(nèi)滸苔居群生物量相對較大,其發(fā)生規(guī)律與定生居群相似,但受人為因素影響較大,與海區(qū)綠藻發(fā)生規(guī)律不同,調(diào)查證據(jù)顯示其斷枝與引發(fā)黃海綠潮無直接關(guān)聯(lián);綜合2009年對海區(qū)水溫、海水透光度、海區(qū)綠潮藻發(fā)生規(guī)模、繁殖體分布數(shù)量等指標的調(diào)查發(fā)現(xiàn),U.PROLIFERA是黃海綠潮的主要物種,僅發(fā)生在透明度2M渾濁海區(qū)離岸數(shù)十公里外側(cè),其發(fā)展規(guī)律與水溫密切相關(guān),在13℃時開始出現(xiàn)絲狀的幼藻發(fā)生體,約17℃聚集發(fā)展,25℃以上衰退消失,顯示為獨立種群的發(fā)生特點。關(guān)鍵詞黃海南部海域,綠潮,形態(tài)多樣性,分子系統(tǒng)學(xué),調(diào)查}I
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