簡介：南京農(nóng)業(yè)大學博士學位論文貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學特性研究姓名王君瑋申請學位級別博士專業(yè)預防獸醫(yī)學指導教師姜平20080601貂、狐、貉源犬瘟熱病毒分離鑒定與分子生物學特性研究CDV／SD／M06用D貂源、CDV／SD／M06／L，N貂源和CDV／SD／F06／HB狐源3。貂、狐、貉源犬瘟熱病毒不同分離株H扣N基因序列分析用RTPCR方法對分離的5個CDV分離株的H基因和N基因進行了擴增，并分別將其克隆到PGEMTVEXTOR進行序列測定然后與OENBARD中己報道的CDV毒槲目比較結(jié)果為1H基因5個分離株H基因N協(xié)列同源性均達到975％以上，與國內(nèi)疫苗株CHNE源性為905～918％5個CDV分離株H基因推導的艙序列同源性比較表明HTP與THDL的AA同源性為100％，二者與其他分離毒株間AA序列同源性差別大，分別為879％一99I％；與ELM同源性普遍較低，為897％一918％而CLAN與ONDCRSTEPOORT，CONVAC洧著很高的同源性關系NT同源性分別為968％和972％；TIFF同源性分別為97。】％和956％2N基因54“分離株N基因L腑列同源性均達到945％以上，HTP與THDL的同源性最高998％國內(nèi)疫苗株CLAN與分離株的M序列同源性普遍較低909935％，而與疫苗株OILDERST印OORT的NT同源性高，達到971％從N蛋白齟序列看，分離株之間除HTP、THDL與HDA折列同源性較高99O％以上外，其他分離株之間AA同源性低而CLUL與ONDERSTEPOORT確“著很高的同源性關系，同源性比例達973％本研究結(jié)果提示，HD和刪C病區(qū)域相量巨較遠，但具有較高的同源性，而與FIB具有相對較低的NT同源性，提示野毒株在易感動物上可能存在種屬差異此外，分離毒株壬和N蛋白免疫原性可能與疫苗株有較大差別，可能與CD免疫失敗有關4犬瘟熱病毒實時熒光定量RTIPCR檢測方法的研究按熙CDVN基因序列，設計合成了特異性引物和探針，經(jīng)各反應條件的優(yōu)化，建立了CDV的REALTIME熒光定量RT，PCR4僉測技術用20PMOLJML的引物濃度各1UL和20PMOL／ML的探針濃度03UL、獲得的熒光信號最強，曲線平滑敏感度為124X10刁NG／ML的病毒RNA；與NDV、AIV、NIPV等RNA病毒不發(fā)生交又反應試驗重復性的變異系數(shù)CN分別為23％、25％和42‰對采集的57份臨床樣品進行檢測，熒光RTPC胎測陽性檢出率為93％53／57，而BIOINDISTBITRAPIDCDV試劑盒、常規(guī)RTPCR陽性檢出率分別為702％40／57和719％4I／57，與BZG吩7DIS嗽劑盒和蒂’規(guī)RTPCR的符合率分別為77。2％和789％，而BIO帥IST試劑盒與常規(guī)RTPCR符合率達982％結(jié)果表明，本研究建立的檢測CDV的熒光RTPCR方法具有快速、特異、敏感、可定量，并可同時檢測大量樣品等優(yōu)點，能用于CDV感染的早期診斷和海關檢疫5貉源犬瘟熱病毒H，F(xiàn)和N基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定將貉源CDV分離株的H、F和NN1，N2基因經(jīng)RTPCRF增后，連接到PMDL8T載體，對比測序結(jié)果表明各基因序列正確，并且符合閱讀框規(guī)則然后將各基因亞克隆到真核表達裁體PLRESLNEO礙“，經(jīng)PCR方法和限制酶酶切鑒定成功構(gòu)建了四種重組真核表達質(zhì)粒，分別命名為PIRSTN1、PIRESTN2、PIRESTH、PIRESTF用構(gòu)建的真核重組質(zhì)VⅡI

簡介：’■，L、近江牡蠣天然免疫相關蛋白的分子生物學及功能研究THESTUDIESONMOLECULARBIOLOGYANDFUNCTIONOFINNATEIMMUNERELATEDPROTEINSOFOYSTERCRASSOSTREAARIAKENSIS博士研究生楊受保指導老師吳信忠教授＼TL，，浙江大學博士論文摘要牡蠣等無脊椎動物的天然免疫相關蛋白及其與病原的相互作用是國際病害與分子免疫學研究的熱點問題。類立克次體是一類專性細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性細菌，可引起牡蠣的大規(guī)模死亡，但目前在貝類抗RL0感染機理方面所知甚少。本博士學位論文在對近江牡蠣天然免疫相關蛋白的基因STRAILTOLLOID1IKE。MAK3和P38和／或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的分子生物學進行研究的基礎上，對它們的功能進行了研究，即一方面采用類立克次體對近江牡蠣宿主進行誘導刺激，系統(tǒng)地分析了宿主與類立克次體病原的相互作用即牡蠣STRAⅡ，T01LOID。LIKE，MAK3和P38在類立克次體誘導的宿主免疫反應中的功能、作用機制，以及STRAIL在免疫反應中的信號傳導通路。另一方面本研究系統(tǒng)地探索研究了STRAIL對牡蠣正常血淋巴細胞和腫瘤細胞的細胞毒作用及其作用機制和信號傳導通路。一、關于近江牡蠣STRAIL促細胞凋亡及抗類立克次體感染免疫的研究取近江牡蠣血淋巴細胞，采用TRIZOL法提取總RNA，制備EDNA模板。根據(jù)人和不同動物TRAIL基因序列設計引物，采用RTPCR技術首次在雙殼貝類中獲得了CASTRAIL的編碼序列。該EDNA序列含有一個501BP的讀碼框，編碼一個184KDA的蛋白，該蛋白含有一個典型的TNF結(jié)構(gòu)域。CASTRAIL與人的TRAIL基因同源性較高，兩者的EDNA序列同源性為99％，氨基酸序列的同源性為98％；與草魚的同源性則較低，為42％。各組織原位雜交和RTPCR結(jié)果表明CASTRAIL在牡蠣各正常組織中均有表達，在外套膜、血淋巴和鰓中表達量較高，性腺中表達量很低，提示該基因可能與免疫調(diào)節(jié)有關。通過構(gòu)建重組表達質(zhì)粒PETCASTRAIL，在大腸桿菌中對CASTRAIL進行了誘導表達，并純化蛋白制備了多克隆抗體；同時，利用該抗體對牡蠣TRAIL的亞細胞定位進行了研究結(jié)果表明CASTRAIL在大腸桿菌中得到了高效表達，所制備的兔多克隆抗體的效價為14000；牡蠣TRAIL蛋白主要表達于血淋巴細胞的細胞膜上，是一個跨膜蛋白。隨后利用REALTIMERTPCR、流式細胞儀、DNA電泳、WESTERNBLOTTING和抗體技術等探索研究了CASTRAIL對牡蠣正常血淋巴細胞和腫瘤細胞的細胞毒作用及其作用機制和信號傳導通路。結(jié)果證明CASTRAIL可通過激活死亡受體DR4和DR5途徑引起人類腫瘤細胞HL60的凋亡；對正常牡蠣血淋巴細

簡介：中國農(nóng)業(yè)大學博士學位論文黑腹果蠅亮紅眼突變型的遺傳學和分子生物學特性分析姓名楊軍申請學位級別博士專業(yè)動物遺傳育種與繁殖指導教師連林生吳常信20060601中國農(nóng)業(yè)大學博二學位論文ABSTRACTABSTRACTASANIDEALGENETICMATERIALANDMODELANIMAL，DROSOPHILAMELANOGASTERHASBEENUSEDFORGENETICRESEARCHFORABOUT100YEARSCOMPOUNDEYETRAITSSUCHASEYESHAPEANDEYECOLORAREALWAYSTHEHOTSPOTSFORGENETICRESEARCHTHENORMALREDBROWNCOMPOUNDEYECOLOROFDROSOPHILAMELANOGASTERISDUETOTHEPRESENCEOFTWOTYPESOFPIGMENTSTHEREDDROSOPTERINISSYNTHESIZEDFROMGUANINEVIAPTERIDINEINTERMEDIATESWHILETHEBROWNXANTHOMMATINISDERIVEDFROMTRYPTOPHANVIAFOURENZYMATICREACTIONSTHEPIGMENTPRECURSORTHENTRANSPORTEDINTOPIGMENTCELLSBYTRANSMEMBRANETRANSPORTERSEYECOLORMUTANTSWITHBRIGHTREDEYEWASFOUNDINF2CROSSPROGENYOFBANDPRFLIESAFTERWILDTYPEFLIESCROSSEDTOBANDPRFLIESRESPECTIVELYMUTANTBRIGHTREDEYEFLIESWEREOBTAINEDINF2PROGENYOFWILDTYPEANDBFLIESBUTNOEYECOLORMUTANTSWASFOUNDINCROSSPROGENYOFWILDTYPEANDPRFLIESEVENINF7PROGENYPUREBRIGHTREDEYEFLYLINEWASOBTAINEDBYINBREEDINGTHEMUTANTGENERESPONSIBLEFORTHEBRIGHTREDEYEWASIDENTIFIEDASANALLELEOFSCARLETGENEWHICHLOCATESONCHROMOSOME3AFTERTHEBRIGHTREDEYEFLIESWASCROSSEDWITHTYPEFLIES，UNDERWENTTWOPOINTTESTSWITHVGANDEMUTANTSANDCOMPLEMENTATIONTESTSWITHEYECOLORMUTANTSCN。，ST。ANDV。RESPECTIVELYTHEBRIGHTREDEYEMUTANTFLYLINEWASNAMEDASS亡REYEPIGMENTOFWILDTYPE，B，STB7ANDST。FLIESWASEXTRACTEDANDTHEABSORBANCEWASMEASUREDEYEPIGMENTCONTENTOFDIFFERENTFLYLINESWASANALYZEDBYSIGNIFICANCETESTTHEXANTHOMMATINCONTENTDIFFERENCEBETWEENWILDTYPEANDEYECOLORMUTANTSSTB7ANDST。ISEXTREMELYSIGNIFICANTJP005NOSIGNIFICANTDIFFERENCEOFXANTHOMMATINCONTENTWASFOUNDBETWEEN5，ANDST。FLIESP005BFLIESHAVEMUCHMOREXANTHOMMATINTHANS產(chǎn)RANDST／FLIES‘P如01BUTSIGNIFICANTLYLESSTHANWILDTYPEFLIESPOO1ITISCONCLUDEDTHATLOWLEVELOFXANTHOMMATINCONTENTINTHECOMPOUNDEYEISRESPONSIBLEFORTHEMUTANTBRIGHTREDEYEPHENOTYPESIXPAIMOFPRIMERSWEREDESIGNEDFORAMPLIFYINGSCARLETGENEA75一KB412ELEMENTINSERTIONWITHINEXON4OFSCARLETGENEWASDETECTEDINB，SPANDSTIFLIESWITHTHEFOURTHPAIRPRIMERSTHE412ELEMENTINSERTEDINTO1612‘“BP～1613MBPOFST。SCARLETGENEWITHA450BPLOSSOF5“LTRINTHESAMEDIRECTIONTOSC口MFTRANSCRIPTIONWHILETHE412ELEMENTINSERTEDINTO1722NDBP1723阿BPOFS，SCARLETGENEINTHEREVERSEDIRECTIONTOSCARLETTRANSCRIPTIONRTPCRFOREXONSAMPLIFICATIONOFDIFFERENTFLYLINESWASPERFORMEDSEVENEXONSWITHNOSEQUENCEALTERATIONWEREAMPLIFIEDINWILDTYPEANDBFLIESANDEXONS13WITHNOSEQUENCEALTERATIONWEREAMPLIFIEDINSPANDSTLFLIESTHEREWERENOCDNAPRODUCTSAMPLIFIEDWHICHISCORRESPONDENTTOTHESEQUENCEBETWEENEXON4‘“TO7MKEYWORDSDROSOPHILAMELANOGASTER，EYEPIGMENT，SCARLETGENE，412ELEMENT，INSERTIONMUTATION

簡介：東北林業(yè)大學碩士學位論文分子生物學技術在昆蟲學研究中的應用利用RAPD技術研究東北地區(qū)十八種小卷蛾的親緣關系及落葉松毛蟲卵寄生蜂的分子監(jiān)測姓名劉延濱申請學位級別碩士專業(yè)森林保護指導教師遲德富20040601ABSTRACTTHISPAPERISABOUTTHEGENETICRELATIONSHIPOFTHE18KINDSOFOTETHREUTIDMCLTHSFROMTHENORTHEASTOFCHINABYRAPD，ANDREQUIRESTHEEVOLUTIONINFORMATIONOFTHESESPECIESCOMPARINGTHEPHYLOGENICTREEBYRAPDWITHMORPHOLOGICDESCRIPTIONTHEAUTHORDREWACONCLUSIONTHATITHASREFLECTEDTHEEVOLUTIONLAWPARTLY。THESESPECIESAREDIVIDEDTWOGROUPS，ONEISCAPUAVRGANA，ANDTHEOTHERISTHERESTTHEFEMALEEXTERNALGENITALORGANSOFTHERESTHASASIGNNM，CAPUAYULGANANOTTHESIMILARCOEFFICIENTOFCLEPSISRURINANAANDPANDEMISCINRTAMOLFLECLRTCTIS1，0301，ITISEXPLAINEDTWOKINDS’RELATIONSHIPISVERYCLOSE，ANDTHEYAREMUCHMORPHOLOGICSIMILARONTHEMALEEXTERNALGENIALORGANS，SUCHASBROADUNCBS，CIRCULARVALVAE；THEREAREHAMMERLIKEPROTUBERANCEONTHEFEMALEEXTERNALGENITALORGANSBUTTHEYAREBELONGINGTOTWOGENUSESRESPECTIVELYCLEPSISRURINANAANDCTEPSISPALLIDANAARETHESAMEGENUS，THEIRSIMILARCOEFFICIENTIS00505WHYATPRESENT，THEREISNOTTHEREASONABLEANSWER。INORDERTOSETTINGUPTHETRUEPHYLOGENICTREEAVESHOULDCOLLECTMUCHINFORNAATIONINTHISTHESISTHEAUTHORTHINKITISFEASIBLEFORTHERIBOSOMALITS2INTERNALTRANSCRIBEDSPACERS2DNASEQUENCESUSINGFORTHEIDENTIFICATIONOFTHEPARASITOIDOFDENDROLIMUSSUPERANS’SEGGSTHELENGTHOFITS2SEQUENCESOFTETENOMUSTETRATOMUS，PAC砂NELZROLQSOLITARIUM，OOENCYRTUSPINICOLUSANDDSUPERAMISDIFFERENTCOMPLETELYTOVERIFY也ERELIABILITYTHEDIFFERENTSPECIESDNAWERECOMBINEDANDPCRSWEREPERFORMEDTOAMPLI每SPECIESSPECIFICDNAFRAGMENTSRESULTSFROMSPECIFICITYTRIALSINDICATETHATT11EYCANBEDISTINGUISHEDHOWEVER，THEREMAYBEPROBLEMSONACTUALAPPLICATIONBECAUSETHREESPECIESBELONGTOTHREEFAMILIARRESPECTIVELYANDTHEREISN’TTHECOMPARISONOFTHECLOSESPECIESORTHESIBLING，THEREMAYBESOMEINFERENCETOTHERESULTSWESTILLNEEDPLENTYOFEXPERIMENTSAFTERWARDSKEYWORDSRAPDRELATIONSHIPLITS2；PARASITOID

簡介：Y68448獨創(chuàng)聲明不人聲明所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論又中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得注如沒有其他需要特別聲明的，本欄可空或其他教育機構(gòu)的學位或證書使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學位論文作者簽名導師簽字運場矛7未冬簽字日期2004年閃月釗日簽字日期2004年尸月74日鹽芥TTHELLUNGIELLAHALOPHILA耐鹽生理及分子生物學簽礎研究鹽脅迫下NAK離子在鹽芥、擬南芥中變化趨勢不同。相同鹽度下擬南芥K離子含量的降低幅度要比鹽芥大。鹽芥根中NA含量隨著鹽濃度的升高變化并不大而擬南芥根中NA含量一直隨鹽濃度的升高而升高。擬南芥比鹽芥積累更多的脯氨酸和可溶性糖，滲透勢降低幅度大于鹽芥，可能50300MMOLLNACL沒有對鹽芥造成明顯的滲透脅迫。鹽脅迫下鹽芥葉中MDA含量幾乎不變，而擬南芥MDA含量隨鹽濃度的升高明顯增加。研究結(jié)果表明鹽芥耐鹽性遠高于擬南芥。3鹽芥THPSCS基因克隆及在脅迫條件下的表達分析利用EST隨機挑取克隆測序的策略從鹽芥葉片CDNA文庫分離得到編碼鹽芥0一二氫毗咯一5狡酸合成酶基因的部分。DNA序列。該CDNA片段長約824BP，它編碼‘一二氫毗咯一5梭酸合成酶近C一端的154個氨基酸。BLAST同源性分析表明，該CDNA與已報道的擬南芥P5CS基因同源性最高。NORTHEM分析表明NACLABA、低溫、PEG均誘導P5CS基因的表達，而且P5CS基因的表達具有組織特異性和發(fā)育階段特異性。4鹽芥THTRXHTHGOLS和THSOS3基因克隆及功能分析利用EST隨機挑取克隆測序的策略從鹽芥葉片CDNA文庫分別分離得到編碼鹽芥硫氧還蛋白HTHTRXH、肌醇半乳搪昔合酶THGOLS、鈣感應蛋白THSOS3的全長CDNA序列。鹽芥硫氧還蛋白HCDNA序列全長663BP，編碼118個氨基酸殘基，分子量約129KDA。存在保守的活性中心序列“WCPGPC“ONORTHEM分析表明鹽芥THTRXH基因表達受NACLABAPEG誘導，不受低溫誘導，也沒有組織特異性。THTRXHGST融合蛋白體外表達及活性實驗表明，鹽芥硫氧還蛋白H的確具有H型的活性，最大反應速度VMAX為。0254A650MIRIKM值為。437PMOVL。同時THTRXH也在擬南芥中過量表達，并得到轉(zhuǎn)基因株系。肌醇半乳糖昔合酶THGOLSCDNA序列全長1322BP，編碼337個氨基酸殘基。與其它物種來源的肌醉半乳糖昔合酶具有較高的氨基酸序列相似性。ABANACL均誘導了肌醇半乳糖昔合酶基因在葉中表達在根中的表達與葉不同，明顯受ABA誘導，而NACL的誘導作用非常微弱PEG、低溫既能上調(diào)葉中THGOLS的表達，又能誘導根中THGOLS的表達，說明肌醇半乳糖昔合酶的表達存在組織差異和脅迫誘導的差異。肌醇半乳糖合酶基因THGOLS在擬南芥中過量表達提高了轉(zhuǎn)基因擬南芥種子在含NACL、甘露醇培養(yǎng)基上的萌發(fā)率，根的相對伸長率以及對LICL的耐受能力也明顯好于野生型擬南芥。在幼苗生長階段轉(zhuǎn)基因植株鮮重、干重均高于野生型，尤其是在NACL脅迫下其干物質(zhì)積累明顯較野生型增多。經(jīng)NACL處理的野生型和轉(zhuǎn)基因擬南芥其凈光合速率PN、氣孔導度CI和胞間C伍濃度均降低，但轉(zhuǎn)基因株系光合速率、氣孔導度、胞間C02濃度仍高于野生型擬南芥。野生型擬南芥的氣孔導度對NACI的反應也較轉(zhuǎn)基因株系敏感。山東師范大學博士學位論文

簡介：分類號UDC密級學位論文ANODONTAUNIONIDAEANDHYRIOPSISUNIONIDAEBASED．．0NMORDNOLOGVANDMOLECULARPHOLOGENYOOOOOOOOOO_____■NURN■ZIO一指導教師姓名匭田迦數(shù)援直昌太堂生金抖堂堂陵．，申請學位級別亟±專業(yè)名稱麴物堂論文提交日期窒QQ魚生壘旦論文答辯日期窒QQ魚生魚旦魚目學位授予單位和日期直昌太堂壟QQ魚生旦旦答辯委員會主席評閱人2006年6月日ABSTRACTSHELLMORPHOLOGICALPARAMETERSOFANODONTAEIGHTPOPULATIONS，A．ARCAEFORMIS，A，WOODIANAWOODIANA，A．WOODIANAPISCATORUM，AWOODIANAELLIPTICA，A．MINGORUM，A．CASTANEA，A．1UCIDA，彳．SP．WHICHWASCOLLECTEDINJIANGXIANDHUBEIPROVIENCES，WEREMEASUREDANDANALYSEDBYUSINGCLUSTERANALYSIS，PRINCIPALCOMPONENTANALYSISANDDISCRIMINANTANALYSIS．MEANWHILE，NUCLEOTIDESEQUENCESOFTHEMITOCHONDRIAL16SRRNAPARTIALGENEOFSEVENPOPULATIONSANDRDNAITS1GENEOFSIXPOPULATIONSOFGENUSANODONTAUNIONIDAEWEREMEASURED．ALSO，NUCLEOTIDESEQUENCESOFRDNAITS1GENETWOPOPULATIONSOFHYRIOPSISUNIONIDAEWEREOBTAINED．ACCORDINGTOTHOSEDATA，ANEXAMINATIONOFTAXONOMICSTATUSOFANODONTAANDHYRIOPSISSPECIESWASMADE．THERESULTSAREBELOW1THEPHYLOGENETICTREESBASEDONNUCLEOTIDESEQUENCESOFTHEMITOCHONDRIAL16SRRNAPARTIALGENEANDNUCLEARITSI1GENEOFSEVENPOPULATIONSOFANODONTASUGGESTTHATTHESEPOPULATIONSSHOULDBEDIVIDEDINTODISTINCTTWOGROUPSONEGROUPINCLUDINGA．SP．MADA．ARCAEFORMIS，WHICHISAPRIMARYGROUP；ANOTHERONEINCLUDINGA．CASTANEA，A．WOODIANAPISCATORUM，A．WOODIANAWOODIANA，A．WOODIANAELLIPTICA，AMINGORUM，WHICHISTHELATESTDIVIDEDGROUP．2THESHELLMORPHOLOGICALCHARACTERSANDTHEMOLECULARPHYLOGENETICDATAREVEALTHATA．CASTANEA，A．WOODIANAPISCATORUM，A¨

簡介：中國農(nóng)業(yè)大學博士學位論文煙粉虱寄主植物、生物學特性及分子系統(tǒng)學研究姓名羅晨申請學位級別博士專業(yè)昆蟲學指導教師胡敦孝張芝利200251，7的分子證據(jù)。4四、本研究設計合成了新引物2819的引物，成功應用于PCR。利用MTDNACOL基因片段作標記，研究了我國17個不同地理區(qū)域或寄主的煙粉虱種群。F17個煙粉虱種群只表現(xiàn)為2種單元型HAPLOTYPE，除采自福建甘薯上煙粉虱為另一單元型外CH．FJ，其余16個煙粉虱種群的基因序列在所有對應的位點上是完全一樣的為B型煙粉虱。初步明確了我國B型煙粉虱的分布情況。。、五、對煙粉虱的分子系統(tǒng)學的研究結(jié)果表明在截取的這段序列中，煙粉虱不同種群間的遺傳距離從0．25％到26．65％。B型與蘇丹種群靠近，遺傳距離為5．39％，與其它種群的煙粉虱遺傳距離較大12％；中國福建本地種群CHFJ與印度種群遺傳距離較近為6．7L％；中國另一種群HCCHINA與泰國種群遺傳距離較近為0．77％；貝寧種群與其它種群的遺傳距離差異最大為19．51％到26．65％。從分子系統(tǒng)樹可看出B型煙粉虱與也門種群為同一進化枝中國福建本地種群與印度種群為同一進化枝，西班牙和蘇丹的煙粉虱種群為同一進化枝北美種群為同一進化枝；中國的另一種群與泰國、巴基斯坦種群為同一進化枝，貝寧煙粉虱種群位于樹的根部。B型煙粉虱種群與西班牙和蘇丹的煙粉虱親緣關系較近。其次是印度、中國福建種群，與北美種群和中國的另一種群泰鼠、巴基斯坦種群親緣關系較遠。這為B型煙粉虱是入侵生物型提供了直接的分子證據(jù)。7。關鍵詞煙粉虱；寄主植物；生物學特性；PCR；線粒體DNACOL基因序列；生物型；系統(tǒng)發(fā)育

簡介：中國海洋大學博士學位論文文昌魚分子生物學AMPHIHMGB、AMPHIUBF80和AMPHIPRXV基因克隆、表達與進化研究姓名劉振輝申請學位級別博士專業(yè)海洋生物學指導教師張士璀200361摘要代表了脊椎動物HMGBI、HMGB2和HM683基因分化前的一種前體基因型。通過對UBIQUITIN的系統(tǒng)進化分析，發(fā)現(xiàn)文昌魚UBF80除了具有脊椎動物和無脊椎動物的特征外，還具有自己的一些獨特的特征，從分予水平上支持了文昌魚是脊索動物進化過程中的一側(cè)枝的觀點。發(fā)現(xiàn)文昌魚AMPHIPRXV基因是具有線粒體和過氧化物酶體信號特征MITOCHONDRIALANDPEROXISOMALSORTINGSIGNALS的抗氧化物酶基因通過序列比對，我們把PRXV歸為1一CYS和2一CYS之外的3一CYS類，從而把PRX基因家族的兩種分類方法統(tǒng)一了起來。通過NORTHERNBLOT、DOTBLOT和原位雜交等技術，研究了文昌魚月J】，口IHMGB基因的表達圖式。NORTHERNBLOT和DOTBLOT雜交顯示該基因在成體不同組織中表達差異性很大卵巢表達最強，腸次之。而在肌肉、脊索和精巢中未檢測到雜交信號；在胚胎發(fā)育的不同時期表達也存在差異卵裂期、囊胚期和原腸胚期表達較強。而在神經(jīng)胚期和1天幼蟲期表達減弱。原位雜交分析表明從受精卵到神經(jīng)胚，AMPHIHMGB基因廣泛表達，但隨著發(fā)育的進行，中胚層、內(nèi)胚層和神經(jīng)管的表達減弱，到L天幼蟲期，僅在表皮可檢測到表達。AMPHIHMGB轉(zhuǎn)錄子在胚胎發(fā)育早期的豐富存在表明AMPHIHMGB可能在文昌魚胚胎的有絲分裂中發(fā)揮重要的作用。關鍵詞青島文昌魚，AMPHIHMGB，AMPHIUBFSO，AMPHIPRXV基因克隆，系統(tǒng)進化分析，表達圖式

簡介：山東大學博士學位論文乳脂乳球菌W56抗噬菌體機制的分子生物學研究姓名孔健申請學位級別博士專業(yè)微生物學指導教師馬桂榮2001510山東大學博士論文乳脂乳球菌W56抗噬菌體機制的分子生物學研究和PJW566攜帶有三種不同的R／M系統(tǒng)，分別定義為LIABI，LLABLL和LLABILL。正是因為菌株LLACTISSUBSP．CREMORISW56三種不同的抗性機制之間的相互協(xié)同作用，逃脫一種限制的噬菌體而被另一種抗性機制所切割，所以￡．1ACTISW56在乳酪生產(chǎn)中表現(xiàn)出較強的抗噬菌體特性。這種一個菌株內(nèi)同時含有三種不同R／M系統(tǒng)的現(xiàn)象。在乳酸菌中未見報道。J／本論文主要研究質(zhì)粒PJW566編碼的LLABIIIR／IVL系統(tǒng)。在含有新生霉素的梯度平板上消除MARKER質(zhì)粒PSV2，得到只含有質(zhì)粒PJW566的菌株MGL614PYW5661。經(jīng)過不同限制性內(nèi)切酶的切割和連接，繪制了質(zhì)粒PJW566內(nèi)切酶圖譜，其中質(zhì)粒PJW566上具有唯一的印PI，印HL，NSIL及SACI的酶切位點，含有7個C口I酶切位點。／4用限制性內(nèi)切酶CLAI將質(zhì)粒PJW566DNA不完全消化，所得片段與來自手質(zhì)粒PVC5的氯霉素抗性基因連接，得到一個攜帶有完整LIABIIIRIM基因的質(zhì)粒PJKL，約15．25KB。在質(zhì)粒PJKL中切除約1KB的HINDLII脅一疥II片段，得到質(zhì)粒PJK7，含有PJK7的菌株同時失去了對噬菌體的限制和修飾作用，表明HINDLII．HINDLLI片段對LLABIII基因是必須的。質(zhì)粒PJW566經(jīng)NSIL和SACI雙酶切割，所得片段與來自于質(zhì)粒PSJL327的氯霉素抗性基因連接，得到質(zhì)粒PJK2，含有該質(zhì)粒的菌株MGL614PJK2】具有與MGL614PJKL相同的限制和修飾作用，但生長緩慢。經(jīng)進一步基因亞克隆分析，發(fā)現(xiàn)LLABIII基因位于約5KB的SPHIHINDIIDNA片段上。利用WALKINGPRIMER方法完成了整個L／ABIII基因的核苷酸序列測定。序列分析表明該片段包含一個4572BP的開放閱讀框架ORF，編碼一個

簡介：上海第二醫(yī)科大學博士學位論文神經(jīng)元突觸成份轉(zhuǎn)運的分子和細胞生物學機制研究姓名蔡倩申請學位級別博士專業(yè)神經(jīng)生物學指導教師盛祖杭20050501在本論文工作巾，我們還進一步發(fā)現(xiàn)SYNTABULIN在神經(jīng)元線粒體順行軸漿運輸過程中所發(fā)揮的另一個重要作用。SYNTABULIN屬外周膜相關蛋白，通過它的羧基末端尾部區(qū)域定位至線粒體。采用實時活細胞影像學技術，可見神經(jīng)元中相當數(shù)量的SYNTABULIN與線粒體肓共定位，并能夠沿神經(jīng)元突起共同移動。弘SYNTABULIN特異性SIRNA抑制內(nèi)源性SYNTABULIN的表達或干擾SYNTABULIN與KINESINL重鏈間的相互作用可削弱線粒體在神經(jīng)元軸突中的順行運輸，進而降低了線粒體在其中的正常分布密度。結(jié)果提示，SYNTABUFIN作為一個連接分子還能夠?qū)⒕€粒體細胞器附著在以微管細胞骨架為基礎的馬達分子KINESINI上，并參與線粒體在神經(jīng)元的順行軸漿運輸過程。已有報道，KINESINL作為一個候選馬達蛋白分子，同時參與了神經(jīng)元中SNAP25、SYNAPSINL、谷氨酸受體GLUR2、GAP43和線粒體等各種不同類型突觸成份在軸突和樹突中的運輸過程。隨著對SYNTABULIN與KINESINI重鏈羧基末端尾部序列問直接相互作用的闡明，為深入研究與SYNTABULIN和KINESINI相互作用有關的軸漿運輸過程提供了一個重要線索。綜上所述，SYNTABULIN作為一個連接分子或是接合體復合物中的一個重要組成部分，參與神經(jīng)元中KINESINI所介導的多種物質(zhì)轉(zhuǎn)運通路，如SYNTAXIN和線粒體細胞器沿神經(jīng)元突起的順行軸漿運輸過程。該研究為進一步研究和理解與神經(jīng)元其它重要突觸成份轉(zhuǎn)運相關的分子和細胞學機制以及某些神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機制提供了新思路。國際項尖權(quán)威雜志“自然細胞生物學2004年第10期發(fā)表的新聞專題評論認為，此項研究成果是神經(jīng)生物學領域的一項重大突破。關鍵詞SYNTAXIN，線粒體，KINESINI，微管，馬達蛋白。順行軸漿運輸，膜轉(zhuǎn)運

簡介：廈門大學碩士學位論文杜氏藻RAPD分析及耐鹽分子生物學初探姓名林慧馨申請學位級別碩士專業(yè)生物化學與分子生物學指導教師劉廣發(fā)200081前言一RAPD技術及其應用隨機擴增多態(tài)性DNARANDOMAMPLMEDPOLYMORPHICDNARAPD技術是1990年由美國杜邦公司的科學家JGKWILLIAMS11和加利福尼亞生物研究所JWELSH領導的兩個小組幾乎同時發(fā)展起來的。其核心技術是利用隨機寡聚單引物在整個基因組中尋找結(jié)合位點，進行PCR擴增。它的優(yōu)點可概括為1克服了PCR技術的局限性。PCR技術的雙引物必須與模板的已知某一區(qū)段的保守序列互補，而且擴增出的DNA多態(tài)性有時難以滿足某一物種某一水平的系統(tǒng)學分析；RAPD技術無需模板DNA的任何序列信息，商品化的系列引物可以擴增出足夠量的DNA多態(tài)性，可滿足種及種以下分類單位的進化分析；2速度快，成本低。RAPD無需象RFLP那樣要對DNA提取物進行酶切因而短時間內(nèi)可分析大量樣品3多態(tài)性靈敏度高，可檢測到單個核苷酸的置換。4RAPD引物沒有嚴格的種屬界限，同一套RAPD引物可以應用于任何一種生物的研究，具有廣泛性、通用性。由于這些優(yōu)點，RAPD在分子生物學上的應用十分廣泛，如種屬特異性的鑒定、外源導入基因的追蹤、遺傳作圖、鑒定染色體上特異的DNA片段、進行基因定位和基因分離等。目前國內(nèi)RAPD技術主要是應用于物種系統(tǒng)學研究。大量的研究表明RAPD技術對于種內(nèi)、種間乃至屬問物種的分類學研究都有很高的學術價值12”。二植物耐鹽生物學研究進展幾十年來，科學家們已在植物的整體植株、組織培養(yǎng)和基因工程三個層次對植物的耐鹽機理及培育耐鹽植物進行過研究。在整體植株層次，人們的研究對象十分廣泛，如原核生物的藍藻，真核生物的小球藻、杜氏藻、硅藻、海帶、紫菜等藻類，水蕨、紅萍等蕨類，馬尾松等裸子植物以及大量的被子植物，尤其是農(nóng)作物，如水稻、小麥、大麥、玉米、高粱、馬鈴薯等糧食作物；蘋果、梨、柚、香蕉、葡萄、柑橘等果樹；花生、豌豆、大豆、綠豆、蠶豆、三葉草、苜蓿等豆科植物；菠菜、黃瓜、洋蔥、番茄、萵苣、大蒜等蔬菜棉花、煙草、甘蔗、甜菜、向日葵等經(jīng)濟作物。經(jīng)粗略統(tǒng)計，從整體植株層次上進行過抗鹽機理研究的物種已超過130種。這些研究探討了鹽主要是NACD對植物直接和間接的傷害途徑與機制，植2一

簡介：浙江大學碩士學位論文幾種天然抗氧化劑對DNA的保護作用及其分子放射生物學機制的研究姓名徐兵申請學位級別碩士專業(yè)生物物理學指導教師趙玉芳200151廣L摘要佛為生物遺傳信息貯存的中心DNA，控制著細胞的增殖與分化，其童妻性對生物體是不言而喻的。然而多種理化因素都能造成DNA的損傷，尤以自由基所導致的損傷最為普遍、嚴重。因此，尋找能清除自由基從而對DNA損傷有保護作用的物質(zhì)特別是功能植物材料天然抗氧化劑，具有重要的意義。D7本文主要以茶多酚、銀杏提取物、竹葉提取物等幾種天然抗氧化劑為研究材料，通過超微弱化學發(fā)光分析和熒光光度分析等實驗手段，對”COY輻照和CUS0曠_PHEN_VCH202DNA體系中的OH‘所致DNA損傷的保護作用作了比較系統(tǒng)的研究，獲得了一些新的結(jié)果。F結(jié)果表明＼1茶多酚、銀杏提取物、竹葉提取物均具有清除OH’、02一‘自由基的作用。以茶多酚清除OH的能力最強，其ICSO為1049MG／MH銀杏提取物次之，IC50為1433MG／MH竹葉相對最弱，IC50為1554MG／ML。清除02～’能力也以茶多酚為最強，其IC50為3079UG／M1銀杏提取物次之，為3425UG／ML；竹葉提取物最弱，為3593UG／ML。2茶多酚、銀杏提取物和竹葉提取物濃度的增加對EBDNA體系的熒光強度的抑制率也升高，且有線性關系；濃度為125MG／ML的茶多酚熒光強度抑制率約為O902，同一濃度的銀杏提取物抑制率約為O821，竹葉提取物約為O814。熒光強度抑制率為50％的三種抗氧化劑的濃度較為接近，均約為05MG／ML。結(jié)果表明三種抗氧化劑與DNA相互作用關系均相類似。茶多酚、銀杏提取物、竹葉提取物的熒光抑制率隨濃度的變化有線性關系，不存在飽和性，且抑制率可達95％以上。而多糖的熒光抑制率具有飽和性，且抑制率相對很低，螺旋藻多糖、海藻多糖L、海藻多糖2對熒光強度的飽和抑制率分別為0166，O261，O326。表明此兩類物質(zhì)與EBDNA體系的DNA有不同的作用機制模式。

簡介：浙江大學博士學位論文番茄乙烯受體基因LEETR1和LEETR2的分子生物學研究姓名鄭鐵松申請學位級別博士專業(yè)食品科學指導教師何國慶應鐵進200151適分化培養(yǎng)基上附加的激素分別為BA25MG／LIAAL0MG／L、BA20MG／LIAA02MG／L、BA25MG／LIAA04MG／L、BA20MG／LIAA04MG／L、BA25MG／LIAA04MG／L在最適培養(yǎng)基上它們的芽分化頻率分別為924％、885％、916％、892％和941％。5外植體尤其是下胚軸外植體的放置方式對分化頻率有明顯的影響。采用下胚軸作外植體時，一定要正向放置否則苗再生的頻率會嚴重下降。6番茄品種9551，T9253、ESTRELLA、9209和BL對卡那霉素KM的敏感I性不同。9551、T9253、ESTRELLA和9209在附加25MG／LKM的培養(yǎng)基上其分化即完全受抑制，而抑制番茄B1的再生則需要附加100MG／LKIN。7以中間表達載體PPZPLLLA為基礎。以克隆的乙烯受體基因LEETRL和LEETR2的特異序列為目的插入DNA，構(gòu)建了反義表達載體PPZPEL和PPZPE2。通過PCR和酶切驗證表明LEETRL和LEETR2的反義表達載體已經(jīng)構(gòu)建成功，并已轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中。為下一步的番茄轉(zhuǎn)基因研究奠定了基礎。8以79日齡的番茄BL無菌苗子葉為外植體，根癌農(nóng)桿菌LBA4404PPZPEL、LBA4404PPZPE2、EHAL05PPZPEL和EHAL05∞PZPE2為介導。采用葉盤轉(zhuǎn)化法進行了反義LEETRI和反義LEETR2的遺傳轉(zhuǎn)化研究。在篩選壓力為KM100MG／L的分化培養(yǎng)基和篩選壓力為KM50MG／L的生根培養(yǎng)基上，2種反義轉(zhuǎn)基因番茄各獲得了O82％和091％的陽性轉(zhuǎn)化苗再生頻率通過PCR和SOUTLLEMBLOT的結(jié)果證明已經(jīng)獲得了反義LEETRL和反義LEETR2的轉(zhuǎn)基因番茄植株。親代的轉(zhuǎn)基因番茄目前在溫室中生長良好。同時在進行遺傳轉(zhuǎn)化的過程中我們也對農(nóng)桿菌的類型、農(nóng)桿菌的浸染方式、共培養(yǎng)及預培養(yǎng)時間等多種因素對轉(zhuǎn)化效率的影響進行了研究。證明LBA4404和EHAL05都可有效地進行番茄的遺傳轉(zhuǎn)化9對親代轉(zhuǎn)基因番茄生長特性的初步研究表明，兩種轉(zhuǎn)化植株都表現(xiàn)出了一定的抗衰老特性，但初步觀察其結(jié)果率低于未轉(zhuǎn)化番茄。轉(zhuǎn)化番茄與對照相比在生長特性上的這些差異。預示著乙烯受體基因LETRI和LETR2與番茄的葉片生長和果實發(fā)育過程相關，這一結(jié)果與我們前面對LEETRLMRNA和LEETR2MRNA表達特性的研究結(jié)果相吻合。提示與誘導型的乙烯受體LEETR3NR不同LEETRL和LEETR2作為組成型的乙烯受體主要傳遞乙烯對番茄基本發(fā)育過程的調(diào)節(jié)信號。獲得的反義轉(zhuǎn)化番茄植株為后續(xù)研究提供了寶貴的實驗材料。廠。關鍵詞番茄乙烯受體LEETRLLEETR2反義基因遺傳轉(zhuǎn)化

簡介：山東師范大學碩士學位論文膠州灣細菌多樣性及抗性細菌種類及其抗性基因的分子生物學研究姓名任晶申請學位級別碩士專業(yè)細胞生物學指導教師安利國宋林生20060501山東師范大學碩士學位論文摘要我們利用DAPI染色熒光顯微鏡技術和微生物培養(yǎng)的方法分析2004年9月和10月兩個月份膠州灣海水樣品中的總微生物和可培養(yǎng)細菌的數(shù)量和分布特征。DAPI染色熒光的計數(shù)結(jié)果顯示總微生物數(shù)量為106_107CELLS／ML，與世界上其它位于溫帶地區(qū)的半封閉性海灣微生物數(shù)量的研究結(jié)果相似。其中微生物密度最高10V／M1的區(qū)域分布于膠州灣東北部婁山河和李村河河口及紅島漁業(yè)養(yǎng)殖區(qū)附近。這些區(qū)域的可培養(yǎng)細菌密度在整個膠州灣中也是最高，最高的站位AS站，李村河口附近達到5．1610S／ML。因此，污染類型和程度以及地理和水文學特征是決定膠十T,I灣微生物數(shù)量和分布的重要因素。通過TRFLF分子生物學方法和聚類分析方法研究膠州灣水體的微生物群落結(jié)構(gòu)特征，可將膠州灣內(nèi)外的細菌群落分為3組，膠州灣灣口及灣外的D1，D3，D5，D6，D7站位被劃分為一組，其細菌群落更接近于受到灣外海水環(huán)境影響的細菌群落特征；位于膠州灣最內(nèi)側(cè)的站位，如A3，A5，B2，Y1被劃為一組，代表膠州灣的“土著”細菌群落；C1，C3，C4站位則代表著介于二者之間的過渡性細菌群落。而同時進行的膠州灣光合細菌群落結(jié)構(gòu)的TRFLP分析未見其與地理分布和環(huán)境有明顯相關關系。抗性細菌的分布和數(shù)量主要受到水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中抗生素的使用，以及生活和工業(yè)污水排放狀況的影響，是自然水體環(huán)境的重要水質(zhì)標準之一。對自然水體中的抗性細菌及其抗性基因的研究不僅對漁業(yè)養(yǎng)殖具有重要的意義而且還直接關系到人類的公共衛(wèi)生健康。膠州灣土霉素和氯霉素抗性細菌密度最高的區(qū)域均位于A5站，李村河口附近，說明環(huán)境是影響和決定抗性細菌分布和數(shù)量的重要因素。通過對抗性細菌16SRDNA序列分析和系統(tǒng)進化樹的構(gòu)建，膠州灣內(nèi)的大部分抗生素抗性細菌屬于Y一蛋白菌亞綱7PROTEOBACTERIA，其中氯霉素抗性細菌則表現(xiàn)出非常明顯的假單胞菌屬PSEUDOMONASSP．細菌優(yōu)勢。多重PCR方法分析膠州灣抗性細菌中土霉素抗性基因．TET基因和氯霉素抗性基因．CAT基因的分布特征。在對84株土霉素抗性基因的分析中，所有六種TET基因型．TETA,TETB，TETC，TETD，TETE和TETG撼J被檢測到，其中含量最高的是TETA30．6％，TETB245％，和把TG36．7％。在對60株氯霉素抗性基因的分析中，僅有12株氯霉素抗性細菌被檢測到攜帶有C口崖因，且只包括∞RI和CATIII型。但

簡介：⑨研究生學位論文利用分子生物學技術對偽角毛蟲屬及全列蟲屬纖毛蟲的分類學及系統(tǒng)學研究研究蝴但鎏夔㈣黜塞微波熬授申請學世級剮亟一專IB磣壅生生塑論_蚺阱日期鱉生魚且璺旦輔搬予日期窒Q籩笙墾且中11T海洋大學摘要鄰接NJ樹表明偽角毛蟲屬與全列蟲屬之間能很好地分開，而不同種群間表現(xiàn)了很好的同源性。3利用核糖體DNA限制性酶切片段長度多態(tài)性PCRRFLP技術，檢測了偽角毛蟲屬的多個形態(tài)相似種。各株系差異顯著的PCRRFLP指紋圖譜支持形態(tài)學對偽角毛蟲屬的區(qū)分和定義分析表明，PCRRFLP之多態(tài)性指紋圖譜作為纖毛蟲傳統(tǒng)形態(tài)分類學的輔助手段，可以有效地進行種類區(qū)分。同時，我們的研究表明，PCRRFLP有時可將種群區(qū)分開。4利用單鏈構(gòu)象多態(tài)性PCRSSCP技術，檢測了偽角毛蟲屬PSEUDOKERONOPSIS四個形態(tài)相似種的六個種群。實驗證明，ITSL基因的PCRSSCP圖譜可以很好地用于偽角毛蟲屬形態(tài)相似種的種間及種群區(qū)分。5首次測定了四種五種群偽角毛蟲的ITSI58SITS2基因全序列，長度均為480BP左右；同時測定了四種偽角毛蟲SSRRNA基因全序列，長度約為1770BP；利用幾種序列構(gòu)建的UPGMA系統(tǒng)樹均表明肉色偽角毛蟲與黃色偽角毛蟲親緣關系較近，而青島偽角毛蟲與偽角毛蟲未定種親緣關系較近。二、系統(tǒng)學本工作首次測定了柔弱全列蟲，以及在形態(tài)上十分特殊的的青島偽角毛蟲的SSRRNA基因全序列，以PHYUP軟件中的鄰接法構(gòu)建了系統(tǒng)關系樹，以PAUP軟件構(gòu)建了最大簡約樹，以MRBAYES軟件構(gòu)建了最大似然樹。通過比較和分析幾種系統(tǒng)關系樹中各分類階元間的進化關系，表明全列蟲屬、偽角毛蟲屬極可能均非單系發(fā)生，同時本研究從分子生物學角度支持了二者之間較近的親緣關系三、系統(tǒng)扭F構(gòu)建以纖毛蟲動物中的幾個屬的部分SSRRNA基因為研究對象，初步探討了不同外類群、內(nèi)類群的選擇，有無外類群，同一基因不同長度，不同構(gòu)樹方法及不同分析軟件對構(gòu)建基因樹的影響R，、，關鍵詞分類學，系統(tǒng)發(fā)生，分子標記，全列蟲屬，偽角毛蟲屬，纖毛蟲，●’’2