簡(jiǎn)介：水產(chǎn)微生物學(xué)試題水產(chǎn)微生物學(xué)試題一、選擇題（每小題2分，共計(jì)20分）。1微生物是最小生物的總稱，但不包括（）。A螺旋體B立克次氏體C衣原體D原蟲2測(cè)定細(xì)菌大小的常用單位是（）。ANMBΜMCMMDPM3一個(gè)細(xì)菌芽胞重新形成細(xì)菌繁殖體的數(shù)目是（）。A一個(gè)B二個(gè)C三個(gè)D四個(gè)4芽胞的形成是細(xì)菌的（）。A休眠結(jié)構(gòu)B繁殖形式C某一發(fā)育階段D保護(hù)組織5細(xì)菌的繁殖方式是（）。A有絲分裂B二分裂法C出芽繁殖D復(fù)制方式6紫外線殺菌作用的機(jī)制是（）。A破壞蛋白質(zhì)B干擾核酸復(fù)制C破壞細(xì)胞壁D改變滲透壓7用于預(yù)防免疫的抗原物質(zhì)包括（）。A菌苗B疫苗C類霉素DABC8噬菌體是寄生于細(xì)菌的（）。A衣原體B真菌C病毒D支原體9細(xì)菌在微生物分類系統(tǒng)中屬于（）。A動(dòng)物界B植物界C原生生物界D病毒界10質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外的遺傳物質(zhì)，它是由（）組成。A雙股閉合環(huán)狀DNAB線狀DNAC雙股線狀RNA5抗體6疫苗四問(wèn)答題（每小題10分，共計(jì)40分）1病毒與細(xì)菌有何區(qū)別2敘述病毒增殖的五個(gè)階段。3何謂侵襲力構(gòu)造侵襲力的因素有哪些4何謂特異性免疫其作用有何特點(diǎn)

簡(jiǎn)介：職業(yè)技術(shù)學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院（20082009學(xué)年第二學(xué)期）授課計(jì)劃課程名稱水產(chǎn)微生物學(xué)授課班級(jí)2007高職水產(chǎn)課程總學(xué)時(shí)72本學(xué)期計(jì)劃學(xué)時(shí)72學(xué)時(shí)任課教師教研室動(dòng)科教研室制訂日期2008年9月2日10第七章消毒與滅菌技術(shù)第三節(jié)消毒與滅菌的化學(xué)方法2消毒與滅菌的化學(xué)方法11第八章水域微生物生態(tài)學(xué)第一節(jié)水體中微生物的分布2水體中微生物的分布11第八章水域微生物生態(tài)學(xué)第二節(jié)水域微生物的主要作用2水域微生物的主要作用12第九章傳染與免疫第一節(jié)細(xì)菌的致病性與傳染2細(xì)菌的致病性與傳染13第九章傳染與免疫第二節(jié)免疫學(xué)基礎(chǔ)2免疫學(xué)基礎(chǔ)13第九章傳染與免疫第三節(jié)抗原與抗體2抗原與抗體13第九章傳染與免疫第四節(jié)特與非特異性免疫2特與非特異性免疫14第九章傳染與免疫第五節(jié)免疫防治2免疫防治15第十章微生態(tài)制劑第一節(jié)微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用2微生態(tài)制劑在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用15第十章微生態(tài)制劑第二節(jié)常用的微生態(tài)制劑2常用的微生態(tài)制劑16第十一章水產(chǎn)品與微生物第一節(jié)水產(chǎn)品中的微生物2水產(chǎn)品中的微生物16第十一章水產(chǎn)品與微生物第二節(jié)水產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)2水產(chǎn)品的微生物檢驗(yàn)17實(shí)驗(yàn)一微生物實(shí)驗(yàn)器材、物品的準(zhǔn)備2基本操作17實(shí)驗(yàn)二培養(yǎng)基的配制2基本操作18實(shí)驗(yàn)三微生物的分離、純培養(yǎng)與菌種保藏4基本操作18實(shí)驗(yàn)四顯微鏡的使用2基本操作72

簡(jiǎn)介：呼吸道病毒,呼吸道病毒是指一大類能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病變或僅以呼吸道為入侵門戶，主要引起呼吸道外組織器官病變的病毒。拒統(tǒng)計(jì)，90以上的急性呼吸道感染由該類病毒引起。,呼吸道病毒的分類,呼吸道病毒包括正粘病毒科流感病毒副粘病毒科副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒其他病毒科腺病毒、風(fēng)疹病毒、鼻病毒、冠狀病毒、呼腸病毒,流行性感冒病毒（INFLUENZAVIRUS）,流行性感冒病毒，簡(jiǎn)稱流感病毒，甲、乙、丙三型,引起人和動(dòng)物流感甲型流感病毒是反復(fù)流行最為頻繁和引起流感全球流行的重要病原體。,流感病毒的生物學(xué)性狀,流感病毒呈球形或絲狀，球形直徑8020NM，新分離株絲狀多于球形有包膜，單鏈分片段的RNA病毒。,流感病毒的電鏡照片,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1,2,4,3,5,6,7,8,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,PB2,PB1,RNP,,,RNA,,,,,M2,,M1,,NA,,HA,分節(jié)段的（）SSRNA,,PA,,,RNA多聚酶,核糖核蛋白（RNP）,,流感病毒的表面結(jié)構(gòu),血凝素HA柱狀，為三聚體，它基本上以相同的間距覆蓋了病毒的全部表面HA1（病毒吸附）HA2（核衣殼釋放）保護(hù)性抗原，血凝抑制抗體保護(hù)性抗體神經(jīng)氨酸酶（NA）四個(gè)亞單位組成的四聚體，并不平均分布在病毒表面，而是聚合成群。與病毒釋放有關(guān)。,流感病毒的內(nèi)部結(jié)構(gòu),核衣殼病毒分片段的RNA，結(jié)合有核蛋白（NP）以及與復(fù)制和轉(zhuǎn)錄有關(guān)的三種依賴RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋對(duì)稱?；|(zhì)蛋白（M蛋白）覆蓋在核衣殼外面，M蛋白抗原性穩(wěn)定，也具有型特異性。M1增加包膜厚度M2輔助HA2釋放核衣殼外膜來(lái)自宿主細(xì)胞的脂質(zhì)雙層膜。,流感病毒的結(jié)構(gòu),,核心,分節(jié)段的（）SSRNA,核蛋白（NP）,RNA多聚酶,,基質(zhì)蛋白M蛋白,具型特異性,包膜,刺突,血凝素HA,神經(jīng)氨酸酶NA,,M1,M2,流感病毒的復(fù)制,病毒侵入遺傳物質(zhì)的釋放病毒的復(fù)制與病毒蛋白的合成病毒的裝配出芽,流感病毒復(fù)制過(guò)程示意圖,流感病毒的分型與抗原變異,分型據(jù)RNP和M蛋白抗原性分甲、乙、丙三型甲型根據(jù)HA和NA抗原性不同，再區(qū)分為若干亞型（H1H15、N1N9）乙型、丙型至今未發(fā)現(xiàn)亞型命名型別/宿主/分離地點(diǎn)/病毒株/序號(hào)/分離年代HA與NA亞型號(hào)（A/HONGKONG/1/68H3N2,流感病毒的抗原變異,抗原漂移（ANTIGENICDRIFT）因HA或NA的點(diǎn)突變?cè)斐桑儺惙刃?，屬量變，引起局部中、小型流行?？乖D(zhuǎn)換（ANTIGENICSHIFT）因HA或NA的大幅度變異造成，屬質(zhì)變，導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn)，引起世界性的暴發(fā)流行。,,致病性與免疫,致病性,傳染源病人或病毒攜帶者,致病機(jī)理病毒不入血,病毒呼吸道毒素樣物質(zhì)進(jìn)入血液,全身中毒癥狀,局部粘膜上皮炎癥,,,同型有12年免疫力,免疫物質(zhì)為SIGA及中和抗體（IGG、IGM）,免疫性,傳播途徑病毒飛沫，呼吸道傳播,流感病毒的其他生物學(xué)特性,培養(yǎng)特性可在雞胚和培養(yǎng)細(xì)胞中增殖，但不引起明顯的病變；培養(yǎng)液中加入胰液，促使HA裂解，可擴(kuò)大培養(yǎng)細(xì)胞范圍。抵抗力不耐熱，對(duì)干燥、乙醚、甲醛和乳酸等敏感。,流行性感冒（INFLUENZA）,“流行性感冒”（INFLUENZA）是英國(guó)人JOHNHUZXAM在1743年創(chuàng)造的字，他依據(jù)意大利語(yǔ)中用來(lái)描述這個(gè)疾病起源的片語(yǔ)“UNINFUENZADIFREDDO”，即“寒冷的影響”。它主要發(fā)生在深秋、冬天和早春季節(jié)。每年都有數(shù)以百萬(wàn)計(jì)的人群受到感染。,常見(jiàn)癥狀,發(fā)熱UPTO39畏寒肌肉酸痛出汗咳嗽鼻塞咽痛頭痛厭食乏力,微生物學(xué)檢查,病毒分離取患者咽漱液或鼻咽拭，接種雞胚或培養(yǎng)細(xì)胞血清學(xué)診斷血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、酶免疫測(cè)定抗原檢測(cè)直接從病人呼吸道分泌物、脫落細(xì)胞中檢測(cè)抗原分型鑒定核酸雜交、PCR、序列分析,流感的防治,藥物治療鹽酸金剛烷氨、干擾滴鼻素、板蘭根、大青葉接種疫苗流感病毒滅活疫苗病毒表面抗原疫苗減毒活疫苗,副粘病毒（PARAMYXOVIRUS）,與正粘病毒一樣，核衣殼呈螺旋對(duì)稱，有包膜的單負(fù)鏈RNA病毒，同時(shí)又有自己的特點(diǎn)病毒體積大（）SSRNA不分節(jié)段包膜刺突蛋白不同（HN、H、G、F蛋白）,麻疹病毒（MEASLESVIRUS）,麻疹病毒是麻疹的病原體。臨床表現(xiàn)為高熱、畏光，結(jié)膜炎、鼻炎、咳嗽是三個(gè)主要的前驅(qū)癥狀。麻疹本身可自愈，但常引起嚴(yán)重的并發(fā)癥而導(dǎo)致死亡。,麻疹病毒的生物學(xué)性狀及免疫,包膜刺突為H蛋白和F蛋白免疫力牢固，抗H抗體和抗F抗體可抵御再感染恢復(fù)期主要為細(xì)胞免疫母親抗體可保護(hù)新生兒,麻疹病毒的傳播,人是麻疹病毒的自然宿主急性期患者為傳染源通過(guò)飛沫或鼻腔分泌物傳播,麻疹病毒的致病機(jī)理,入侵（CD46為病毒受體）,呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖,,入血（第一次病毒血癥）,侵入淋巴組織和單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng),增殖后再次入血（第二次病毒血癥）,多種組織、器官受累，表現(xiàn)為細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞，核內(nèi)形成嗜酸性包涵體等,,,,,,麻疹的臨床表現(xiàn),潛伏期約1012天體溫略高、咳嗽、流涕、好打噴嚏及淚眼，癥狀持續(xù)35天體溫突然升高（達(dá)到40405C），口頰粘膜出現(xiàn)柯氏斑，隨后出現(xiàn)紅色班丘疹，從耳部開(kāi)始，23天后遍及全身4天后消退，脫屑,柯氏斑,,麻疹的并發(fā)癥,呼吸道最為常見(jiàn)，如肺炎、肺結(jié)核消化道腹瀉、闌尾炎或盲腸炎營(yíng)養(yǎng)失調(diào)神經(jīng)中樞系統(tǒng)亞急性硬化性全腦炎（SSPE）,麻疹的治療,控制高熱保持室內(nèi)濕度及時(shí)補(bǔ)液注意飲食營(yíng)養(yǎng)兒童應(yīng)補(bǔ)充維生素A注意并發(fā)癥,麻疹的預(yù)防,雞胚細(xì)胞麻疹病毒減毒活疫苗我國(guó)接種年齡為8個(gè)月，發(fā)達(dá)國(guó)家一般為15個(gè)月7歲時(shí)再次免疫孕婦不宜接種疫苗緊急被動(dòng)免疫用丙種球蛋白或胎盤球蛋白,腮腺炎病毒（MUMPSVIRUS）,有包膜，單鏈負(fù)義RNA兩種表面包膜蛋白HN和F蛋白另外有四種結(jié)構(gòu)蛋白,傳播方式,腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原體，只有一個(gè)血清型，人是其唯一宿主病毒通過(guò)飛沫或直接接觸傳播咳嗽、噴嚏甚至說(shuō)話都可傳播病毒學(xué)齡兒童為易感人群出現(xiàn)癥狀前23天及癥狀消失后9天仍有傳染性,致病性,潛伏期23周在上皮細(xì)胞和局部淋巴結(jié)內(nèi)增殖入血，病毒隨血侵入腮腺及其它器官主要癥狀為腮腺腫大睪丸炎、卵巢炎及病毒性腦炎病可獲牢固的免疫力,微生物學(xué)檢查及預(yù)防,分離時(shí)可取患者唾液、尿液或腦脊液在雞胚羊膜腔、雞胚細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)增殖血清學(xué)診斷病毒特異性的IGM或4倍上升的IGG血凝抑制試驗(yàn)、ELISA和免疫熒光檢測(cè)病毒抗原或抗體預(yù)防可接種MMR三聯(lián)疫苗,呼吸道合胞病毒（RESPIRATORYSYSCYTIALVIRUS，RSV）,包膜刺突為G蛋白嬰幼兒細(xì)支氣管炎和細(xì)支氣管肺炎成人上呼吸道感染通過(guò)手、污染物品和呼吸道傳播易在冬季流行是醫(yī)源性感染的重要病原體,RSV的致病機(jī)制,呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)增殖病毒不入血支氣管壞死物與粘液、纖維蛋白粘連在一起，易導(dǎo)致氣道阻塞可并發(fā)嚴(yán)重的細(xì)支氣管炎和肺炎,RSV的免疫及預(yù)防,感染后免疫力不強(qiáng)，不能防止再感染至今未有有效的預(yù)防疫苗,腺病毒（ADENOVIRUS）,線型雙鏈DNA，不分節(jié)段基因組長(zhǎng)3000042000BP，編碼約30種蛋白病毒無(wú)包膜，二十面立體對(duì)稱，直徑約7090NM具12個(gè)頂角和纖維刺突,腺病毒的EM照片,傳播途徑,糞口途徑呼吸道傳播接觸傳播手眼途徑性接觸,致病性,咽炎急性呼吸系統(tǒng)疾病濾泡性結(jié)膜炎，流行性角膜結(jié)膜炎咽結(jié)膜熱尿路感染（子宮頸炎、尿道炎、出血性膀胱炎）無(wú)癥狀的持續(xù)感染,臨床特征,潛伏期58天通常為局部感染一些病毒亞型可導(dǎo)致細(xì)胞病變（細(xì)胞腫脹、變圓，核內(nèi)出現(xiàn)嗜堿性包涵體）約5的兒童急性呼吸道疾病及約10的嬰幼兒腹瀉由腺病毒引起腦膜腦炎可為腺病毒呼吸道感染的并發(fā)癥,微生物學(xué)檢查,取樣用咽拭子、眼結(jié)膜分泌物接種原代人胚細(xì)胞后傳代HELA細(xì)胞等上皮細(xì)胞初步鑒定可觀察細(xì)胞的病變效應(yīng)酶聯(lián)免疫測(cè)定、熒光免疫測(cè)定,預(yù)防及治療,普通抗病毒藥物治療效果不理想感染后對(duì)同型病毒可產(chǎn)生牢固的免疫力母親的抗體對(duì)新生兒有保護(hù)作用目前無(wú)理想疫苗,風(fēng)疹病毒（RUBELLAVIRUS）,單正鏈RNA，有包膜包膜刺突有血凝性核衣殼為二十面立體對(duì)稱只有一個(gè)血清型人是其唯一自然宿主,致病性,兒童是主要易感者呼吸道傳播局部淋巴節(jié)增殖后經(jīng)病毒血癥散播全身可垂直傳播導(dǎo)致胎兒先天性感染,預(yù)防及免疫,自然感染后可獲持久免疫力母親抗體可保護(hù)胎兒接種風(fēng)疹減毒活疫苗三聯(lián)疫苗（MMR）,

簡(jiǎn)介：DNA自動(dòng)測(cè)序核酸分子雜交,RNA抽提純化和逆轉(zhuǎn)錄PCR,載體與片段連接、感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞轉(zhuǎn)染,分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)培訓(xùn)總結(jié),質(zhì)粒抽提和酶切鑒定,,,重組DNA鑒定,,目的蛋白的表達(dá)及功能的研究,獲得目的基因,,,DNA重組,遺傳的中心法則,1958年CRICK提出以DNA為中心的遺傳信息的傳遞規(guī)律，即DNA貯存的遺傳信息通過(guò)復(fù)制傳給子代DNA，通過(guò)轉(zhuǎn)錄傳給RNA，再通過(guò)翻譯傳給蛋白質(zhì)。遺傳信息傳遞方向的這個(gè)規(guī)律被稱為～。,DNA,,RNA,,,,蛋白質(zhì),復(fù)制,復(fù)制,轉(zhuǎn)錄,翻譯,,反轉(zhuǎn)錄,1970年TEMIN和BALTIMORE發(fā)現(xiàn)RNA病毒的RNA可通過(guò)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄）將遺傳信息傳給CDNA，也可通過(guò)RNA復(fù)制或RNA轉(zhuǎn)錄傳給子代RNA，這是對(duì)中心法則的補(bǔ)充。1997年瘋牛病和朊病毒的出現(xiàn)，預(yù)示蛋白質(zhì)也可逆向?qū)⑦z傳信息向DNA傳遞。,,,DNA的結(jié)構(gòu)及功能,DNA分子是由兩條反向平行的脫氧核苷酸長(zhǎng)鏈盤繞而成的。DNA分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接，排在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架，堿基排在內(nèi)側(cè)。兩條鏈的堿基通過(guò)氫鍵連接形成堿基對(duì)，其中A與T配對(duì)，G與C配對(duì)。兩個(gè)相鄰脫氧核苷酸通過(guò)3’5’磷酸二酯鍵連接。起著貯存和傳遞遺傳信息的作用。,RNA的種類CATEGORY,轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸TRANSFERRNA,TRNA核蛋白體核糖核酸RIBOSOMERNA,RRNA信使核糖核酸MESSENGERRNA,MRNA,轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白體,起裝配機(jī)的作用翻譯蛋白質(zhì)的模板,RNA的功能FUNCTION,MRNA的生物合成MRNABIOSYNTHESIS,真核生物的結(jié)構(gòu)基因由內(nèi)含子和外顯子組成，內(nèi)含子的序列較長(zhǎng)，且不編碼蛋白質(zhì)。真核生物DNA在轉(zhuǎn)錄過(guò)程中經(jīng)剪接可將內(nèi)含子部分去除，獲得成熟的MRNA。由于分子生物學(xué)研究的最終產(chǎn)物常常是蛋白質(zhì)，因此我們需要獲得可翻譯的MRNA。MRNA易降解，不易長(zhǎng)期保存。將MRNA逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，利用CDNA來(lái)研究基因的功能。,TRIZOL提取RNA原理,TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA是目前常用的提取方法。細(xì)胞內(nèi)大部分的RNA與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，以核蛋白形式存在。TRIZOL內(nèi)含異硫氰酸胍和苯酚等物質(zhì)。異硫氫酸胍GUSCN是一種強(qiáng)的蛋白質(zhì)變性劑，不僅能使細(xì)胞裂解，同時(shí)還能有效地抑制細(xì)胞內(nèi)源性RNA酶的活性。通過(guò)有機(jī)溶劑的分步抽提，最終可獲得純度較高的細(xì)胞總RNA。,RNA提取注意事項(xiàng),TRIZOL試劑含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。如皮膚接觸TRIZOL，請(qǐng)立即用大量水沖洗。RNASE污染的主要來(lái)源是操作過(guò)程中手和空氣中的浮沉，注意隨時(shí)勤換手套，樣品盡可能蓋嚴(yán)；盡量不要對(duì)著RNA樣品呼氣或說(shuō)話。用001的DEPC水浸泡過(guò)夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會(huì)降低最后得率，因?yàn)橐徊糠諶NA會(huì)殘留在未裂解的細(xì)胞中。在清洗和裂解細(xì)胞時(shí)最好在低溫下操作，防止在操作過(guò)程中釋放的內(nèi)源RNASE降解了RNA。,逆轉(zhuǎn)錄REVERSETRANSCRIPTION,逆轉(zhuǎn)錄指遺傳信息從RNA流向DNA，是RNA指導(dǎo)下的DNA合成過(guò)程，即以RNA為模板，四種DNTP為原料，合成與RNA互補(bǔ)的DNA單鏈，稱為互補(bǔ)DNACOMPLEMENTARYDNA,CDNA,逆轉(zhuǎn)錄原理,CDNA合成有兩個(gè)關(guān)鍵因素，一是病毒RNA的質(zhì)量，二是逆轉(zhuǎn)錄酶。逆轉(zhuǎn)錄酶是一種多功能酶，它能在一定的條件下，以單鏈RNA為模板合成第一條CDNA鏈。通過(guò)RNASEH活性水解RNADNA雜合分子中的RNA鏈。,逆轉(zhuǎn)錄酶REVERSETRANSCRIPTASE,催化逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的酶稱逆轉(zhuǎn)錄酶，RNA病毒中都含有此酶。具有三種酶活性RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶RNA水解酶活性DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶,,逆轉(zhuǎn)錄體系,RNA模板3’UUAGGCCUGGAUAAGCGCCUGGA5’,引物5’ATCCGGAC,,逆轉(zhuǎn)錄酶,DATP,DGTP,DCTP,DTTP,,MN2,,,酶活性依賴金屬離子,,,,,,底物,逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程中CDNA的合成,逆轉(zhuǎn)錄引物的選擇PRIMER,OLIGODT1218個(gè)核苷酸組成），只有MRNA被逆轉(zhuǎn)錄隨機(jī)六聚寡核苷酸，所有RNA均被逆轉(zhuǎn)錄基因特異性引物，僅產(chǎn)生需要的DNA,逆轉(zhuǎn)錄的生物學(xué)意義,擴(kuò)充了中心法則有助于對(duì)病毒致癌機(jī)制的了解與真核細(xì)胞分裂和胚胎發(fā)育有關(guān)逆轉(zhuǎn)錄酶是分子生物學(xué)重要工具酶,以DNA為模板，利用DNA聚合酶的特性體外擴(kuò)增特定的基因片斷，這種方法被稱為DNA聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。,,,,PCR基因放大連瑣反應(yīng),聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION,PCR,PCR基本原理,利用高溫可使DNA變性和低溫可使DNA復(fù)性的特性，根據(jù)體內(nèi)細(xì)胞分裂中DNA半保留復(fù)制機(jī)理，以特異性寡核苷酸為引物，DNA分子為模板，在DNA聚合酶和四種脫氧核苷酸存在的條件下體外合成新DNA分子的過(guò)程。這種熱變性復(fù)性延伸的過(guò)程就是一個(gè)PCR循環(huán)，PCR就是在合適條件下的這種循環(huán)的不斷重復(fù)。,PCR技術(shù)的特點(diǎn),高度的敏感性高度的特異性操作簡(jiǎn)便、快速適用樣品的廣泛性,PCR基本成分,TEMPLATEPRIMERSTAQPOLYMERASE10PCRBUFFERDNTPSMG,PCRPRIMERS,WWWNCBINLMNIHGOV,PCRPRIMERS,序列發(fā)現(xiàn)的時(shí)間和發(fā)現(xiàn)者序列的生物體來(lái)源序列的組織來(lái)源,引物設(shè)計(jì)PRIMERDESIGN,引物長(zhǎng)度（LENGTH）20～30BP引物中四種堿基的分布應(yīng)該是隨機(jī)的兩引物間不能有互補(bǔ)序列，尤其是3‘端引物的堿基順序不應(yīng)與非擴(kuò)增區(qū)域由同源性引物的3’末端堿基一定要與模板DNA配對(duì)可以在5’末端加上限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)或起始密碼解鏈溫度TM兩引物間相差不大于5℃引物內(nèi)部不能有大于3BP的反向重復(fù)序列或自身互補(bǔ)序列存在,PCR基本程序,預(yù)變性（PREDENATURATION變性DENATURATION退火ANNEALING延伸ELONGATION2530CYCLES,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,,,DESIGNPRIMERSWITHTHISSEQUENCEINFORMATION,PCRCYCLE1,DOUBLESTRANDEDDNATEMPLATE,,,PRIMERS,TAQ,TAQ,PCRCYCLE1,DENATURATION950CSTRANDSSEPARATE,,,PRIMERS,TAQ,TAQ,TAQPOLYMERASEISTHERMOSTABLE,,,,,3’,5’,5’,3’,PCRCYCLE1,ANNEALING550CPRIMERSBIND,TAQ,TAQ,,,,,3’,5’,5’,3’,PCRCYCLE1,ANNEALING550CTAQBINDSTODUPLEX,TAQ,TAQ,,,,3’,5’,5’,3’,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRANDDNTPS,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,,3’,5’,5’,3’,,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRAND,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,,3’,5’,5’,3’,,,,,,PCRCYCLE1,EXTENSION72OCTAQCOPIESDNASTRAND,TAQ,TAQ,TAQSYNTHESISESDNAINTHE5’TO3’DIRECTION,,,3’,5’,5’,3’,5’,3’,,5’,3’,PCRCYCLE1,ENDCYCLE1,,PCRANIMATION,PCR反應(yīng),取無(wú)菌0?2MLPCR管一支，加入10?PCR緩沖液5ΜL氯化鎂4ΜL4種ＤNTP混合液10MMOL/L0?5ΜL3?端引物10ΜMOL/L1ΜL5?端引物10ΜMOL/L1ΜLTAQDNA多聚酶5U/ΜL0?25ΜL三蒸水33?25ΜL模板CDNA5ΜL蓋緊蓋子，離心數(shù)秒后置PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。PCR循環(huán)為95℃預(yù)變性2MIN，95℃變性30S、55℃復(fù)性30S、72℃延伸1MIN，30個(gè)循環(huán)，最后72?C延伸7MIN。,細(xì)胞裂解,RNA釋放,CDNA,PCR擴(kuò)增,逆轉(zhuǎn)錄酶,耐熱DNA聚合酶,,RTPCR擴(kuò)增,,,,,,,,,,,,,,,,,引物DNTPS二價(jià)金屬離子DNA聚合酶,引物DNTPS二價(jià)金屬離子逆轉(zhuǎn)錄酶,RTPCR過(guò)程,逆轉(zhuǎn)錄酶/耐熱DNA聚合酶,RTPCR的應(yīng)用APPLICATION,獲得基因完整編碼區(qū)序列檢測(cè)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物半定量比較不同樣品間MRNA水平制備用于雜交的CDNA探針,PCR技術(shù)在臨床應(yīng)用中的問(wèn)題和對(duì)策,在我國(guó)，前一個(gè)時(shí)期PCR應(yīng)用相當(dāng)混亂。從技術(shù)因素分析，常規(guī)PCR作為臨床檢驗(yàn)技術(shù)存在的最主要的問(wèn)題是，擴(kuò)增產(chǎn)物污染帶來(lái)的假陽(yáng)性。常規(guī)PCR只能定性不能定量，也影響了評(píng)價(jià)PCR檢測(cè)結(jié)果的臨床診斷意義。定量是PCR作為臨床檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展的另一個(gè)重要目標(biāo)。,瓊脂糖凝膠電泳基本原理,瓊脂糖凝膠電泳是以瓊脂糖作為固體支持物的一種電泳方法。因?yàn)楦鞣N核酸分子的電荷及質(zhì)量之比是相近的，在沒(méi)有支持物的電場(chǎng)中，它們以相同的速度前進(jìn)。瓊脂糖凝膠電泳具有分子篩效應(yīng)，所以在適當(dāng)濃度的瓊脂糖凝膠中電泳，線性DNA分子在電場(chǎng)中的遷移率與其分子量的對(duì)數(shù)成反比，從而達(dá)到分離的目的。,瓊脂糖凝膠電泳（AGAROSEGELELECTROPHORESIS）分離的原理,使TAE浸過(guò)凝膠表面在陰極的加樣孔加樣（紅正黑負(fù)）分子篩作用分子量越小，遷移速度越快,瓊脂糖凝膠的濃度與DNA分離范圍SEPARATIONRANGEVSAGAROSE,瓊脂糖凝膠濃度與分離效率,,,大片段在07瓊脂糖凝膠中分離效果好,小片段在15瓊脂糖凝膠中分離效果好,上樣,上樣緩沖液甘油可增加樣品密度，使其比重增加，以確保DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)在電泳中形成肉眼可見(jiàn)的指示帶，可預(yù)測(cè)核酸電泳的速度和位置使樣品呈色，使加樣操作更方便EDTA,SDS可滅活限制性內(nèi)切酶,溴化乙錠EB染色,EB堆砌在DNA雙螺旋的堿基對(duì)之間,DNA分子越小,結(jié)合的EB越少,染色越淡,溴化乙錠是一種熒光染料,可嵌入核酸雙鏈的堿基對(duì)之間，在紫外線激發(fā)下，發(fā)出紅色熒光，常用05MG/ML,,,,注意事項(xiàng),一定要等凝膠冷卻至60℃時(shí)再入加溴化乙錠切記DNA樣品由負(fù)極往正極泳動(dòng)靠近加樣孔的一端為負(fù)加完樣品后最好先觀察一段時(shí)間插電極或拔電極時(shí)必須將儀器電源關(guān)掉不要使樣品跑出凝膠,瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)用,PCR產(chǎn)物鑒定酶切片段鑒定DNA片段回收DNA的定量,分子克隆MOLECULARCLONING基因工程的核心,克隆克隆是指通過(guò)無(wú)性繁殖過(guò)程所產(chǎn)生的與親代完全相同的子代群體,分子克隆,細(xì)胞克隆,動(dòng)物克隆,基因工程中所指的克隆，是在體外對(duì)DNA分子按照既定目的和方案進(jìn)行人工重組，將重組分子導(dǎo)入合適細(xì)胞，使其在細(xì)胞中擴(kuò)增和繁殖，以獲得該DNA分子得大量拷貝。這類克隆是在分子水平上操作的，故稱為分子克隆。又被稱為基因克隆或DNA克隆。,分子克隆中常用的工具酶,限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶DNA聚合酶末端轉(zhuǎn)移酶逆轉(zhuǎn)錄酶堿性磷酸酶核酸外切酶,基因克隆的基本程序,外源基因或目的基因的獲得載體的構(gòu)建或選擇連接轉(zhuǎn)化陽(yáng)性重組體的篩選與鑒定,目的基因,目的基因是指我們所要研究和應(yīng)用的基因，也就是我們將要克隆或表達(dá)的基因。獲得目的基因是分子克隆過(guò)程中的第一步。體外擴(kuò)增基因法PCRANDRTPCR人工合成基因法限制性內(nèi)切酶直接分離法獲得基因文庫(kù)篩選法從CDNA文庫(kù)中篩選,RTPCR,RNA提取RTPCR,EXTRACTRNAFROMVIRUS/CELLS,RNA,載體VECTOR,載體是指能夠攜帶外源基因轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增或誘導(dǎo)外源基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的工具。,載體應(yīng)具備的條件,帶有復(fù)制子多克隆酶切位點(diǎn)篩選標(biāo)志完整的轉(zhuǎn)錄單位（表達(dá)型載體）,載體的分類,按功能分類克隆載體和表達(dá)載體按受體細(xì)胞分類原核細(xì)胞載體和真核細(xì)胞載體按載體來(lái)源分類質(zhì)粒載體、嗜菌體、病毒、酵母人工染色體、粘粒,PGEMTEASYVECTOR,綠色熒光蛋白載體,酶切載體和目的基因ENZYMERESTRICTIONDIGESTOFDNAPLASMIDVECTORANDTARGETGENE）,目的基因與載體的連接（LIGATION）,利用DNA連接酶把載體DNA和要克隆的目的DNA片段連接在一起，成為一個(gè)完整的重組分子，被稱為連接反應(yīng)。,DNA連接酶DNALIGASE,催化兩個(gè)獨(dú)立的DNA片段5‘磷酸基團(tuán)和3’羥基基團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵。,連接方法,粘性末端連接法單酶連、雙酶連平齊末端連接法同聚物接尾法人工接頭法PCR產(chǎn)物與載體的連接限制性酶切位點(diǎn)添加法、T/A克隆法,單一酶切的粘性末端連接缺點(diǎn),載體自連載體DNA兩端的粘性末端可以自身退火成環(huán)，產(chǎn)生載體載體相連接的假陽(yáng)性克隆。雙向插入由于使用同一種內(nèi)切酶，載體與插入片段的4個(gè)末端全為相同的粘性互補(bǔ)順序，所以目的基因插入可以有兩個(gè)方向。,,,BAMHⅠ切割反應(yīng),T4DNA連接酶15oC,,,同一限制酶切位點(diǎn)連接,不同限制酶切位點(diǎn)的連接（雙酶連）,ECORⅠ切割位點(diǎn),BGLⅡ切割位點(diǎn),平端連接,適用于限制性內(nèi)切酶切割產(chǎn)生的平端粘端補(bǔ)齊或切平形成的平端,同聚物加尾連接,在末端轉(zhuǎn)移酶TERMINALTRANSFERASE的作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，再進(jìn)行粘端連接。,人工接頭LINKER連接,在平端加上酶切位點(diǎn)，再用限制酶切除產(chǎn)生粘性末端，而進(jìn)行粘端連接。,T/A克隆法,利用含有單個(gè)胸腺嘧啶（T）3‘突出末端的線性化載體與帶有單個(gè)腺苷酸（A）3‘突出末端的PCR產(chǎn)物來(lái)進(jìn)行克隆，這種方法被稱為T/A克隆法。此方法利用了TAQDNA聚合酶具有延伸酶的活性，即不依賴模板的方式將一個(gè)核苷酸添加到已完成延伸的PCR產(chǎn)物的3‘末端。在四種核苷酸都存在的情況下，這個(gè)添加上去的核苷酸通常是A殘基。,重組分子導(dǎo)入受體細(xì)胞,外源DNA分子與載體組成重組分子后，需要導(dǎo)入受體細(xì)胞才能進(jìn)行繁殖和表達(dá)，受體細(xì)胞系指被導(dǎo)入重組分子的細(xì)胞，又稱宿主細(xì)胞。根據(jù)導(dǎo)入受體細(xì)胞的方式不同，可分為轉(zhuǎn)化（TRANSFORMATION）將重組DNA分子導(dǎo)入原核細(xì)胞的過(guò)程轉(zhuǎn)染（TRANSFECTION）將重組DNA分子導(dǎo)入真核細(xì)胞的過(guò)程感染（INFECTION）噬菌體進(jìn)入宿主細(xì)菌，病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞中繁殖的過(guò)程,轉(zhuǎn)化過(guò)程,制備感受態(tài)細(xì)胞（COMPETENTCELL）用物理或化學(xué)方法處理細(xì)胞，使其處于最適攝取和容忍外來(lái)DNA的生理狀態(tài)，這種細(xì)胞稱為感受態(tài)細(xì)胞。將重組DNA分子和感受態(tài)細(xì)胞相混合，使DNA分子進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞中。轉(zhuǎn)化細(xì)胞在含有抗生素的瓊脂平板上生長(zhǎng),氯化鈣法原理,細(xì)菌處于0℃氯化鈣低滲溶液中，細(xì)胞膨脹成球形。轉(zhuǎn)化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羥基鳥(niǎo)磷酸復(fù)合物粘附于細(xì)胞表面，經(jīng)42℃短時(shí)間熱休克處理，促進(jìn)細(xì)胞吸收DNA復(fù)合物。在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)數(shù)小時(shí)后，球狀細(xì)胞復(fù)原并分裂增殖。被轉(zhuǎn)化的細(xì)菌中，重組基因得到表達(dá)，在選擇性培養(yǎng)基平板上可篩選出所需的轉(zhuǎn)化子。,氯化鈣法CHEMICALTRANSFORMATIONWITHCALCIUMCHLORIDE,CACL2方法的轉(zhuǎn)化效率一般可達(dá)106107轉(zhuǎn)化子/ΜGDNA。關(guān)鍵是1使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌2低溫操作3手法溫柔優(yōu)點(diǎn)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、可重復(fù)性高。缺點(diǎn)轉(zhuǎn)化效率稍低，而且不能轉(zhuǎn)化大質(zhì)粒＞15KB,電轉(zhuǎn)法TRANSFORMATIONBYELECTROPORATION,重組DNA的篩選與鑒定,抗藥性篩選法藍(lán)白篩選法DNA限制性內(nèi)切酶圖譜分析DNA序列測(cè)定法核酸雜交法PCR法,抗生素篩選轉(zhuǎn)化結(jié)果,GROWTHONAGARPLATESAMPXGALANDSELECTIONFORANTIBIOTICRESISTANTCOLONIES,,重組DNA技術(shù)操作過(guò)程可形象歸納為,小結(jié),重組DNA技術(shù)操作的主要步驟,克隆常見(jiàn)問(wèn)題,轉(zhuǎn)化后無(wú)克隆產(chǎn)生白色菌落很少或者根本沒(méi)有實(shí)驗(yàn)組只有白色菌落白色菌落中陽(yáng)性克隆率低,重組DNA的應(yīng)用,克隆基因的表達(dá)探針標(biāo)記基因組序列分析基因的定點(diǎn)突變基因打靶技術(shù)轉(zhuǎn)基因技術(shù),質(zhì)粒提取及酶切鑒定,實(shí)驗(yàn)?zāi)康募氨尘?質(zhì)粒是獨(dú)立于細(xì)菌染色體外的DNA分子，大小可為1KB到200KB。大多數(shù)來(lái)自細(xì)菌的質(zhì)粒是雙鏈、共價(jià)閉合環(huán)狀的分子，以超螺旋形式存在。它是細(xì)菌內(nèi)的共生型遺傳因子。其復(fù)制和遺傳獨(dú)立于細(xì)菌染色體，但復(fù)制和轉(zhuǎn)錄依賴于宿主編碼的蛋白和酶。,PLASMID,CHROMOSOME,質(zhì)粒類型,質(zhì)粒按復(fù)制方式分為兩種類型松弛型質(zhì)粒和嚴(yán)緊型質(zhì)粒1松弛型質(zhì)粒RELAXEDPLASMID松弛型質(zhì)粒的復(fù)制不需要質(zhì)粒編碼的功能蛋白，完全依賴于宿主提供的半衰期較長(zhǎng)的酶。即使蛋白質(zhì)合成受抑制，質(zhì)粒的復(fù)制依然進(jìn)行。2嚴(yán)緊型質(zhì)粒STRINGENTPLASMID嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制需要一個(gè)質(zhì)粒編碼的蛋白，質(zhì)粒的拷貝數(shù)不能通過(guò)用氯霉素等蛋白合成抑制劑來(lái)增加。按功能分為3類F質(zhì)粒（即性質(zhì)粒）R質(zhì)粒（即抗藥性質(zhì)粒）COL質(zhì)粒（即大腸桿菌素因子）,質(zhì)粒DNA的一般性質(zhì),環(huán)狀超螺旋DNA分子質(zhì)?？梢赞D(zhuǎn)移質(zhì)粒的復(fù)制依賴宿主細(xì)胞的復(fù)制機(jī)器質(zhì)粒有相容性及不相容性質(zhì)粒能在細(xì)菌中垂直遺傳并且賦予宿主細(xì)胞一些表型，是比病毒更簡(jiǎn)單的原始生命。,TARGETGENESCARRIEDBYPLASMID,1PLASMID1CELL,RECOMBINANTPLASMIDTRANSFORMATION,TARGETGENERECOMBINATION,RESTRICTIONENZYME,RESTRICTIONENZYME,CHROMOSOMALDNA,TARGETGENES,DNARECOMBINATION,TRANSFORMATION,HOSTCELLS,,,JUANGRH2004BCBASICS,質(zhì)粒的應(yīng)用,大多數(shù)基因工程使用松弛型質(zhì)粒。嚴(yán)緊型質(zhì)粒用來(lái)表達(dá)一些可使宿主細(xì)胞受毒害致死的基因。質(zhì)粒的特點(diǎn)使質(zhì)粒成為攜帶外源基因進(jìn)入細(xì)菌中擴(kuò)增或表達(dá)的重要媒介物，這種基因運(yùn)載工具在基因工程中具有極廣泛的應(yīng)用價(jià)值。,質(zhì)粒載體PLASMIDVECTORS,是一獨(dú)立的復(fù)制子有篩選標(biāo)記具有酶切位點(diǎn)或多克隆位點(diǎn)分子量小，拷貝數(shù)高測(cè)序、亞克隆、表達(dá)、可重復(fù)性高,分離質(zhì)粒DNA方法,從大腸桿菌中分離質(zhì)粒DNA方法眾多，目前常用的有堿變性法；煮沸法；SDS法；羥基磷灰石層析法等各方法分離是依據(jù)宿主菌株類型、質(zhì)粒分子大小、堿基組成及結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)加以選擇的，其中堿變性法既經(jīng)濟(jì)且收得率較高,提取的質(zhì)粒DNA可用于酶切,連接與轉(zhuǎn)化。,質(zhì)粒DNA提取的步驟,所有分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個(gè)基本步驟培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增；收集和裂解細(xì)菌；DNA分離質(zhì)粒DNA；,培養(yǎng)單克隆細(xì)胞,AMPLIFICATIONANDSCREENINGOFTARGETGENE,,,,,1,1CELLLINE,1COLONY,X100,X1,000,PLASMIDDUPLICATION,BACTERIADUPLICATION,PLATING,PICKTHECOLONYCONTAININGTARGETGENE,,100,000,,JUANGRH2004BCBASICS,堿變性法基本原理,在PH120126堿性環(huán)境中，線性的大分子量細(xì)菌染色體DNA變性，而共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒DNA仍為自然狀態(tài)。將PH調(diào)至中性并有高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，大部分DNA和蛋白質(zhì)在去污劑SDS的作用下形成沉淀，而質(zhì)粒DNA仍為可溶狀態(tài)，通過(guò)離心可除去大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)，質(zhì)粒DNA尚在上清中，再用酚氯仿抽提進(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA。,質(zhì)粒ＤＮＡ小量制備的問(wèn)題與對(duì)策,質(zhì)粒DNA不能被限制酶所切割，這是由于從細(xì)菌沉淀或從核酸沉淀中去除所有上清液時(shí)注意得不夠。大多數(shù)情況下，用酚氯仿對(duì)溶液進(jìn)行抽提可以去除小量備物中的雜質(zhì)。如果總是依然存在，可用離心柱層析注純化DNA。DNA在溶解前，有酒精殘留，酒精抑制后續(xù)酶解反應(yīng)。重新沉淀DNA，讓酒精充分揮發(fā)。DNA中殘留有金屬離子，可增加70乙醇洗滌的次數(shù)。出現(xiàn)無(wú)質(zhì)粒DNA的現(xiàn)象，這可能是由于細(xì)菌中無(wú)質(zhì)粒或核酸沉淀顆粒已同乙醇一起被棄去,重組質(zhì)粒的鑒定,瓊脂糖凝膠電泳限制性內(nèi)切酶酶切紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA自動(dòng)測(cè)序核酸雜交法PCR法,質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳AGAROSEGELELECTROPHORESIS,在一定電場(chǎng)強(qiáng)度下，DNA分子的遷移取決于DNA分子本身的大小和構(gòu)型。相對(duì)分子質(zhì)量不同的DNA片段泳動(dòng)速度不一樣。質(zhì)粒DNA的形態(tài)不一，電泳時(shí)在凝膠中的遷移率不同。因此，凝膠電泳不僅可分離不同相對(duì)分子質(zhì)量的DNA，也可以分離相對(duì)分子質(zhì)量相同，但構(gòu)型不同的DNA分子。超螺旋的質(zhì)粒DNA一般遷移最快、開(kāi)環(huán)（缺口）質(zhì)粒DNA遷移最慢，線化DNA位于兩者之間。,質(zhì)粒的瓊脂糖凝膠電泳,限制性核酸內(nèi)切酶,1970年發(fā)現(xiàn)的，是一類能識(shí)別和切割雙鏈DNA分子內(nèi)特定堿基順序的核酸水解酶。被稱為分子生物學(xué)的“手術(shù)刀”。有三種類型的限制性內(nèi)切酶，最常用的是Ⅱ型識(shí)別順序一般為46個(gè)堿基的回文結(jié)構(gòu)。如下,PALINDROME,RESTRICTIONENZYME,STICKYENDS,,,STICKYENDSCOHESIVEENDS,,ECORI,,JUANGRH2004BCBASICS,限制性內(nèi)切酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生3種不同的切口,平頭末端BLUNTEND5’端突出的粘性末端3’端突出的粘性末端,平頭末端BLUNTEND,在識(shí)別順序的對(duì)稱軸上，對(duì)雙鏈DNA同時(shí)切割，產(chǎn)生平頭末端BLUNTEND5’GGCC3’HAEⅢ5’GGCC3’3’CCGG5’3’CCGG5’,,,,5’端突出的粘性末端,在識(shí)別順序的兩個(gè)對(duì)稱點(diǎn)切開(kāi)DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端,從5’端切割產(chǎn)生5’端突出的粘性末端5’GAATTC3’ECORⅠ5’GAATTC3’3’CTTAAG5’3’CTTAAG5’,,,,3’端突出的粘性末端,在識(shí)別順序的兩個(gè)對(duì)稱點(diǎn)切開(kāi)DNA雙鏈，產(chǎn)生帶單鏈尾巴的粘性末端,從3’端切割產(chǎn)生3’端突出的粘性末端5’CTGCAG3’PSTⅠ5’CTGCAG3’3’GACGTC5’3’GACGTC5’,,,,用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒,質(zhì)粒4UL去離子水4UL10XBUFFER1ULECORⅠ05UL離心混合后，37℃1小時(shí),酶切反應(yīng)注意事項(xiàng),決不能用水稀釋,以免變性失活。預(yù)先加入除酶以外的所有其他試劑。取酶立即放于冰上。分裝小份避免反復(fù)凍融。使用無(wú)菌的新吸頭。少加水,使體積最小,但保證酶液體積不超過(guò)總體積的10％,否則酶液中的甘油會(huì)抑制酶活性。,限制性核酸內(nèi)切酶的應(yīng)用,改造及組建質(zhì)粒組建基因組DNA物理圖譜基因組DNA同源性研究DNA重組克隆及亞克隆DNA雜交與順序分析,測(cè)序技術(shù)進(jìn)展同位素標(biāo)記到熒光標(biāo)記,平板電泳到毛細(xì)管電泳,多色熒光標(biāo)記毛細(xì)管電泳,單色熒光標(biāo)記平板電泳,同位素標(biāo)記平板電泳,,A,C,G,T,,,,,,測(cè)序圖譜,TATTGCATTGTCTGCATTGTCT,,,,DIDEOXYNUCLEOTIDES,,PHOSPHODIESTERBOND,3’,5’,DIDEOXYNUCEOTIDE,TERMINATED,DDNTP,SANGER’SMETHODHOWTERMINATED,NORMALLINKING,CANNOTREACT,,JUANGRH2004BCBASICS,THEDDATPREACTION,5’TTATCG,3’AATAGCATGGTACTGATCTTACGCTAT5’,5’TTATCGTA,5’TTATCGTACCATGA,5’TTATCGTACCATGACTAGATGCGATA,5’TTATCGTACCATGACTAGA,DNA自動(dòng)測(cè)序,DNA自動(dòng)測(cè)序是在SANGER法的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)加工改進(jìn)的。將2‘,3’雙脫氧三磷酸核苷酸DDNTP用不同的熒光標(biāo)記，如用紅色熒光標(biāo)記DDTTP，藍(lán)色熒光標(biāo)記DDCTP，黃色熒光標(biāo)記

簡(jiǎn)介：怎么樣學(xué),熟悉細(xì)胞生物學(xué)知識(shí),參考教材細(xì)胞生物學(xué)（第二版）鄭國(guó)錩，1992，高等教育出版社細(xì)胞生物學(xué)（第二版）汪堃仁等,1998，北京師范大學(xué)出版社細(xì)胞生物學(xué)（第三版）翟中和等，2007，高等教育出版社,對(duì)比著學(xué),關(guān)注前沿學(xué)術(shù)期刊（中國(guó)期刊網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、GOOGLE直接搜索等）；生物論壇（生物通、丁香園、生命科學(xué)論壇等）,前言,1細(xì)胞生物學(xué),細(xì)胞生物學(xué)是研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)、功能及生活史的一門科學(xué)。,現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)從顯微水平，超微水平和分子水平等不同層次研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、功能及生命活動(dòng)（基因調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、腫瘤生物學(xué)、細(xì)胞分化和凋亡是當(dāng)代的研究熱點(diǎn)）。,1953年DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的提出，1958年生物學(xué)中心法則的建立明確了細(xì)胞最本質(zhì)問(wèn)題是自我復(fù)制（SELFREPLICATION），這些科學(xué)的發(fā)現(xiàn)把當(dāng)時(shí)從細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)研究而引申出的“細(xì)胞學(xué)”推向了一個(gè)更高階段，“細(xì)胞生物學(xué)”應(yīng)運(yùn)而生。,2細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展史上的重大事件,諾貝爾獎(jiǎng),連續(xù)多年的諾貝爾獎(jiǎng)內(nèi)容幾乎都在細(xì)胞生物學(xué)范圍內(nèi),2001年生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)理2002年生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)器官發(fā)育的遺傳調(diào)控和細(xì)胞程序性死亡2003年化學(xué)獎(jiǎng)細(xì)胞膜水通道，離子通道結(jié)構(gòu)和機(jī)理2006年生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)RNA干擾機(jī)制；化學(xué)獎(jiǎng)捕捉DNA的復(fù)制過(guò)程,2007年生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)利用小鼠胚胎干細(xì)胞進(jìn)行基因打靶2009年生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)端粒酶TELOMERASE；化學(xué)獎(jiǎng)核糖體的結(jié)構(gòu)和作用的研究2010年生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)通過(guò)體外受精治療多種不育癥,細(xì)胞生物學(xué)已經(jīng)成為當(dāng)代生物科學(xué)中發(fā)展最快的一門尖端學(xué)科，在我國(guó)基礎(chǔ)學(xué)科發(fā)展規(guī)劃中，細(xì)胞生物學(xué)與分子生物學(xué)，神經(jīng)生物學(xué)和生態(tài)學(xué)并列為生命科學(xué)的四大基礎(chǔ)學(xué)科。,3為什么說(shuō)細(xì)胞生物學(xué)是現(xiàn)代生命科學(xué)的重要基礎(chǔ)學(xué)科,重大前沿課題的解決，如生育的控制、腦的奧秘、腫瘤的防治、器官移植、免疫反應(yīng)、新藥研制、心腦血管疾病及艾滋病防治直至延年益壽等等，都離不開(kāi)細(xì)胞生物學(xué)的研究。,4腫瘤細(xì)胞生物學(xué),從細(xì)胞和分子水平上對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉(zhuǎn)移等過(guò)程進(jìn)行研究的學(xué)科。,DNA損傷檢控系統(tǒng)信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期檢控系統(tǒng)功能失調(diào)與腫瘤發(fā)生的關(guān)系；腫瘤細(xì)胞增殖分化與凋亡過(guò)程及其調(diào)控機(jī)理；腫瘤血管生成分子機(jī)理及其與腫瘤后期發(fā)展的關(guān)系。,具體研究?jī)?nèi)容,本章內(nèi)容,腫瘤細(xì)胞生物學(xué),腫瘤細(xì)胞的增殖、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移,細(xì)胞分化、凋亡和腫瘤,形態(tài)特征,生理特征,細(xì)胞核,細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞膜,,,,第一節(jié)腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征,一、正常細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu),正常細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)圖,細(xì)胞核（NUCLEUS）是細(xì)胞內(nèi)最重要的細(xì)胞器，核表面是由雙層膜構(gòu)成的核被膜（NUCLEARENVELOPE）；核內(nèi)1至數(shù)個(gè)小球形結(jié)構(gòu)，稱為核仁（NUCLEOLUS）；核內(nèi)包含有染色質(zhì)CHROMATIN）。。細(xì)胞核還具有核孔（NUCLEARPORE）。,,,細(xì)胞質(zhì)（CYTOPLASM）質(zhì)膜與核被膜之間的原生質(zhì)。,質(zhì)膜（PLASMAMEMBRANE）是細(xì)胞表面的單位膜。,,細(xì)胞器ORGANELLE具有特定形態(tài)和功能的顯微或亞顯微結(jié)構(gòu)稱為細(xì)胞器,,,,,,細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)（CYTOPLASMICMATRIX）細(xì)胞質(zhì)中除細(xì)胞器以外的部分。,二、腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征,1細(xì)胞核,,細(xì)胞器胞質(zhì)顆粒,,糖蛋白糖脂膜表面抗原凝集素受體,,染色體核仁組織區(qū)端粒,2細(xì)胞質(zhì),3細(xì)胞膜,1細(xì)胞核異常與腫瘤,（1）基本特征,人喉癌HEP2細(xì)胞，瑞氏染色,出現(xiàn)巨核、雙核或多核，染色體呈不均一狀態(tài),正常分化細(xì)胞,癌細(xì)胞,核質(zhì)比顯著高于正常細(xì)胞，可達(dá)11，正常的分化細(xì)胞僅為146,（2）染色體,基本結(jié)構(gòu),組成DNA、組蛋白、非組蛋白、少量RNA,核小體及螺線管的結(jié)構(gòu),染色體異常與腫瘤,染色體數(shù)目異常,人類細(xì)胞正常染色體,癌性胸腹水的染色體數(shù),染色體結(jié)構(gòu)異常,PH染色體（費(fèi)城1號(hào)染色體）9號(hào)和22號(hào)染色體長(zhǎng)臂易位。易位使9號(hào)染色體長(zhǎng)臂（9Q34）上的原癌基因ABL和22號(hào)染色體22Q11上的BCRBREAKPOINTCLUSTERREGION基因重新組合成融合基因。后者具有增高了的酪氨酸激酶活性，這是慢性粒細(xì)胞性白血病的發(fā)病原因。PH的重要臨床意義在于大約95％的慢性粒細(xì)胞性白血病病例都是PH陽(yáng)性，因此它可以作為診斷的依據(jù)。,,,腫瘤常見(jiàn)的染色體異常,基因突變與腫瘤“二次突變學(xué)說(shuō)”（RB基因）,非遺傳性和遺傳性RB功能喪失的機(jī)理,（3）染色體的相關(guān)術(shù)語(yǔ),（4）核仁組織區(qū)NUCLEOLARORGANIZINGREGIONS,NORS,核糖體RNA基因所在的區(qū)域，其精細(xì)結(jié)構(gòu)呈燈刷狀。能夠合成核糖體的28S、18S和58SRRNA。核仁組織區(qū)位于染色體的次縊痕區(qū)，但并非所有的次縊痕都是NORS。,NORS功能編碼RRNA,NORS中心形成核仁,NORS與腫瘤,核仁組織區(qū)嗜銀蛋白（AGNOR）判別細(xì)胞核中RDNA轉(zhuǎn)錄活性的一個(gè)指標(biāo)，可通過(guò)測(cè)定核仁銀染面積與核面積的比值說(shuō)明其嗜銀的強(qiáng)度，區(qū)分腫瘤良、惡性病變或判斷腫瘤預(yù)后的指標(biāo)。,胸腔積液中的惡性細(xì)胞核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色惡性腫瘤中AGNOR顆粒明顯增多且大小形態(tài)不規(guī)則性,（4）端粒和端粒酶,2009年生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng),三位美國(guó)科學(xué)家ELIZABETHHBLACKBURNCAROLWGREIDERJACKW因在端粒和端粒酶如何保護(hù)染色體方面的發(fā)現(xiàn)而獲獎(jiǎng)。,解決的生物學(xué)中的一個(gè)重大問(wèn)題細(xì)胞分裂期間染色體如何被完整復(fù)制，以及染色體如何得到保護(hù)不至退化。如果端粒變短，細(xì)胞就會(huì)衰老。相反，如果端粒酶活性很高，端粒長(zhǎng)度就會(huì)維持，細(xì)胞衰老就會(huì)延遲，在癌細(xì)胞中就是這種情形，可被認(rèn)為具有永生。,染色體端部的特化部分,端粒的結(jié)構(gòu),端粒由高度重復(fù)的短序列串聯(lián)而成，在進(jìn)化上高度保守，不同生物的端粒序列都很相似,保護(hù)染色體完整性和維持染色體的穩(wěn)定性,端粒的功能,保護(hù)染色體不被核酶降解；不具端粒的染色體末端有粘性，會(huì)與其它片段相連或兩端相連而成環(huán)狀,維持細(xì)胞的復(fù)制能力,起細(xì)胞分裂計(jì)時(shí)器的作用，端粒核苷酸復(fù)制和基因DNA不同，每復(fù)制一次減少50100BP，其復(fù)制要靠具有反轉(zhuǎn)錄酶性質(zhì)的端粒酶來(lái)完成，正常體細(xì)胞缺乏此酶，故隨細(xì)胞分裂而變短，細(xì)胞隨之衰老。,端粒酶最早是在四膜蟲TETRAHYMENA中發(fā)現(xiàn)的。1985年，BLACKBAURN和GREIDER發(fā)現(xiàn)人工合成四膜蟲端粒的DNA片段TTGGGG4，可被四膜蟲細(xì)胞抽提物中的一種活性物質(zhì)加長(zhǎng)，這種活性物質(zhì)對(duì)熱、蛋白酶K和RNA酶都敏感。,端粒酶（TELOMERASE）的發(fā)現(xiàn),一種能夠催化延長(zhǎng)端粒末端的核糖核蛋白R(shí)NP,由RNA和相關(guān)蛋白組成。能夠以自身攜帶的RNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄合成端粒DNA并添加于染色體末端,從而維持端粒長(zhǎng)度的穩(wěn)定。人端粒酶的RNA組分由450個(gè)核苷酸組成。,端粒酶的概念,端粒酶RNA模板序列,端粒酶的功能,經(jīng)典測(cè)定方法組織勻漿測(cè)定細(xì)胞提取物將端粒片段延長(zhǎng)至引物3’端的能力,,端粒酶的活性測(cè)定,改進(jìn)的測(cè)定方法,端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法（TRAP）PCR機(jī)制,TRAPAG染法檢測(cè)HELA細(xì)胞端粒酶活性,共有四種染色法同位素法、染色法、熒光法和ELISA法,地高辛摻入法端粒DNA合成功能,細(xì)胞原位雜交檢測(cè)法檢測(cè)RNA和活性亞單位RNA,電化學(xué)發(fā)光擴(kuò)增方法,基于磁珠和納米粒子的電化學(xué)發(fā)光擴(kuò)增方法檢測(cè)端粒酶活性,HTR人端粒酶RNA端粒酶蛋白癌基因和抑癌基因細(xì)胞分化及細(xì)胞周期端粒長(zhǎng)度,端粒酶的活性調(diào)節(jié),早期腫瘤診斷的標(biāo)志物,癌組織中端粒酶的表達(dá)特點(diǎn)表達(dá)陽(yáng)性率很高，除少數(shù)腫瘤外，陽(yáng)性率均在80以上。而癌旁組織和正常相應(yīng)組織陽(yáng)性率低于10，為低水平表達(dá)在一些前侵襲性病變中端粒酶表達(dá)水平增加研究顯示端粒酶可預(yù)測(cè)腦膜瘤、急性髓性白血病和胃腸道癌癥的預(yù)后,端粒酶與腫瘤,端粒酶作為腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)點(diǎn)直接高度特異性靈敏度高3個(gè)惡性細(xì)胞,抗腫瘤治療,反義核苷酸反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑核酶,老年性疾病、早衰、腦萎縮以及高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌細(xì)胞損傷、心力衰竭等心血管疾病,端粒酶與其他疾病,美國(guó)發(fā)現(xiàn)雜志報(bào)道，從2007年開(kāi)始，首個(gè)以端粒為靶標(biāo)的TA65營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充片劑就能夠從醫(yī)生那里買到，預(yù)計(jì)具有延緩衰老作用的藥物可在15年內(nèi)獲得美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）的批準(zhǔn)。不過(guò)，這類抗衰老藥的致癌風(fēng)險(xiǎn)也不容忽視。制藥商TA科學(xué)公司表示，他們的TA65片劑能夠提高人體的骨密度和免疫能力，對(duì)于與衰老相關(guān)的生物標(biāo)記物也有一定的作用，服用了這種片劑的人報(bào)告說(shuō)，他們的運(yùn)動(dòng)、視覺(jué)和認(rèn)知能力都有所增強(qiáng)。但是，旨在延緩老化的端粒酶激活療法也可能增加罹患癌癥的幾率。有研究表明，提升小鼠體內(nèi)端粒酶的活性，會(huì)使它們更容易患上皮膚癌和乳腺癌。,2細(xì)胞質(zhì)異常與腫瘤,（1）細(xì)胞器的改變,線粒體表現(xiàn)為不同的多形性、腫脹、增生,腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞中長(zhǎng)形巨大線粒體。16000,甲狀腺癌細(xì)胞中有的線粒體（黑“↑”）呈S型或分叉型，其余仍為圓形及卵圓形。20000,鼻咽癌細(xì)胞中有巨大畸形線粒體（黑“↑”）。60000,滑膜肉瘤細(xì)胞中圈狀線粒體（黑“↑”）。60000,鼻咽癌癌細(xì)胞，胞質(zhì)中增生有大量線粒體（黑“↑”）。25000,大鼠敗血癥模型肝細(xì)胞中線粒體（黑“↑”）腫脹，水腫，嵴結(jié)構(gòu)不清。20000,線粒體與腫瘤,MTDNA突變導(dǎo)致腫瘤擴(kuò)散,與致癌物結(jié)合MTDNA對(duì)脂溶性化學(xué)物質(zhì)非常敏感，并往往成為親電子物質(zhì)首選的靶點(diǎn)，具有嗜脂性的致癌物往往優(yōu)先在MTDNA上聚集,線粒體DNA（MTDNA）突變導(dǎo)致細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡抑制從而誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生,MTDNA突變的非隨機(jī)分離引起惡性轉(zhuǎn)化,MTDNA分子及其片段在核基因組中整合通過(guò)引起核基因組的不穩(wěn)定性發(fā)生癌變；通過(guò)改變細(xì)胞能量產(chǎn)生，提高線粒體氧化壓力，引起線粒體酶表達(dá)異常和/或調(diào)控凋亡等途徑來(lái)影響細(xì)胞的生物學(xué)行為，使其發(fā)生惡變,核糖體的增加,無(wú)論正常組織或腫瘤組織，總核糖體合成增多是細(xì)胞增殖活躍的常見(jiàn)特征。,核糖體RIBOSOME亦稱核蛋白體，由RRNA和80多種蛋白質(zhì)組成。是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的重要場(chǎng)所。單核糖體有二個(gè)亞基，分別稱為大亞基和小亞基。,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些腫瘤抑制子和前癌基因可以影響核糖體成熟，通過(guò)改變蛋白質(zhì)合成機(jī)器中的某些組分而誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。,MYC（原癌基因產(chǎn)物）和PTEN（腫瘤抑制子）,原癌基因產(chǎn)物MYC和腫瘤抑制子PTEN通過(guò)對(duì)核糖體蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄和S6活性的調(diào)節(jié)表現(xiàn)出對(duì)核糖體生物合成的直接調(diào)節(jié)作用。,腫瘤抑制子PTEN也可以調(diào)節(jié)細(xì)胞體積的大小，并且也與核糖體的生物合成有關(guān)。PTEN對(duì)S6是一種負(fù)性調(diào)節(jié)，在許多腫瘤細(xì)胞中PTEN是突變的,CMYC編碼轉(zhuǎn)錄因子，在一些B細(xì)胞特異的腫瘤和其它的幾種瘤形成中，CMYC由于基因組異常而失調(diào)。,溶酶體明顯增多,溶酶體（LYSOSOMES）真核細(xì)胞中的一種細(xì)胞器；為單層膜包被的囊狀結(jié)構(gòu)，直徑約0025～08微米；內(nèi)含多種水解酶，專司分解各種外源和內(nèi)源的大分子物質(zhì)。1955年在鼠肝細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)。,溶酶體與腫瘤的關(guān)系致癌物質(zhì)引起細(xì)胞分裂調(diào)節(jié)機(jī)能的障阻及染色體畸變，可能與溶酶體釋放水解酶的作用有關(guān)；某些影響溶酶體膜通透性的物質(zhì)，如巴豆油，某些去垢劑、高壓氧等，是促進(jìn)致癌作用的輔助因子，也能引發(fā)細(xì)胞的異常分裂；在核膜殘缺的情況下，核膜對(duì)核的保護(hù)喪失，溶酶體可以溶解染色質(zhì)，而引起細(xì)胞突變；溶酶體代謝過(guò)程中的某些產(chǎn)物是腫瘤細(xì)胞增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)；致癌物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，在與染色體整合之前，總是先貯存在溶酶體中，這已為放射自顯影所證實(shí)。,內(nèi)質(zhì)網(wǎng),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)在抑制腫瘤發(fā)生中扮演重要角色美國(guó)密歇根大學(xué)、加州大學(xué)舊金山分校等機(jī)構(gòu)的研究人員發(fā)現(xiàn)HRASG12V在癌癥發(fā)生中參與一種迅速的細(xì)胞周期停滯，這種停滯與ER的大面積真空和擴(kuò)張有關(guān)，他們認(rèn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是腫瘤控制的一個(gè)“守門員”的直接功能。,細(xì)胞器與抗腫瘤治療,線粒體治療,腫瘤細(xì)胞通過(guò)內(nèi)吞方式攝入金納米棒，接著被轉(zhuǎn)運(yùn)到內(nèi)吞體和溶酶體，進(jìn)而改變了溶酶體膜的通透性而被釋放到胞漿，然后靶向運(yùn)輸?shù)骄€粒體，引起線粒體膜電位降低，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡。,與溶酶體相關(guān)的治療,高頻熱療高熱使癌細(xì)胞中溶酶體的活性升高，加速癌細(xì)胞的死亡,核糖體失活蛋白（RIBOSOMEINACTIVITINGPROTEINS,RIPS）是一類重要的天然抗癌活性成份，廣泛存在于植物界，如蓖麻蛋白、天花粉蛋白、苦瓜蛋白等,與核糖體相關(guān)的治療,與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)的治療,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)酶ENTPD5在原代人類腫瘤樣品，以及細(xì)胞系中，伴隨著AKT的增長(zhǎng)而增加研究人員通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)證明ENTPD5是PI3K/PTEN作用途徑中的一部分，因此能作為一種潛在的抗腫瘤治療靶標(biāo)。,（2）胞質(zhì)顆粒的出現(xiàn),黑色素顆粒,淋巴結(jié)惡性黑色素瘤轉(zhuǎn)移,嗜酸性顆粒,食管顆粒細(xì)胞瘤，其細(xì)胞胞質(zhì)豐富,充滿嗜酸性顆粒，部分顆粒融合呈小球狀HE400,3細(xì)胞膜異常與腫瘤,（1）正常細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),（1）腫瘤細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)異常,糖蛋白丟失或合成新的糖蛋白,糖脂減少或合成新的糖脂,膜表面新生抗原,腫瘤特異抗原（TUMORSPECIFICANTIGEN,TSA）,粘蛋白胰腺癌、乳腺癌、黑色素瘤抗原基因表達(dá)產(chǎn)物、乳腺癌抗原基因表達(dá)產(chǎn)物、胃癌、肉瘤、非小細(xì)胞肺癌等抗原基因表達(dá)產(chǎn)物、P15基因黑色素瘤、原癌基因HER2/NEU乳腺癌、卵巢癌、融合蛋白P210白血病。DNA病毒編碼的腫瘤特異性抗原有猿猴空泡病毒40（SV40）、人乳頭瘤病毒宮頸癌、EB病毒免疫母細(xì)胞性淋巴瘤、乙型肝炎病毒肝癌。RNA病毒中的人T細(xì)胞白血病病毒HTLV1、突變的RAS基因編碼蛋白消化道腫瘤、膀胱癌、前列腺癌、突變P53基因編碼蛋白一種抑癌基因產(chǎn)物，見(jiàn)于消化、泌尿、呼吸等多種腫瘤等,腫瘤相關(guān)抗原（TUMORASSOCIATEDANTIGEN,TAA）,甲胎蛋白AFP原發(fā)性肝細(xì)胞癌約70以上AFP在400ΜG/L以上，多逐漸升高，亦有不高于400ΜG/L，甚至在正常水平的患者癌胚抗原CEA結(jié)腸癌的標(biāo)志物60～90患者升高，但以后發(fā)現(xiàn)胰腺癌80、胃癌60、肺癌75和乳腺癌60也有較高表達(dá)糖蛋白抗原CA50許多惡性腫瘤患者血中皆可升高，如666的肺癌、882的肝癌、689的胃癌、885的卵巢或子宮頸癌、944胰或膽管癌，其他如直腸癌、膀胱癌等皆有70以上是升高的CA125822卵巢癌、58胰腺癌、32肺癌，及其他非婦科腫瘤皆有不同程度的升高,凝集素受體分布改變,凝集素（LECTIN）是指一種從各種植物，無(wú)脊椎動(dòng)物和高等動(dòng)物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白，因其能凝集紅血球（含血型物質(zhì)），故名凝集素。,常用的為植物凝集素（PHYTOAGGLUTIN，PNA），通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A（CONCONVALINA，CONA）、麥胚素（WHEATGERMAGGLUTININ，WGA）、花生凝集素（PEANUTAGGLUTININ，PNA）和大豆凝集素（SOYBEANAGGLUTININ，SBA）等，凝集素是它們的總稱。,,,,,凝集素標(biāo)記技術(shù),凝集素受體為特異性的單糖或寡糖。人類的凝集素受體多位于細(xì)胞膜或細(xì)胞器的膜上,凝集素受體表達(dá),凝集素可作為腫瘤組織源性的標(biāo)記、腫瘤特異性診斷的標(biāo)志、腫瘤惡性的標(biāo)記和不同腫瘤的分化標(biāo)記。如張華忠等（1987）報(bào)道115例胃癌標(biāo)記PHA陽(yáng)性率高達(dá)9043，而正常胃粘膜基本是陰性，故認(rèn)為PHA是胃癌的診斷性標(biāo)志。SBA對(duì)乳腺惡性腫瘤陽(yáng)性率達(dá)79，而對(duì)良性病變均呈陰性反應(yīng)，提示SBA可能為乳腺惡性腫瘤的相關(guān)標(biāo)志。凝集素還有助于判別腫瘤的組織類型，如神經(jīng)系統(tǒng)星形細(xì)胞瘤CONA陽(yáng)性，小膠質(zhì)細(xì)胞瘤陰性。在腫瘤中，凝集素的不同分布導(dǎo)致凝激素受體分布改變。,4細(xì)胞骨架異常與腫瘤,細(xì)胞骨架由微管MICROTUBLE、微絲MICROFILAMENT和中間纖維INTERMEDIATEFILGAMENT組成。在長(zhǎng)期傳代的腫瘤細(xì)胞中微管顯著減少，細(xì)胞表面的微突也減少。腫瘤細(xì)胞微管的變化主要發(fā)生在間期,而在分裂期,紡錘體微管與正常細(xì)胞相同。研究表明,微絲束和其末端粘著斑的破壞以及肌動(dòng)蛋白小體的出現(xiàn),可能與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移特性有關(guān),肌動(dòng)蛋白小體形成,可能代表腫瘤細(xì)胞高轉(zhuǎn)移的惡性表型。,腫瘤細(xì)胞（紅色染色顯示細(xì)胞骨架，藍(lán)色的是細(xì)胞核）,正常細(xì)胞,5不同類型癌細(xì)胞的形態(tài)特征,癌細(xì)胞大致可分為三大類鱗癌、腺癌、未分化癌,1．鱗癌,一般起源于鱗狀上皮，也可起源于已經(jīng)發(fā)生鱗化的柱狀上皮。根據(jù)涂片中大多數(shù)癌細(xì)胞的分化程度，可把鱗癌分為高分化和低分化兩大類。,以類似表層細(xì)胞的癌細(xì)胞為主，并可見(jiàn)少量中層癌細(xì)胞，這些癌細(xì)胞分化比較成熟，表現(xiàn)多形性，如纖維形、蝌蚪形、蛇形等癌細(xì)胞，常散在分布。癌細(xì)胞胞質(zhì)角化明顯，故稱角化型鱗癌。,高分化角化型鱗癌,癌細(xì)胞形態(tài)類似底層鱗狀上皮細(xì)胞，少數(shù)類似中層鱗狀上皮細(xì)胞，不出現(xiàn)或很少出現(xiàn)表層癌細(xì)胞。癌細(xì)胞形態(tài)主要為圓形、卵圓形，多數(shù)成片脫落，也可單個(gè)散在，胞質(zhì)少、不角化。HE染色呈暗紅色，巴氏染色為暗綠色，核大，核仁清楚。,低分化非角化型鱗癌,巴氏染色,一般起源于柱狀上皮和腺上皮。根據(jù)癌細(xì)胞大小，細(xì)胞內(nèi)的粘液多少，有無(wú)形成腺腔樣結(jié)構(gòu)，腺癌亦可分為高分化和低分化兩型。,2．腺癌,常形成腺樣排列。癌細(xì)胞大，胞質(zhì)豐富，HE染色為淺紅色，巴氏染色為淺綠色，其中可見(jiàn)粘液空泡。核大，核染色質(zhì)顆粒粗，染色深，核仁巨大。,高分化腺癌,癌細(xì)胞小、胞質(zhì)少，嗜堿性，粘液空泡少見(jiàn)。癌細(xì)胞常成團(tuán)脫落，排列緊密，形成桑椹樣結(jié)構(gòu)。核小偏位，邊緣胞質(zhì)隆起。核染色質(zhì)較粗，核仁小。,低分化腺癌,,,低分化前列腺癌,一般認(rèn)為起源于支氣管上皮的嗜銀細(xì)胞，可產(chǎn)生多肽類激素而引起內(nèi)分泌癥狀，故屬于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤。癌細(xì)胞小，圓形、卵圓形或瓜子形。胞質(zhì)極少，細(xì)胞核約比淋巴細(xì)胞大半倍到一倍，核畸形明顯，染色深，癌細(xì)胞排列緊密而不重疊，成片出現(xiàn)時(shí)，往往呈鑲嵌樣結(jié)構(gòu)；單行排列時(shí)呈束狀。這是未分化癌的特征性表現(xiàn)。,3．小細(xì)胞型未分化癌,小細(xì)胞未分化癌HE染色）,小細(xì)胞未分化癌巴氏染色）,鱗癌細(xì)胞、腺癌細(xì)胞和未分化癌細(xì)胞的鑒別,小結(jié),腫瘤細(xì)胞的形態(tài)特征,核質(zhì)比顯著高于正常細(xì)胞；出現(xiàn)巨核、雙核或多核，染色體呈不均一狀態(tài)；線粒體表現(xiàn)為不同的多型性、腫脹、增生；細(xì)胞骨架紊亂，某些成分減少，骨架組裝不正常；細(xì)胞表面特征改變，產(chǎn)生TSA和TAA。,,THANKYOU,

簡(jiǎn)介：市一中普通高中生物學(xué)業(yè)水平測(cè)試模擬卷四市一中普通高中生物學(xué)業(yè)水平測(cè)試模擬卷四一、選擇題（選擇題（每題只有一個(gè)選項(xiàng)符合題意。每題2分，共50分）1下列物質(zhì)中，動(dòng)物細(xì)胞肯定沒(méi)有的是A脂肪B糖原C核酸D纖維素2正常情況下，細(xì)胞分化的結(jié)果是A遺傳物質(zhì)發(fā)生改變B使細(xì)胞代謝增強(qiáng)C使細(xì)胞的全能性更容易表現(xiàn)D賦予不同種類細(xì)胞特定的結(jié)構(gòu)和功能3在哺乳動(dòng)物受精的過(guò)程中，精子能夠與卵細(xì)胞相互識(shí)別結(jié)合。這一現(xiàn)象體現(xiàn)出細(xì)胞膜能夠A進(jìn)行細(xì)胞間的信息交流B控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞C將細(xì)胞與外界環(huán)境分隔開(kāi)D保護(hù)細(xì)胞內(nèi)部環(huán)境的相對(duì)穩(wěn)定4科學(xué)家沃森和克里克共同提出了A細(xì)胞學(xué)說(shuō)B細(xì)胞膜的流動(dòng)鑲嵌模型CDNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型D現(xiàn)代生物進(jìn)化理論5光合作用的光反應(yīng)階段，氧氣及ATP的產(chǎn)生都離不開(kāi)A葉綠素和CO2BH2O、葉綠素、光能CH2O和CO2DH2O、光能、CO26與被動(dòng)運(yùn)輸相比較，主動(dòng)運(yùn)輸?shù)娘@著特點(diǎn)是A需要消耗能量B有酶的參與C需載體的協(xié)助D順濃度梯度7人體由溫暖環(huán)境突然進(jìn)入寒冷環(huán)境時(shí)，機(jī)體的反應(yīng)是A甲狀腺激素分泌量增加B溫覺(jué)感受器興奮C細(xì)胞內(nèi)酶的活性下降D皮膚血管舒張8下圖中能正確表示胰蛋白酶對(duì)底物的分解速率與溫度之間關(guān)系的是ABCD9下列人類疾病中，不屬于遺傳病的是A白化病B紅綠色盲C艾滋病D貓叫綜合征10在臨床上已證實(shí)，將受流感病毒感染后治愈者（甲）的血清，注射到另一流感患者（乙）體內(nèi)能夠提高治療效果。甲血清中具有治療作用的物質(zhì)是A疫苗B胰島素C抗體D抗原11基因型為AABB的生物，可產(chǎn)生的配子種類數(shù)是A1種B2種C3種D4種12人體內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定是健康的保障。由于人體內(nèi)環(huán)境成分發(fā)生明顯變化而引起的病癥是D一個(gè)精原細(xì)胞和一個(gè)卵原細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂都只形成一個(gè)子細(xì)胞23某動(dòng)物種群中，AA個(gè)體占36，AA個(gè)體占16，該種群隨機(jī)交配產(chǎn)生的后代中AA個(gè)體的比例是A16?4?2?8下面是某種單基因遺傳病的家系圖譜。有關(guān)敘述正確的是A該病是顯性基因遺傳病B該病在人群中的發(fā)病率女性高于男性CI1是雜合體DⅡ4是純合體25要實(shí)現(xiàn)人與自然的和諧發(fā)展，下列措施最合理的是A通過(guò)生物技術(shù)手段，轉(zhuǎn)化淀粉生產(chǎn)可再生能源B使用化學(xué)農(nóng)藥防治病蟲害，保證糧食穩(wěn)產(chǎn)C發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)，實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和能量的多級(jí)利用D大力開(kāi)墾濕地，擴(kuò)大糧食種植面積26人體皮下含量豐富的儲(chǔ)能物質(zhì)是A糖原B淀粉C蛋白質(zhì)D脂肪27科學(xué)家在研究生物體化學(xué)成分時(shí)，發(fā)現(xiàn)組成生物體的元素在無(wú)機(jī)自然界中也是常見(jiàn)元素，這一事實(shí)主要說(shuō)明A生物與非生物沒(méi)有區(qū)別B生物界與非生物界具有統(tǒng)一性C生物來(lái)源于非生物D生物界與非生物界具有差異性28現(xiàn)代遺傳學(xué)認(rèn)為，在絕大多數(shù)生物中基因是A氨基酸序列B有遺傳效應(yīng)的DNA片段C核糖核苷酸序列D所有脫氧核苷酸序列29細(xì)胞膜主要由脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成，其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是A具有一定的流動(dòng)性B將細(xì)胞與外界環(huán)境分隔開(kāi)C控制物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞D進(jìn)行細(xì)胞間的信息交流30下列物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞時(shí)，需要消耗細(xì)胞代謝產(chǎn)生能量的是A水分子B葡萄糖C鉀離子D氧氣31右圖為某種生物細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中某一時(shí)期的圖像，下列有關(guān)敘述不正確的是A該生物為一種動(dòng)物B該生物的體細(xì)胞中含有8條染色體C該細(xì)胞有8個(gè)DNA分子D該細(xì)胞中含有8條染色體32下列關(guān)于人體內(nèi)環(huán)境和體液的說(shuō)法正確的是A內(nèi)環(huán)境的理化性質(zhì)是恒定不變的B內(nèi)環(huán)境包括血液、組織液和淋巴三部分C體液的成分主要是水，不含蛋白質(zhì)D細(xì)胞內(nèi)液是體液的一部分33一個(gè)雙鏈DNA分子的堿基中，胸腺嘧啶（T）占17，則腺嘌呤（A）和鳥(niǎo)嘌呤（G）之和所占比例為A17?3?4?04番茄的正常植株（A）對(duì)矮生植株（A）為顯性，紅果（B）對(duì)黃果（B）為顯性，兩對(duì)基因獨(dú)立遺傳。基因型為AABB的番茄自交產(chǎn)生后代矮生紅果類型中矮生紅果純合子所占比例為A12B13C19D116

簡(jiǎn)介：概述,中國(guó)不僅是一個(gè)人口大國(guó)，而且也是病毒性肝炎的高發(fā)區(qū)。目前已知的甲、乙、丙、丁、戊、庚及TTV型肝炎，在我國(guó)均有發(fā)生，其中尤以甲、乙、丙、戊4個(gè)型別的流行情況嚴(yán)重。僅乙肝病毒攜帶者以達(dá)12億之多。可以說(shuō)，病毒性肝炎是對(duì)我國(guó)危害最為嚴(yán)重的傳染病。,肝炎病毒,甲型肝炎病毒與戊型肝炎病毒由消化道傳播，引起急性肝炎，不轉(zhuǎn)為慢性肝炎或慢性攜帶者。乙型與丙型肝炎病毒主要由血液及體液、密切接觸、母嬰傳播、醫(yī)源性等而傳播，除引起急性肝炎外，可致慢性肝炎，暴發(fā)性肝炎并與肝硬化及肝癌相關(guān)。丁型肝炎病毒為一種缺陷病毒庚型肝炎病毒（HGV）TT型肝炎病毒（TTV）,一、甲型肝炎病毒（HAV）,,HAV的生物學(xué)性狀,屬小RNA病毒科，直徑27NM，無(wú)包膜呈20面立體對(duì)稱外面為一獨(dú)立外殼，內(nèi)含一個(gè)單鏈RNA分子,HAV的電鏡照片,HAV的結(jié)構(gòu),HAV的其他生物學(xué)特性,培養(yǎng)特性原代肝細(xì)胞或恒河猴胚腎傳代株細(xì)胞對(duì)HAV敏感，生長(zhǎng)緩慢，不引起細(xì)胞裂解抵抗力比腸道病毒更耐熱，60℃1H不被滅活，100OC5分鐘可滅活，對(duì)乙醚、酸處理（PH3）均有抵抗力。氯消毒、紫外線照射、福爾馬林處理均可破壞其傳染性,HAV的致病性,糞－口途徑傳播,口咽部或唾液腺中早期增殖,腸道與局部淋巴結(jié)中大量增殖,入血并形成病毒血癥,肝臟為最終靶器官（病毒直接損傷或免疫病理作用）,通過(guò)膽汁隨糞便排出體外,,,,,,,HAV的免疫性,HAV只存在單一的抗原抗體系統(tǒng)，即HAVAG和抗HAV無(wú)論顯性感染還是隱性感染均能誘生出高效價(jià)抗HAV抗HAVIGM陽(yáng)性是甲肝的確診依據(jù)IGM型抗體在感染后僅持續(xù)存于36個(gè)月IGG型抗體則可存在多年,甲型肝炎,糞－口途徑傳播傳染源多為甲肝患者通過(guò)污染的水源、食物、海產(chǎn)品、食具等傳播常造成散發(fā)性流行或大面積流行,常見(jiàn)癥狀,流感樣癥狀厭食惡心黃疸（眼部及皮膚呈黃色）尿黃腹痛乏力,甲肝的防治,控制傳染源隔離治療急性期病人所有廢棄物及日常用水均需嚴(yán)格消毒切斷傳播途徑養(yǎng)成良好的衛(wèi)生飲食習(xí)慣水產(chǎn)品不宜生吃水果蔬菜要洗干凈,免疫預(yù)防,人工被動(dòng)免疫可用丙種球蛋白及胎盤球蛋白制劑。應(yīng)急預(yù)防甲型肝炎有一定效果。人工主動(dòng)免疫可用減毒活疫苗。我國(guó)生產(chǎn)的甲肝活疫苗只注射一次即可獲得持久免疫力。基因工程疫苗研制亦已成功。,二、乙型肝炎（HBV）,生物學(xué)性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)DANE顆粒HBV的小球形顆粒HBV的管形顆粒,,,,,電鏡下的HBV,形態(tài)與結(jié)構(gòu)（1）,大球形顆粒亦稱DANE顆粒，它是一種由外殼和一個(gè)含有DNA分子的核衣殼組成的病毒顆粒，直徑約42NM。核衣殼為20面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)。DANE顆粒表面（外衣殼）含有HBSAG、PRES1、PRES2；內(nèi)衣殼含有HBCAGHBEAG；核心含有雙股有缺口的DNA鏈和依賴DNA的DNA多聚酶。目前認(rèn)為DANE顆粒即完整的HBV。,DANE顆粒,形態(tài)與結(jié)構(gòu)（2）,小形球顆粒直徑約22NM，是HBV感染后血液中最多見(jiàn)的一種。它由HBSAG、PRES1、PRES2組成。未檢出DNA多聚酶活性。目前認(rèn)為HBV的小顆粒不是HBV，可能是HBV感染肝細(xì)胞時(shí)合成過(guò)剩的外殼蛋白而游離于血循環(huán)中。,HBV的小球形顆粒,形態(tài)與結(jié)構(gòu)（3）,管形顆粒直徑約22NM，長(zhǎng)度可在100～700NM之間實(shí)際上它是一串聚合起來(lái)的小顆粒。同樣具有HBSAG、PRES1、PRES2的抗原性。,HBV的管形顆粒,HBV的抗原組成,表面抗原（HBSAG）核心抗原（HBCAG）E抗原（HBEAG）前S1（PRES1）前S2（PRES2）,表面抗原HBSAG,存在于三型顆粒中是HBV感染的主要標(biāo)志分亞型（A,D/Y,W/R）ADR、ADW、AYR、AYW四種產(chǎn)生抗HBS，是HBV的中和抗體，具有免疫保護(hù)作用。,核心抗原（HBCAG）,僅存在于DANE顆粒的核心和乙型肝炎患者的肝細(xì)胞核內(nèi)。不易在血液中檢出。刺激機(jī)體產(chǎn)生抗HBC（IGG、IGM）。在乙型肝炎的急性期、恢復(fù)期和HBCAG攜帶者中?？蓽y(cè)出抗～HBC。此抗體對(duì)病毒無(wú)中和作用。體內(nèi)如發(fā)現(xiàn)HBCAG或抗～HBC表示HBV在肝內(nèi)持續(xù)復(fù)制。HBCAG可被TC細(xì)胞識(shí)別，觸發(fā)TC細(xì)胞的殺傷機(jī)制，破壞清除受染的肝細(xì)胞。,E抗原HBEAG,僅存在于DANE顆粒中游離存在于血液中為病毒復(fù)制及強(qiáng)傳染性的指標(biāo)提示病人易轉(zhuǎn)為慢性產(chǎn)生抗－HBE，是預(yù)后良好的征象,PRES1抗原、PRES2抗原,前S1（PRES1）抗原及前S2（PRES2）抗原主要存在于三型顆粒的表面。可吸附于肝細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，其免疫原性比表面抗原（HBSAG）更強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗PRES1和抗PRES2可阻斷HBV與肝細(xì)胞結(jié)合。,HB抗原抗體系統(tǒng),HBSAG、抗HBSHBEAG、抗HBEHBCAG、抗HBCPRES1、抗PRES1PRES2、抗PRES2,HBV的其它生物學(xué)性狀,培養(yǎng)黑猩猩動(dòng)物模型、鴨動(dòng)物模型用分子生物學(xué)技術(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)成功抵抗力抵抗力強(qiáng)于HAV對(duì)低溫干燥紫外線耐受不被70％乙醇滅活100℃10分鐘可滅活,致病性及免疫性,HBV的致病性,傳染源主要傳染源是患者或無(wú)癥狀HBSAG攜帶者傳播途徑血液及體液母嬰傳播密切接觸（主要是性接觸）注射、針刺、文身等（醫(yī)源性）,HBV的致病機(jī)制,病毒直接損傷或免疫病理作用免疫低下HBSAG無(wú)癥狀攜帶者病毒變異逃逸免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷為主免疫復(fù)合物性的免疫損傷肝外損傷自身免疫反應(yīng)的免疫損傷肝特異性脂蛋白抗原,乙型肝炎的特點(diǎn),我國(guó)約有4060人群曾受到過(guò)HBV的感染表現(xiàn)急性乙肝的僅占011亞臨床3075慢性乙肝15乙肝病毒攜帶720急性乙肝如治療不徹底，10患者可轉(zhuǎn)為慢性乙肝,HBV與原發(fā)性肝癌,流行病學(xué)方面動(dòng)物模型病毒分子結(jié)構(gòu),免疫性,1抗體的保護(hù)作用2細(xì)胞免疫的保護(hù)作用,微生物學(xué)檢查,乙肝五項(xiàng)（兩對(duì)半）及HBVDNA的臨床意義,HBSAG、抗HBSHBEAG、抗HBE抗HBC（HBCAG）HBVDNADNA多聚酶,,病毒抗原抗體系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果分析,四、預(yù)防及免疫,控制傳染源，切斷傳播途徑人工自動(dòng)免疫疫苗（血源性、基因工程人工被動(dòng)免疫高效價(jià)人血清球蛋白（HBIG）,丙型肝炎病毒（HCV）,HCV的生物學(xué)性狀,40～60NM球形有包膜單正鏈RNA,HCV的致病性與免疫性,傳播途徑似HBV是引起輸血后慢性肝炎和肝硬化的主要原因潛伏期48周無(wú)癥狀HCV攜帶者和慢性丙肝者多見(jiàn)誘發(fā)肝外損傷腎小球腎炎免疫力不牢固,丙型肝炎的特點(diǎn),我國(guó)丙肝病毒攜帶者的比例在25隨著年齡的增長(zhǎng)，丙肝病毒攜帶率亦增高易感人群感染HCV后，慢性化的比例高達(dá)50以上乙肝患者容易重疊HCV感染,HCV的診斷及預(yù)防,檢查病毒RNA檢測(cè)抗HCV因HCV免疫原性不強(qiáng)及變異，目前尚無(wú)可用疫苗,丁型肝炎病毒（HDV）,HDV是一種缺陷病毒由HBSAG構(gòu)成其外殼HDV定位于肝細(xì)胞核內(nèi)，在血液中由HBSAG包被，形成3537NM顆粒單負(fù)鏈環(huán)狀RNA,HDV的結(jié)構(gòu),RIZZETTO于1977年首先發(fā)現(xiàn)，又稱?抗原3537NM球形顆粒；17KBSSRNA含9個(gè)ORF,丁型肝炎的特點(diǎn),只能感染HBSAG陽(yáng)性的病人我國(guó)丁肝感染率在165，西南地區(qū)感染率高患者可不定期隔離，或隔離至肝功能正常，或HBSAG陰轉(zhuǎn)。病原學(xué)檢查為HDAG、抗HD及HDVRNA。持續(xù)高滴度IGG型抗HD是慢性HDV感染的主要血清學(xué)標(biāo)志。一旦乙肝患者感染了HDV，尤其是在慢性乙肝的基礎(chǔ)上感染，容易發(fā)展成為重度慢性乙肝、重型肝炎，甚至肝硬化。,微生物學(xué)檢查及預(yù)防,診斷為檢測(cè)抗HD、HDVRNA丁型肝炎傳播途經(jīng)與乙型肝炎相似。傳播途徑和防治原則似HBV。,戊型肝炎病毒（HEV）,球形，無(wú)包膜直徑32～34NM單正鏈RNA，3個(gè)ORF兩個(gè)血清型,致病性及免疫,主要為糞－口途徑傳播由膽汁經(jīng)糞便排出體外對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷及免疫病理作用多表現(xiàn)為急性戊型肝炎孕婦感染常致流產(chǎn),

簡(jiǎn)介：關(guān)注生物學(xué)標(biāo)志物個(gè)體化化療機(jī)遇與挑戰(zhàn)共存關(guān)注生物學(xué)標(biāo)志物個(gè)體化化療機(jī)遇與挑戰(zhàn)共存北京大學(xué)臨床腫瘤學(xué)院北京腫瘤醫(yī)院胸部腫瘤內(nèi)科王志杰王潔本屆大會(huì)的主題是“個(gè)體化治療”，其中個(gè)體化化療的重點(diǎn)仍然集中在生物學(xué)標(biāo)志物的預(yù)測(cè)和預(yù)后價(jià)值上，相關(guān)的研究進(jìn)展為個(gè)體化化療提供了機(jī)遇，但同時(shí)也對(duì)其今后的發(fā)展提出了問(wèn)題。輔助化療標(biāo)志物如何應(yīng)用DNA修復(fù)基因是一組重要的生物學(xué)預(yù)測(cè)指標(biāo)，包括ERCC1、RRM1以及BRCA1等。許多研究證實(shí)這些指標(biāo)可以預(yù)測(cè)化療的療效，同時(shí)也有研究認(rèn)為它們本身就是很好的預(yù)后因素。此前的國(guó)際肺癌輔助化療試驗(yàn)（IALT）表明，在未行輔助化療的對(duì)照組中，ERCC1陽(yáng)性患者的生存期更長(zhǎng)，輔助化療組則相反。在本屆大會(huì)上，美國(guó)的西蒙（SIMON）等分析了術(shù)后未行輔助化療的肺癌Ⅰ期患者的RRM1表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性者的生存期比陰性者延長(zhǎng)了近60個(gè)月（P0002），而且疾病進(jìn)展危險(xiǎn)也顯著下降（P004）。這些結(jié)果提示，對(duì)于輔助化療作用尚不明確的肺癌早期患者，根據(jù)生物學(xué)標(biāo)志物進(jìn)行選擇是可行的，對(duì)低表達(dá)者給予輔助化療，而高表達(dá)者單純手術(shù)治療。近來(lái)，美國(guó)西南腫瘤協(xié)作組（SWOG）正在進(jìn)行一項(xiàng)前瞻性研究，將術(shù)后Ⅰ期患者按ERCC1和RRM1表達(dá)情況分組，對(duì)二者均高表達(dá)者予以觀察，而對(duì)RRM1和（或）ERCC1低表達(dá)者進(jìn)行吉西他濱順鉑治療，其結(jié)果值得期待。研究結(jié)論互悖怎樣解決遺憾的是，本屆大會(huì)仍然缺乏大規(guī)模、前瞻性隨機(jī)研究，報(bào)告的數(shù)項(xiàng)相關(guān)研究均為回顧性分析，其中規(guī)模最大的為萊曼（REIMAN）等對(duì)表達(dá)3型Β微管蛋白（ΒTUBULINⅢ）的患者的預(yù)后分析。該分析納入4項(xiàng)大型的術(shù)后輔助化療臨床試驗(yàn)（IALT、JBR10、ANITA、CALGB9633）的1149例患者。結(jié)果顯示，術(shù)后觀察組ΒTUBULINⅢ高表達(dá)者總生存OS，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）為127，P0008和無(wú)疾病生存（DFS，HR130，P0001）顯著劣于低表達(dá)者，而輔助化療組中未發(fā)現(xiàn)該蛋白表達(dá)對(duì)患者生存有預(yù)測(cè)作用。上述結(jié)論似乎與既往研究不一致，但是該研究存在兩處缺陷，可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果偏倚。第一，4項(xiàng)研究的輔助化療方案不一致，CALGB9633研究為紫杉醇卡鉑，其他三項(xiàng)為長(zhǎng)春瑞濱順鉑，IALT研究部分為依托泊苷順鉑治療，而ΒTUBULINⅢ表達(dá)對(duì)不同方案的預(yù)測(cè)作用可能存在差異。第二，4項(xiàng)研究所針對(duì)的人群分期不同，因而預(yù)后也不一致。ERCC1的表達(dá)卻不一致。雖然該研究樣本量很小，但卻提示若能綜合原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶生物學(xué)標(biāo)志物的表達(dá)，就有可能更好地指導(dǎo)個(gè)體化治療。縱觀本屆大會(huì)，許多懸而未決的問(wèn)題急須通過(guò)大規(guī)模的前瞻性研究證實(shí)。許多研究中心已經(jīng)啟動(dòng)Ⅲ期臨床試驗(yàn)，其結(jié)果公布之時(shí)可能就是個(gè)體化化療“破繭成蝶”之日。期待下屆大會(huì)能有里程碑式的研究進(jìn)展，給我們帶來(lái)更多的驚喜。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)王金發(fā)老師的細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)練習(xí)題和參考答案第一部分一、名詞解釋１、細(xì)胞生物學(xué)2、細(xì)胞３、細(xì)胞膜４、簡(jiǎn)單擴(kuò)散５、易化擴(kuò)散６、主動(dòng)運(yùn)輸７、膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白８、膜泡運(yùn)輸９、膜受體1０、配體１１、受體介導(dǎo)的胞吞作用1２、胞吞作用１３、胞吐作用二、單頂選擇題１、原核細(xì)胞不具備的是Ａ、細(xì)胞膜Ｂ、核糖體Ｃ、DNAD、核膜、核仁２、真核細(xì)胞的細(xì)胞膜主要成分中不包括A、蛋白質(zhì)B、脂類C、糖類D、核酸３、影響細(xì)胞膜流動(dòng)性的主要因素是A、溫度B、離子強(qiáng)度C、PHD、脂肪酸不飽和程度４、膜脂分子分布的不對(duì)稱性是指A、脂分子在膜上親水頭部與疏水尾部不對(duì)稱B、在兩層膜脂中脂分子的種類和數(shù)量不同C、在兩層膜脂中膜蛋白不同D、細(xì)胞膜外表面是親水的，內(nèi)表面是疏水的５、造成細(xì)胞膜流動(dòng)性的主要原因是A、胞內(nèi)壓力B、膜蛋白的運(yùn)動(dòng)C、膜脂分子的運(yùn)動(dòng)D、蛋白質(zhì)與脂類的有機(jī)組合６、膜脂分子不具備的運(yùn)動(dòng)方式是A、向各方向運(yùn)動(dòng)B、側(cè)向擴(kuò)散C、翻轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)D、彎曲運(yùn)動(dòng)７、糖分布在細(xì)胞膜的A、內(nèi)表面B、外表面１８、膜受體與配體結(jié)合的部位是A、活性部位B、結(jié)合部位C、調(diào)節(jié)部位D、催化部位１９、細(xì)胞膜上某種膜受體的數(shù)量有限，只能與一定量的配體結(jié)合，此性質(zhì)是A、特異性B、可飽和性C、高親合性D、可逆性２０、下列過(guò)程中，不屬于跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的是A、胞吞作用B、簡(jiǎn)單擴(kuò)散C、易化擴(kuò)散D、主動(dòng)運(yùn)輸２１、在膜受體轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)時(shí)，不能作為第二信使的物質(zhì)是A、CAMPB、CGMPC、G蛋白D、IP3和DG２２、催化受體完成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是A、開(kāi)啟離子通道B、激活G蛋白，使之活化某種酶C、自身TPK活性D、CAMP２３、在G蛋白中，Α亞基的活性狀態(tài)是A、與GTP結(jié)合，與ΒΓ分離B、與GTP結(jié)合，與ΒΓ聚合C、與GDP結(jié)合，與ΒΓ分離D、與GTP結(jié)合，與ΒΓ聚合24、偶聯(lián)G蛋白的CAMP信號(hào)途徑中刺激型和抑制型途徑的共同點(diǎn)是A、G蛋白都作用于ACB、都有同樣的G蛋白C、都有同樣的受體D、都使CAMP含量上升25、AMP信號(hào)途徑和IP3和DG途徑的共同點(diǎn)是A、都活化ACB、都活化特異的磷酯酶CC、都要通過(guò)G蛋白活化特定的酶D、都只產(chǎn)生一種第二信使26、在催化受體完成信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)，充當(dāng)?shù)诙攀沟氖茿、TPKB、磷酸化的靶蛋白C、CAMPD、CA227、細(xì)胞表面是指

簡(jiǎn)介：第1頁(yè)共5頁(yè)七年級(jí)期末考試生物學(xué)試題七年級(jí)期末考試生物學(xué)試題本卷滿分30分，考試時(shí)間30分鐘。注意本卷所有答案均涂在答題卡上，只交答題卡。一、請(qǐng)你能選擇一個(gè)最合適的答案。每小題05分，共20分。1下列各項(xiàng)中，屬于生物基本特征的是A生物都能對(duì)外界刺激作出反應(yīng)B生物都是由細(xì)胞構(gòu)成的C生物都能進(jìn)行光合作用D生物都能自由運(yùn)動(dòng)2關(guān)于調(diào)查生物種類下列給出了具體步驟請(qǐng)按正確順序排隊(duì)①選擇調(diào)查范圍②歸類③調(diào)查記錄④整理資料⑤討論與交流⑥設(shè)計(jì)調(diào)查路線⑦分組A①⑦⑥③②④⑤B④⑤①⑦⑥③②C②④⑤①⑦⑥③D③②①⑦⑥④⑤3下列哪句詩(shī)句是描寫草原生態(tài)系統(tǒng)的A采菊東籬下，悠然見(jiàn)南山B誰(shuí)言寸草心，報(bào)得三春暉C野火燒不盡，春風(fēng)吹又生D停車坐愛(ài)楓林晚，霜葉紅于二月花4在一個(gè)繁殖的季節(jié)里，一條鯉魚能產(chǎn)幾十萬(wàn)粒卵，這種現(xiàn)象說(shuō)明A生物影響環(huán)境B生物適應(yīng)環(huán)境C生物之間是合作關(guān)系D生物之間是競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系5一個(gè)完整的生態(tài)系統(tǒng)無(wú)論大小，都是由A生物部分和非生物部分組成B陽(yáng)光、空氣、水組成C植物、動(dòng)物、細(xì)菌、真菌組成D生產(chǎn)者、消費(fèi)者、分解者組成6用顯微鏡進(jìn)行觀察時(shí)，材料必須是A新鮮的B薄而透明的C干燥的D完整的7在細(xì)胞分裂時(shí)已經(jīng)加倍的是A細(xì)胞核B染色體C線粒體D葉綠體8分裂的結(jié)果，新細(xì)胞與原細(xì)胞的染色體數(shù)目相同，這說(shuō)明ADNA分子的數(shù)量沒(méi)有發(fā)生改變BDNA分子的數(shù)量可能會(huì)改變C所含的遺傳物質(zhì)卻不相同D新細(xì)胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)已經(jīng)加倍9下列各項(xiàng)中是組織水平的是A消化系統(tǒng)B心臟C血液D神經(jīng)細(xì)胞10分生組織的各部分細(xì)胞演化成其它各種組織的細(xì)胞這種變化過(guò)程就是A細(xì)胞分化B細(xì)胞生長(zhǎng)C組織的生成D細(xì)胞分裂11病毒寄生在細(xì)胞中，表現(xiàn)的特點(diǎn)是A繁殖B發(fā)育C生長(zhǎng)D取食消化12艾滋病病毒、禽流感病毒都屬于A動(dòng)物病毒B植物病毒C噬菌體D朊病毒13下列植物中有根、莖、葉的分化的是A水綿B葫蘆蘚C墻蘚D腎蕨14“西湖春色歸，春水綠于染”，春水之所以會(huì)變綠是因?yàn)樗心穷愔参锎罅可L(zhǎng)A苔蘚植物B蕨類植物C藻類植物D種子植物15松樹(shù)與杏樹(shù)相比，最主要的不同之處是A松樹(shù)的果實(shí)內(nèi)有種子B松樹(shù)沒(méi)有果實(shí)，種子裸露在外面C松樹(shù)的種子外面有果皮D松樹(shù)沒(méi)有種子第3頁(yè)共5頁(yè)D需分成黑暗和明亮兩組作對(duì)照28玉米種子內(nèi)貯存的化學(xué)能來(lái)自陽(yáng)光，大量的玉米種子堆積貯存久了會(huì)散發(fā)熱量。這兩種能量轉(zhuǎn)化分別是在玉米種子的哪一結(jié)構(gòu)完成的A細(xì)胞膜細(xì)胞質(zhì)B葉綠體線粒體C細(xì)胞質(zhì)葉綠體D細(xì)胞核線粒體29細(xì)胞的生活靠的是細(xì)胞各種結(jié)構(gòu)的分工協(xié)作。請(qǐng)你判斷下列結(jié)構(gòu)名詞與相應(yīng)的功能對(duì)應(yīng)正確的是A細(xì)胞核選擇和控制物質(zhì)進(jìn)出B線粒體使光能變成化學(xué)能C細(xì)胞膜遺傳信息DNA的貯存庫(kù)D細(xì)胞壁保護(hù)和支持細(xì)胞正常形態(tài)30以下幾種結(jié)構(gòu)中，屬于保護(hù)組織的是A一小段新鮮木頭B一小塊手臂上的皮膚C一小塊洋蔥表皮D一段帶葉的枝條31把紅莧菜浸在冷水中，冷水不會(huì)變紅，放入沸水煮幾分鐘，沸水變紅。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因主要是破壞了細(xì)胞中的A細(xì)胞壁B細(xì)胞膜C細(xì)胞質(zhì)D細(xì)胞核32若用同一顯微鏡觀察同一標(biāo)本4次，通過(guò)調(diào)整目鏡、物鏡和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，結(jié)果得到如下四個(gè)圖。試問(wèn)其中視野最暗的是33下面是小剛在調(diào)查大別山生物種類時(shí)的具體做法，其中正確的是A選擇生物種類多、環(huán)境有較多變化的路線B險(xiǎn)峻的峭壁生物種類多，應(yīng)選這樣的調(diào)查路線C調(diào)查范圍內(nèi)偶爾飛過(guò)的昆蟲可以不記錄D發(fā)現(xiàn)珍稀物種應(yīng)及時(shí)采摘、捕捉制成標(biāo)本34探究光照對(duì)水稻生存的影響的實(shí)驗(yàn)，設(shè)計(jì)對(duì)照組應(yīng)該是A所有變量都相同B只存在陽(yáng)光這一變量的差異C除陽(yáng)光外其他變量都不相同D應(yīng)選擇不同土壤中的水稻35葵花朵朵向太陽(yáng)、干旱使糧食嚴(yán)重減產(chǎn)的實(shí)例說(shuō)明A葵花受陽(yáng)光限制，糧食受水的限制B葵花僅僅需要陽(yáng)光，糧食僅僅需要水C它們的生活只需要陽(yáng)光和水D陽(yáng)光、水是它們生存所需要的基本條件之一36細(xì)胞核在生物的遺傳中具有重要的作用。與遺傳相關(guān)的結(jié)構(gòu)單位按由大到小的順序排列，正確的是A細(xì)胞核→ＤＮＡ→染色體→基因B細(xì)胞核→基因→ＤＮＡ→染色體C基因→細(xì)胞核→ＤＮＡ→染色體D細(xì)胞核→染色體→ＤＮＡ→基因綠色開(kāi)花植物是人類最重要的朋友，它與我們的生存息息相關(guān)，因此人們對(duì)它的探究從來(lái)就沒(méi)有停止過(guò)。關(guān)于綠色開(kāi)花植物及探究的問(wèn)題請(qǐng)你回答37－40題37種子的結(jié)構(gòu)中，將來(lái)發(fā)育成新植物體幼體的是（）A胚芽B胚乳C胚D子葉38玉米種子和大豆種子相比，大豆種子沒(méi)有（）

簡(jiǎn)介：環(huán)境污染控制生物學(xué)環(huán)境污染控制生物學(xué)習(xí)題集習(xí)題集環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院環(huán)境污染控制生物學(xué)環(huán)境污染控制生物學(xué)課程組編課程組編20092009年1212月第二章第二章環(huán)境污染物在生態(tài)系統(tǒng)中的行為環(huán)境污染物在生態(tài)系統(tǒng)中的行為作業(yè)習(xí)題作業(yè)習(xí)題1、解釋下列基本概念環(huán)境污染、環(huán)境生物效應(yīng)、污染源、污染物、優(yōu)先控制污染物、污染物形成、污染物遷移、污染物轉(zhuǎn)化2、污染物在環(huán)境中的遷移方式和轉(zhuǎn)化途徑。3、什么是生物轉(zhuǎn)運(yùn)細(xì)胞膜有哪些特點(diǎn)污染物透過(guò)細(xì)胞膜的方式。4、什么是污染物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化過(guò)程和主要反應(yīng)。5、什么是生物濃縮、生物積累、生物放大和濃縮系數(shù)、生物濃縮的機(jī)理。6、生物對(duì)環(huán)境有哪些污染效應(yīng)其污染后果如何7、闡述微生物對(duì)金屬汞、砷的生物轉(zhuǎn)化。8、闡述呼吸系統(tǒng)吸收的特點(diǎn)和影響吸收的因素有哪些。9、影響胃腸道吸收的因素有哪些方面的因素10、皮膚吸收的特點(diǎn)和影響因素11、生物轉(zhuǎn)化的毒理學(xué)意義是什么12、重金屬與其它污染物相比，對(duì)生物體和人體的危害特點(diǎn)是什么13、影響生物濃縮的因素有哪些14、簡(jiǎn)述生物污染的危害及其防治措施。15、什么是優(yōu)先污染物主要針對(duì)哪些污染物16、超量積累植物具有什么特點(diǎn)研究超量積累植物有什么意義17、生物放大對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人群健康具有什么效應(yīng)18、簡(jiǎn)述機(jī)體對(duì)生活環(huán)境中化學(xué)物的吸收途徑有哪些19、環(huán)境化學(xué)物質(zhì)通過(guò)生物膜的方式主要有哪些并說(shuō)明其轉(zhuǎn)運(yùn)特點(diǎn)。20、什么是水體富營(yíng)養(yǎng)化并闡述富營(yíng)養(yǎng)化產(chǎn)生的原因。討論習(xí)題討論習(xí)題1、影響污染物在生態(tài)系統(tǒng)中的行為的主要因素有哪些方面舉例說(shuō)明這些因素的影響方式和影響程度思考題思考題1、污染物在生態(tài)系統(tǒng)中的行為主要括哪些主要環(huán)節(jié)各個(gè)環(huán)節(jié)之間是怎樣有機(jī)的聯(lián)系在一起的

簡(jiǎn)介：1生物化學(xué)與分子生物學(xué)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案生物化學(xué)與分子生物學(xué)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案（專業(yè)代碼071010）一、培養(yǎng)目標(biāo)一、培養(yǎng)目標(biāo)1、培養(yǎng)德智體全面發(fā)展，在本專業(yè)具有堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和系統(tǒng)的專業(yè)知識(shí)，熟悉科學(xué)研究的基本環(huán)節(jié)，具有創(chuàng)新精神、創(chuàng)新能力和從事本專業(yè)教學(xué)和科學(xué)研究等工作能力的高層次專門人才，并為進(jìn)一步深造打下基礎(chǔ)。2、具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和敬業(yè)精神；注重知識(shí)、能力和綜合素質(zhì)的培養(yǎng)。3、掌握一門外語(yǔ)，有較強(qiáng)的聽(tīng)說(shuō)讀寫能力并能熟練地閱讀本專業(yè)的外文資料。4、身心健康。二、研究方向二、研究方向1腫瘤相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)控及功能研究2腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制及治療靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)解析與藥物發(fā)現(xiàn)3神經(jīng)退行性疾病的分子病理機(jī)制及治療策略三、培養(yǎng)方式三、培養(yǎng)方式碩士研究生培養(yǎng)實(shí)行導(dǎo)師負(fù)責(zé)制，提倡實(shí)行導(dǎo)師負(fù)責(zé)和導(dǎo)師組指導(dǎo)相結(jié)合的培養(yǎng)方式。導(dǎo)師組由本專業(yè)及相關(guān)專業(yè)35名具有講師以上職稱人員組成。鼓勵(lì)“三種經(jīng)歷”，即社會(huì)實(shí)踐經(jīng)歷、第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷。研究生在第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷中取得的學(xué)分，與培養(yǎng)計(jì)劃內(nèi)必修課內(nèi)容及要求基本相同的，經(jīng)導(dǎo)師認(rèn)定后，提交基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)討論認(rèn)定，可以作為必修課成績(jī)，取得相應(yīng)學(xué)分，培養(yǎng)計(jì)劃以外的課程可作為選修課學(xué)分認(rèn)定。四、學(xué)習(xí)年限四、學(xué)習(xí)年限全日制碩士研究生學(xué)制3年。五、應(yīng)修總學(xué)與課程設(shè)置五、應(yīng)修總學(xué)與課程設(shè)置培養(yǎng)方案修訂培養(yǎng)方案修訂應(yīng)修總學(xué)分30，其中必修20學(xué)分（含培養(yǎng)環(huán)節(jié)學(xué)分）。1必修課（學(xué)位課）3國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議做研究報(bào)告1學(xué)分次2討論班，1學(xué)分討論班指一定范圍內(nèi)的研究生在指導(dǎo)者的引導(dǎo)下圍繞特定主題進(jìn)行研討，一般以研究方向或課題組為單位設(shè)立。討論班定期舉行，每期有明確的主題，要求研究生充分參與討論，展開(kāi)學(xué)術(shù)爭(zhēng)鳴。討論班是一種極具研究強(qiáng)度的學(xué)習(xí)形式，旨在通過(guò)參與者的直接交流和思想碰撞，以開(kāi)拓思維，激發(fā)創(chuàng)新，養(yǎng)成研究生獨(dú)立從事科學(xué)研究的能力；討論班同時(shí)也是一種學(xué)術(shù)指導(dǎo)形式，鼓勵(lì)導(dǎo)師或?qū)熃M依托討論班對(duì)研究生進(jìn)行有效的學(xué)術(shù)指導(dǎo)。碩士研究生自第三學(xué)期，應(yīng)至少每?jī)芍軈⒓右淮斡懻摪唷Ｃ看斡懻摪鄳?yīng)有完整記錄。（主持人組織者簽字、參加人員名單、討論主題考核成績(jī)）3社會(huì)實(shí)踐，1學(xué)分碩士生應(yīng)參加生化與分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)本科或碩士生實(shí)驗(yàn)教學(xué)工作，由系分管教學(xué)主任負(fù)責(zé)安排，學(xué)時(shí)在20－30學(xué)時(shí)之間。學(xué)系將對(duì)其教學(xué)能力、水平和質(zhì)量做出評(píng)估。4中期篩選碩士研究生實(shí)行中期篩選制度，具體按學(xué)校有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。中期篩選在第三學(xué)期完成，內(nèi)容包括思想表現(xiàn)、科研能力、論文設(shè)計(jì)與準(zhǔn)備及身體健康狀況等?？己撕细裾哌M(jìn)入碩士論文研究與寫作階段；考核不合格者，按學(xué)校有關(guān)規(guī)定處理。七、科學(xué)研究與學(xué)位論文七、科學(xué)研究與學(xué)位論文1科研時(shí)間碩士研究生從事科學(xué)研究或?qū)W位論文工作的時(shí)間不少于一年半。2、開(kāi)題報(bào)告開(kāi)題時(shí)間為第二學(xué)期。開(kāi)題前必須完成對(duì)不少于30篇相關(guān)文獻(xiàn)的綜述，由導(dǎo)師組3位及以上成員進(jìn)行審核，并給出評(píng)定、備案。開(kāi)題報(bào)告必須在本學(xué)科或相關(guān)學(xué)科范圍內(nèi)公開(kāi)進(jìn)行，由學(xué)科負(fù)責(zé)人或?qū)煟ㄖ笇?dǎo)小組負(fù)責(zé)人）組織3～5名相關(guān)學(xué)科專家對(duì)開(kāi)題報(bào)告進(jìn)行評(píng)議。開(kāi)題報(bào)告內(nèi)容包括選題的目的、依據(jù)，目前國(guó)內(nèi)外進(jìn)展的狀況，研究的基本內(nèi)容，采用的方法與手段，預(yù)期達(dá)到的水平，科研的條件，可能出現(xiàn)的問(wèn)題及解決的方法，進(jìn)度安排，與本課題有關(guān)的工作積累、已有的研究工作成績(jī)；經(jīng)費(fèi)預(yù)算等。開(kāi)題委員會(huì)專家對(duì)上述匯報(bào)給予評(píng)議，開(kāi)題報(bào)告要求有文字記錄備案。

簡(jiǎn)介：1醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)專業(yè)攻讀碩士學(xué)位研究生培養(yǎng)方案（專業(yè)代碼071009）一、培養(yǎng)目標(biāo)一、培養(yǎng)目標(biāo)1、培養(yǎng)德智體全面發(fā)展，在本專業(yè)具有堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和系統(tǒng)的專業(yè)知識(shí)，熟悉科學(xué)研究的基本環(huán)節(jié)，能夠從事本專業(yè)教學(xué)和科學(xué)研究的高層次專門人才，并為進(jìn)一步深造打下基礎(chǔ)。2、具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度和敬業(yè)精神；注重知識(shí)、能力和綜合素質(zhì)的培養(yǎng)。3、掌握一門外語(yǔ)，有較強(qiáng)的聽(tīng)說(shuō)讀寫能力并能熟練地閱讀本專業(yè)的外文資料。4、身心健康。二、研究方向二、研究方向1、脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)與分化2、脂肪細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)與Ⅱ型糖尿病、肥胖癥的發(fā)病機(jī)制研究3、細(xì)胞周期有絲分裂的調(diào)控機(jī)制4、干細(xì)胞生物學(xué)與細(xì)胞的損傷和保護(hù)5、細(xì)胞神經(jīng)生物學(xué)以細(xì)胞體外培養(yǎng)為基本手段，從細(xì)胞的整體、超微結(jié)構(gòu)和分子水平來(lái)研究細(xì)胞的發(fā)育、分化、衰老、死亡及其與疾病的關(guān)系。探索前脂肪細(xì)胞生長(zhǎng)分化的分子機(jī)制，尋找與Ⅱ型糖尿病及肥胖癥相關(guān)聯(lián)的基因；以體外培養(yǎng)的人腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞系為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，研究?xì)胞生長(zhǎng)、分裂周期及死亡調(diào)控的分子機(jī)制，探討腫瘤發(fā)生、發(fā)展機(jī)制及潛在的新型治療方法；神經(jīng)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞的分化及細(xì)胞的損傷與保護(hù)。三、學(xué)制與學(xué)習(xí)年限三、學(xué)制與學(xué)習(xí)年限全日制碩士研究生的學(xué)制為3年。四、培養(yǎng)方式四、培養(yǎng)方式碩士研究生培養(yǎng)施行導(dǎo)師負(fù)責(zé)制，提倡實(shí)行導(dǎo)師負(fù)責(zé)和導(dǎo)師組指導(dǎo)相結(jié)合，導(dǎo)師組由本專業(yè)及相關(guān)專業(yè)35名具有講師以上職稱人員組成。鼓勵(lì)“三種經(jīng)歷”，即社會(huì)實(shí)踐經(jīng)歷、第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷。研究生在第二校園經(jīng)歷和海外經(jīng)歷中取得的學(xué)分，與培養(yǎng)計(jì)劃內(nèi)必修課內(nèi)容及要求基本相同的，經(jīng)導(dǎo)師認(rèn)定后，提交醫(yī)學(xué)院學(xué)位分委員會(huì)討論認(rèn)定，可以作為必修課成績(jī)，取得相應(yīng)學(xué)分，培養(yǎng)計(jì)劃以外的課程可作為選修課學(xué)分認(rèn)定。五、課程學(xué)習(xí)要求五、課程學(xué)習(xí)要求應(yīng)修總學(xué)分不少于30學(xué)分，其中必修不少于18分，選修不少于10分。學(xué)習(xí)時(shí)間由3健康狀況等?？己撕细裾哌M(jìn)入碩士論文研究與寫作階段；考核不合格者，按學(xué)校有關(guān)規(guī)定處理。七、科學(xué)研究與學(xué)位論文七、科學(xué)研究與學(xué)位論文11科研時(shí)間科研時(shí)間碩士研究生從事科學(xué)研究或?qū)W位論文工作的時(shí)間不少于一年半。2、開(kāi)題報(bào)告、開(kāi)題報(bào)告開(kāi)題時(shí)間為第二學(xué)期。開(kāi)題前必須完成對(duì)不少于30篇相關(guān)文獻(xiàn)的綜述，由導(dǎo)師組3位及以上成員進(jìn)行審核，并給出評(píng)定、備案。開(kāi)題報(bào)告必須在本學(xué)科或相關(guān)學(xué)科范圍內(nèi)公開(kāi)進(jìn)行，由學(xué)科負(fù)責(zé)人或?qū)煟ㄖ笇?dǎo)小組負(fù)責(zé)人）組織3～5名相關(guān)學(xué)科專家對(duì)開(kāi)題報(bào)告進(jìn)行評(píng)議。開(kāi)題報(bào)告內(nèi)容包括選題的目的、依據(jù)，目前國(guó)內(nèi)外進(jìn)展的狀況，研究的基本內(nèi)容，采用的方法與手段，預(yù)期達(dá)到的水平，科研的條件，可能出現(xiàn)的問(wèn)題及解決的方法，進(jìn)度安排，與本課題有關(guān)的工作積累、已有的研究工作成績(jī)；經(jīng)費(fèi)預(yù)算等。開(kāi)題委員會(huì)專家對(duì)上述匯報(bào)給予評(píng)議，開(kāi)題報(bào)告要求有文字記錄備案。3、中期檢查、中期檢查研究生在開(kāi)題后的論文研究階段，必須向?qū)熃M（含相關(guān)專家）進(jìn)行至少2次以上論文中期報(bào)告，考核組在審核原始資料和聽(tīng)取匯報(bào)的基礎(chǔ)上給出評(píng)價(jià)，并對(duì)今后工作給予指導(dǎo)。中期檢查要求有文字記錄備案。4、預(yù)答辯、預(yù)答辯在提交學(xué)位論文答辯申請(qǐng)前1個(gè)月，由學(xué)院學(xué)位評(píng)定分委員會(huì)組織進(jìn)行公開(kāi)預(yù)答辯。預(yù)答辯委員會(huì)成員對(duì)碩士學(xué)位論文進(jìn)行嚴(yán)格、認(rèn)真的審查，詳細(xì)指出論文中存在的不足和問(wèn)題，提出改進(jìn)意見(jiàn)。預(yù)答辯所有要求（包括程序、時(shí)間）與正式答辯相同，有關(guān)預(yù)答辯工作按研究生院相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5、學(xué)術(shù)論文發(fā)表要求、學(xué)術(shù)論文發(fā)表要求碩士生在讀期間須作為第一作者（山東大學(xué)為第一作者單位）在核心A類刊物上發(fā)表學(xué)位論文研究相關(guān)論著（文章已被接受發(fā)表或清樣；文獻(xiàn)綜述和摘要等不計(jì)在內(nèi)）1篇及以上；或作為共同作者之一發(fā)表SCI論文1篇（學(xué)位申請(qǐng)者與論文第一作者為同一導(dǎo)師學(xué)生，且第一作者及申請(qǐng)學(xué)位研究生所在單位為山東大學(xué)，不含綜述），且完成獨(dú)立的學(xué)位論文（必須有獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，學(xué)位論文不得與他人重復(fù)），學(xué)位論文必須進(jìn)行匿名外審（2份），通過(guò)后可申請(qǐng)學(xué)位。提前畢業(yè)要求提前畢業(yè)要求碩士研究生以第一作者（山東大學(xué)為第一作者單位）在SCI收錄期刊上發(fā)表與學(xué)位

簡(jiǎn)介：20182018年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師醫(yī)學(xué)微生物學(xué)考試大綱年臨床執(zhí)業(yè)醫(yī)師醫(yī)學(xué)微生物學(xué)考試大綱單元單元細(xì)目細(xì)目要點(diǎn)要點(diǎn)一、微生物的基本概念定義與分類（1）微生物和醫(yī)學(xué)微生物的定義（2）三大類微生物及其特點(diǎn)1細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的三種形態(tài)及測(cè)量單位2細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)（1）細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)的構(gòu)成（2）肽聚糖的結(jié)構(gòu)（3）革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和醫(yī)學(xué)意義（4）細(xì)菌胞質(zhì)內(nèi)與醫(yī)學(xué)有關(guān)的重要結(jié)構(gòu)與意義3細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（1）莢膜及其與細(xì)菌致病性的關(guān)系（2）鞭毛的定義、分類及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系（3）菌毛的定義、醫(yī)學(xué)全在線網(wǎng)站提供分類及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系（4）芽胞及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)4細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)的檢查法革蘭氏染色的步驟、結(jié)果判定和醫(yī)學(xué)意義1細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件（1）細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的基本條件與方式（2）根據(jù)對(duì)氧需求進(jìn)行細(xì)菌分類2細(xì)菌的分解和合成代謝由細(xì)菌產(chǎn)生并與醫(yī)學(xué)有關(guān)的主要合成及分解代謝產(chǎn)物三、細(xì)菌的生理3細(xì)菌的人工培養(yǎng)（1）培養(yǎng)基的概念（2）細(xì)菌在液體和固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象（3）細(xì)菌人工培養(yǎng)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用NEXTPAGE（2）菌血癥、敗血癥、膿毒癥的概念1細(xì)菌學(xué)診斷（1）標(biāo)本的采集原則（2）檢驗(yàn)程序八、細(xì)菌感染的檢查方法與防治原則2血清學(xué)診斷3細(xì)菌感染的防治原則常用的血清學(xué)診斷方法（1）細(xì)菌類疫苗（2）人工被動(dòng)免疫制劑1葡萄球菌屬（1）生物學(xué)性狀和分類（2）致病物質(zhì)的種類和所致疾?。?）致病性葡萄球菌的鑒別要點(diǎn)2鏈球菌屬（1）生物學(xué)性狀和分類（2）致病物質(zhì)的種類和所致疾?。?）鏈球菌溶血素和臨床檢測(cè)的關(guān)系3肺炎鏈球菌（1）形態(tài)和染色（2）主要致病物質(zhì)與所致疾病4腦膜炎奈瑟氏球菌（1）生物學(xué)性狀（2）主要致病物質(zhì)和所致疾病（3）標(biāo)本采集和分離鑒定九、病原性球菌S淋病奈瑟氏球菌（1）形態(tài)、染色、致病物質(zhì)及所致疾?。?）防治原則NEXTPAGE單元單元細(xì)目細(xì)目要點(diǎn)要點(diǎn)1腸道桿菌的共同特征（1）形態(tài)、染色和結(jié)構(gòu)（2）生化反應(yīng)的特點(diǎn)十、腸道桿菌2埃希氏菌屬（1）致病性大腸埃希氏菌的種類（2）腸出血型大腸埃希氏菌的血清型及所致疾病

簡(jiǎn)介：2019年口腔執(zhí)業(yè)醫(yī)師醫(yī)學(xué)微生物學(xué)考試大綱單元細(xì)目要點(diǎn)一、微生物的基本概念定義與分類（1）微生物和醫(yī)學(xué)微生物的定義（2）三大類微生物及其特點(diǎn)二、細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)1細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌的三種形態(tài)及測(cè)量單位2細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)（1）細(xì)菌基本結(jié)構(gòu)的構(gòu)成（2）肽聚糖的結(jié)構(gòu)（3）革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)和醫(yī)學(xué)意義（4）細(xì)菌胞質(zhì)內(nèi)與醫(yī)學(xué)有關(guān)的重要結(jié)構(gòu)與意義3細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)（1）莢膜及其與細(xì)菌致病性的關(guān)系（2）鞭毛的定義、分類及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系（3）菌毛的定義、分類及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系（4）芽胞及其與醫(yī)學(xué)的關(guān)系4細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)的檢查法革蘭氏染色的步驟、結(jié)果判定和醫(yī)學(xué)意義三、細(xì)菌的生理1細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的條件（1）細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的基本條件與方式（2）根據(jù)對(duì)氧的需求進(jìn)行細(xì)菌分類2細(xì)菌的分解和合成代謝由細(xì)菌產(chǎn)生并與醫(yī)學(xué)有關(guān)的主要合成及分解代謝產(chǎn)物四、消毒與滅菌1基本概念消毒、滅菌、無(wú)菌的概念2物理滅菌法（1）熱力滅菌法的種類及其應(yīng)用（2）射線滅菌法的原理和應(yīng)用（3）濾過(guò)除菌法的應(yīng)用3化學(xué)消毒滅菌法常用化學(xué)消毒劑的種類、濃度和應(yīng)用五、噬菌體1噬菌體的生物學(xué)性狀噬菌體的概念、形態(tài)、化學(xué)組成及主要應(yīng)用2毒性噬菌體和溫和噬菌體（1）毒性噬菌體的概念（2）溫和噬菌體的概念及其與細(xì)菌遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的關(guān)系六、細(xì)菌的遺傳與變異1細(xì)菌遺傳與變異的物質(zhì)基礎(chǔ)細(xì)菌遺傳物質(zhì)的種類2細(xì)菌遺傳與變異的機(jī)制（1）轉(zhuǎn)化、接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、溶原性轉(zhuǎn)換的概念（2）耐藥質(zhì)粒及其與耐藥性的關(guān)系十、腸道桿菌1腸道桿菌的共同特征（1）形態(tài)、染色和結(jié)構(gòu)（2）生化反應(yīng)的特點(diǎn)2埃希氏菌屬（1）大腸埃希氏菌的致病特點(diǎn)（2）致病性大腸埃希氏菌的種類及所致疾病3志賀氏菌屬（1）種類、致病性4沙門氏菌屬（1）主要致病菌種類、致病物質(zhì)、所致疾病（2）腸熱癥的標(biāo)本采集及分離鑒定（3）肥達(dá)試驗(yàn)和結(jié)果判斷十一、厭氧性桿菌1厭氧芽胞梭菌（1）破傷風(fēng)梭菌的生物學(xué)性狀、致病性和防治原則（2）產(chǎn)氣莢膜梭菌的生物學(xué)性狀、致病性、微生物學(xué)檢查和防治原則（3）肉毒梭菌形態(tài)、致病物質(zhì)及防治原則2無(wú)芽胞厭氧菌致病條件、感染特征及所致疾病種類十二、分枝桿菌屬1結(jié)核分枝桿菌（1）形態(tài)、染色、培養(yǎng)特性和抵抗力（2）致病性及感染的免疫特點(diǎn)（3）結(jié)核菌素試驗(yàn)的原理、結(jié)果判斷和應(yīng)用（4）微生物學(xué)檢查和防治原則2非結(jié)核分枝桿菌（1）概念（2）鳥(niǎo)胞內(nèi)分枝桿菌的機(jī)會(huì)致病性十三、動(dòng)物源性細(xì)菌1布魯氏菌屬形態(tài)染色特點(diǎn)、種類和所致疾病2鼠疫耶爾森氏菌屬形態(tài)染色特點(diǎn)、所致疾病和防治原則3炭疽芽胞桿菌形態(tài)染色特點(diǎn)、抵抗力、所致疾病和防治原則十四、其他細(xì)菌1流感嗜血桿菌形態(tài)染色特點(diǎn)、培養(yǎng)特性、所致疾病及預(yù)防2百日咳鮑特氏菌所致疾病和防治原則3幽門螺桿菌形態(tài)染色、培養(yǎng)和生化反應(yīng)特點(diǎn)、所致疾病和防治原則4嗜肺軍團(tuán)菌傳播途徑及其所致疾病5銅綠假單胞菌形態(tài)染色、色素及所致疾病