簡介：學(xué)校代號10532學(xué)號S132220001密級湖南大學(xué)碩士學(xué)位論文長非編碼RNA基因Z38對人乳腺癌細胞BT549生物學(xué)特性的影響湖南大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨立進行研究所取得的研究成果。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律后果由本人承擔。作者簽名噸司翻、吼沙形年廠月／日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)湖南大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于‘1、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。2、不保密囹。請在以上相應(yīng)方框內(nèi)打“、／”黧一枚C點她蹦星靳簽名茲脅根C虹期≥勺，占年名月／日

簡介：分類號R7342密級公開UDC616編號10299Z1314006JIANGSUUNIVERSITY專業(yè)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文學(xué)位碩士學(xué)位論文THESISFPROFESSIONALMASTERDEGREE碩士碩士類別類別臨床臨床醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士論文題目論文題目尼古丁尼古丁對人臍帶間質(zhì)干細胞及肺癌對人臍帶間質(zhì)干細胞及肺癌細胞株細胞株A549生物學(xué)生物學(xué)特性影響的研究特性影響的研究學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)臨床臨床檢驗診斷學(xué)檢驗診斷學(xué)作者作者姓名姓名李濤指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師孫曉春曉春答辯日期答辯日期2016年6月12日分類號R7342密級公開UDC616編號10299Z1314006碩士學(xué)位論文尼古丁對人臍帶間質(zhì)干細胞及肺癌細胞株尼古丁對人臍帶間質(zhì)干細胞及肺癌細胞株A549A549生物學(xué)生物學(xué)特性影響的研究特性影響的研究EFFECTSOFNICOTINEONTHEBIOLOGICALACTERISTICSOFHUMANUMBILICALCDMESENCHYMALSTEMCELLLUNGCANCERCELLLINEA549作者姓名李濤指導(dǎo)教師孫曉春副教授小組成員胡嘉波教授；朱偉教授申請學(xué)位碩士學(xué)科專業(yè)臨床檢驗診斷學(xué)論文提交日期2016年4月13日論文答辯日期2016年6月12日學(xué)位授予單位江蘇大學(xué)學(xué)位授予日期2016年6月20日答辯委員會主席周紅教授評閱人

簡介：點擊查看更多軟骨細胞與軟骨單位在海藻酸鈉中立體共培養(yǎng)生物學(xué)-力學(xué)特性分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：貴朗中亟學(xué)院頑塵學(xué)伍篼艾學(xué)號20131”研究生姓名陳金火指導(dǎo)教師梁培育教授專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合臨床外答辯時間二O一六年五月量田史醫(yī)堂瞳塑±堂僮途塞貴陽中醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文相關(guān)聲明原創(chuàng)性聲明本文聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表論文中撰寫過的研究成果，也不包含為獲得貴陽中醫(yī)學(xué)院或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均己在論文中作了明確說明。作者愀日期Ⅵ7陡南月以百關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)說明本文了解貴陽中醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其他手段保存學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或貴州省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文。

簡介：授予單位代碼授予單位代碼10089學(xué)號或申請?zhí)枌W(xué)號或申請?zhí)?0132419中國中國圖書分類號圖書分類號R7351碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文科學(xué)學(xué)位科學(xué)學(xué)位TIMTIM3在人食管癌在人食管癌組織組織中的表達及其對食管癌細胞生物中的表達及其對食管癌細胞生物學(xué)特性的影響和學(xué)特性的影響和作用作用機制的研究機制的研究20162016年3月研究生滿宏偉滿宏偉導(dǎo)師師單保恩單保恩教授教授王玲副教授副教授專業(yè)業(yè)免疫免疫學(xué)二級學(xué)院二級學(xué)院河北醫(yī)科大學(xué)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院第四醫(yī)院HEBEIMEDICALUNIVERSITY目錄中文摘要1英文摘要5英文縮寫10研究論文TIM3在人食管癌組織中的表達及其對食管癌細胞生物學(xué)特性的影響和作用機制的研究引言11第一部分TIM3在人食管癌組織中的表達及臨床意義前言13材料與方法15結(jié)果22附圖24附表28討論30小結(jié)32參考文獻33第二部分TIM3對食管癌細胞生物學(xué)特性的影響及其促進食管癌轉(zhuǎn)移機制的研究前言36材料與方法38結(jié)果52附圖57附表70討論73小結(jié)76參考文獻77結(jié)論80綜述T細胞免疫球蛋白黏蛋白3在腫瘤免疫中的研究進展81致謝92個人簡歷93

簡介：目的丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS是引起肝臟疾病的重要病原體，感染者大部分發(fā)展為慢性感染，最后可導(dǎo)致肝纖維化，肝硬化和肝癌，而且目前還沒有有效的疫苗來預(yù)防HCV的感染。聚乙二醇化干擾素?。≒EGYLATEDINTERFERONΑ，PEGIFN?。┖屠晚f林RIBAVIRIN，RBV是治療丙肝的最佳藥物，但仍有約為30％50％的HCV感染者對該聯(lián)合抗病毒治療無效。HCVCE蛋白是病毒感染肝細胞后第一個表達的蛋白，在感染的靶細胞和患者的血清中均可檢測到其存在。HCVCE蛋白不僅參與病毒顆粒的組裝，還可與靶細胞不同蛋白相互作用調(diào)節(jié)靶細胞的功能，包括細胞的增殖，生長，凋亡等。固有免疫應(yīng)答是機體抵抗病原微生物入侵的第一道防線，肝臟組織中的庫否氏細胞是重要的固有免疫應(yīng)答細胞，屬于定居的巨噬細胞，參與機體的免疫防御。目前認為，巨噬細胞是一類異質(zhì)性很強的細胞群體，在組織微環(huán)境中可被刺激分化為具有不同功能的細胞亞群。包括經(jīng)典活化的M1巨噬細胞、旁路活化的M2巨噬細胞、腫瘤相關(guān)的巨噬細胞等。本室前期結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，HCVCE蛋白可刺激巨噬細胞THP1分泌促炎和抑炎因子，因此，本研究擬通過收集HCVCE蛋白作用的THP1上清，從不同的角度觀察培養(yǎng)上清對正常肝細胞株L02、肝癌細胞株HEPG2、SMCC7721的增殖、遷移、侵襲以及對干擾素作用的影響，并初步探討其機制，為進一步研究HCVCE蛋白對巨噬細胞活性的影響提供實驗依據(jù)。方法1、構(gòu)建與表達重組HCVCE蛋白從JFH1株HCV2A全長基因質(zhì)粒上通過PCR的方法擴增HCVCE基因，連接至PMD18T載體上，測序正確后，經(jīng)BAMHⅠ，HINDⅢ雙酶切，與PET28A相連，構(gòu)建重組原核表達質(zhì)粒PET28AHCVCE，雙酶切鑒定。經(jīng)IPTG37℃誘導(dǎo)獲得表達CE蛋白的包涵體，經(jīng)純化，復(fù)性和濃縮后，行SDSPAGE和WESTERNBLOT鑒定。2、獲得HCVCE蛋白作用的巨噬細胞MTHP1培養(yǎng)上清PMA10NGML誘導(dǎo)人單核細胞株THP1分化為巨噬細胞MTHP1，HCVCE蛋白以20ΜGML刺激MTHP124H后收集上清，離心。80℃保存?zhèn)溆?。同時設(shè)PBS陰性對照組與加HCVCE蛋白無細胞的空白對照組。3、觀察細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學(xué)行為的影響將收集的細胞培養(yǎng)上清用完全培養(yǎng)基20％或50％稀釋后分別培養(yǎng)人正常肝細胞L02、肝癌細胞HEPG2或SMMC7721細胞1）通過細胞增殖實驗CCK8法，劃痕實驗，TRANSWELL細胞遷移實驗及克隆增殖實驗觀察稀釋后的培養(yǎng)上清對上述肝細胞細胞增殖，遷移能力的影響2）通過實時定量PCR檢測三種肝細胞株MMP2和MMP9基因的表達變化3）WESTERNBLOT檢測三種肝細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子NFΚBP65及MAPKS通路相關(guān)蛋白ERK，JNK，P38的表達。4、觀察細胞培養(yǎng)上清和IFNΑ對肝細胞增殖的影響在96孔細胞培養(yǎng)板中分別培養(yǎng)L02、HEPG2和SMCC7721三種肝細胞，待細胞貼壁后更換培養(yǎng)基（含IFNΑ1000U孔），1H后加入不同組分的細胞培養(yǎng)上清，使各孔終體積均為200UL，分別在刺激肝細胞24H、48H時檢測其增殖變化。以了解在CE蛋白作用的THP1產(chǎn)物對干擾素抗病毒作用的影響。設(shè)組情況如下CE蛋白作用的THP1的細胞培養(yǎng)上清IFNΑ刺激組為實驗組，同時設(shè)IFNΑ單獨刺激組、CE蛋白作用的THP1細胞培養(yǎng)上清刺激組、THP1的細胞培養(yǎng)上清IFNΑ刺激組為對照組。結(jié)果1、構(gòu)建原核表達質(zhì)粒PET28AHCVCE（含有2個HIS標簽），經(jīng)BAMHⅠHINDⅢ雙酶切后瓊脂糖凝膠電泳有約575BP大小片段存在，測序結(jié)果顯示與GENBANK記載序列一致。2、獲得原核表達重組蛋白HCVCE，純化后經(jīng)SDSPAGE電泳和WESTERNBLOT結(jié)果顯示獲得分子量約為21KD的單一條帶，并測得其濃度為05ΜGΜL。3、HCVCE蛋白作用的MTHP1細胞培養(yǎng)上清明顯促進肝細胞的增殖、遷移和侵襲1）與對照組相比，50％稀釋的細胞培養(yǎng)上清時可促進L02、HEPG2以及SMMC7721細胞的增殖P＜0052在劃痕實驗和遷移試驗中，與對照組相比，20％稀釋的細胞培養(yǎng)上清能夠明顯促進SMMC7721細胞的遷移P＜001，50％稀釋的細胞培養(yǎng)上清可明顯促進L02細胞的遷移P＜001，兩種濃度的細胞培養(yǎng)上清對HEPG2細胞的遷移無影響。在平板克隆形成試驗中，對三種細胞均無明顯影響。4、HCVCE蛋白作用的MTHP1細胞培養(yǎng)上清可干擾IFNΑ抑制肝細胞增殖的作用與對照組相比，IFN?。?000U孔）可明顯抑制肝細胞的增殖，而CE蛋白作用的MTHP1的細胞培養(yǎng)上清能夠干擾IFNΑ的這種抑制作用，促進細胞的增殖。5、實時定量PCR結(jié)果顯示與純粹的MTHP1的細胞培養(yǎng)上清和HCVCE空培養(yǎng)基對照組相比，20％稀釋的核心蛋白刺激下的MTHP1上清作用可顯著促進SMMC7721細胞MMP9的表達P＜005L02和HEPG2細胞MMP9和MMP2的表達水平與對照組相比并無顯著變化。6、CE蛋白作用MTHP1細胞培養(yǎng)上清作用SMMC7721細胞，檢測相關(guān)蛋白表達的變化，WESTERNBLOT結(jié)果顯示，與PBS作用MTHP1的細胞培養(yǎng)上清和HCVCE空培養(yǎng)基對照組相比，CE蛋白作用MTHP1細胞培養(yǎng)上清后可使PERK的表達明顯降低，P38的表達并無明顯變化，磷酸化的NFΚB65表達升高。結(jié)論1、成功構(gòu)建、表達了HCVCE蛋白。2、HCVCE蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清可促進L02、HEPG2、SMMC7721的增殖促進L02、SMMC7721的遷移可能與NFΚB存在一定關(guān)聯(lián)。3、HCVCE蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清可降低L02、HEPG2、SMMC7721對IFNΑ的敏感性。

簡介：分類號R73密級題單位代碼10312學(xué)號20131607霸索匿斜泰J擎碩士學(xué)位論文指導(dǎo)教師但毽數(shù)拯完成時間三Q二盍生重月南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影晌胃癌細胞的生物學(xué)功能和患者預(yù)后1中文摘要1前言5第一部分尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶在胃癌組織中的表達及預(yù)后影響7材料71、TCGA數(shù)據(jù)庫一72、組織標本一83、實驗試劑一84、實驗儀器一95、引物9方法1O1、總RNA的提取TRIZOL法102、逆轉(zhuǎn)錄C￡NA1O3、實時熒光定量PCR114、組織芯片的制備115、免疫組化分析125、統(tǒng)計學(xué)分析13結(jié)果15一、TCGA數(shù)據(jù)庫分析15二、卜小M4T在胃癌及癌旁組織中的表達情況15三、NNMT的表達與胃癌臨床病理特征的關(guān)系15四、NNMT的表達與胃癌預(yù)后的關(guān)系16第二部分尼克酰胺甲基轉(zhuǎn)移酶影響胃癌細胞生物學(xué)功能26材料26一、實驗材料一261、細胞株與培養(yǎng)基262、實時熒光定量PCR試劑263、WESTEMB10T相關(guān)試劑274、SIRNA及細胞轉(zhuǎn)染相關(guān)試劑一275、與細胞功能學(xué)有關(guān)的實驗試劑一276、相關(guān)培養(yǎng)基及溶液的配置28二、實驗儀器及耗材29方法311、細胞培養(yǎng)312、實時熒光定量PCR檢測MRNA表達313、WESTERNBLOT蛋白測定334、NANSWELL小室實驗檢測細胞侵襲和遷移355、碘化丙錠PI單染法檢測細胞周期366、CCK8實驗檢測細胞增殖能力367、細胞轉(zhuǎn)染368、生物信息學(xué)分析379、裸鼠成瘤實驗3710、統(tǒng)計學(xué)分析一38

簡介：肌腱損傷和肌肉損傷是體育運動中常見的運動性疾病，影響運動員機能水平和運動能力的發(fā)揮，成為臨床醫(yī)學(xué)和運動醫(yī)學(xué)的主要研究問題。干細胞在個體生長發(fā)育和病理組織再生修復(fù)中具有重要作用。干細胞發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)特性的研究為肌腱和肌肉生理、病理機制的研究提供了基礎(chǔ)，同時為干細胞促進損傷的修復(fù)提供實驗基礎(chǔ)。本研究主要建立了肌腱干細胞和肌肉衛(wèi)星細胞體外擴增培養(yǎng)體系，研究其生物學(xué)特性，建立肌腱損傷和肌肉損傷小鼠動物模型，研究干細胞在運動性損傷修復(fù)中的作用，得到以下結(jié)果1采用I型膠原酶消化分離胎牛和仔豬跟腱來源肌腱干細胞，分離后的細胞在體外培養(yǎng)條件下分別傳代至43代和11代；分別通過RTPCR和免疫組織化學(xué)檢測法對兩個物種來源的肌腱干細胞進行特異性標記物鑒定；免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示，細胞對COLLAGENⅠ、COLLAGENⅢ、CD105、CD44、TENINCTNMD、NUCLEOSTEMIN等均表達陽性；RTPCR結(jié)果顯示，不同傳代次數(shù)的細胞均表達COLLAGENⅠ和COLLAGENⅢ，不表達COLLAGENⅡ，表明所分離的細胞為肌腱干細胞；對分離的細胞進行生物學(xué)特性鑒定；在體外通過不同誘導(dǎo)液，將肌腱干細胞分別誘導(dǎo)成成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，RTPCR檢測到軟骨細胞特異性基因均陽性表達；2采用I型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法消化仔豬脛骨前肌肌肉組織，分離的細胞接種后通過差速培養(yǎng)法純化并培養(yǎng)至12代，通過RTPCR和免疫組織化學(xué)檢測鑒定細胞均表達MYOD，MOYGENIN，PAX7，CMET，PCNA和NANOG，對分離純化后的細胞進行生物學(xué)特性和多分化潛能研究。3采用心臟毒素（CTX）構(gòu)建小鼠肌肉損傷模型，石蠟病理切片顯示肌肉正常組織被破壞，血清學(xué)檢測肌肉中肌酸激酶（CK）含量明顯超出正常范圍，對肌肉衛(wèi)星細胞進行細胞示蹤劑（CMDIL）標記后移植到損傷部位，組織學(xué)和血清學(xué)結(jié)果顯示肌肉損傷有所恢復(fù)；通過I型膠原酶誘導(dǎo)的小鼠肌腱損傷制備小鼠肌腱損傷模型，石蠟切片顯示肌腱膠原排列紊亂，肌腱基質(zhì)嚴重破壞，對肌腱干細胞用CMDIL標記，將標記后的細胞注射到小鼠肌腱損傷位點，觀察組織學(xué)和血清學(xué)相關(guān)指標，結(jié)果顯示細胞移植治療組損傷肌腱有良好修復(fù)；綜上所述，本文介紹了肌腱損傷、肌肉損傷和干細胞研究進展，在體外成功分離、培養(yǎng)了胎牛、仔豬跟腱來源TDSCS和仔豬肌肉衛(wèi)星細胞，并對其生物學(xué)特性和多分化潛能進行了研究；通過干細胞體外移植治療，損傷的小鼠肌腱和肌肉組織得到恢復(fù)初步為以干細胞為基礎(chǔ)的細胞療法治療損傷、促進組織再生修復(fù)提供實驗依據(jù)。

簡介：點擊查看更多IGF1剪接變異體IGF1Ec對成肌細胞生物學(xué)功能的影響及相關(guān)機理研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：分類號密級UDC編號JIANGSUUNIVERSITY學(xué)術(shù)型學(xué)術(shù)型碩士學(xué)位論碩士學(xué)位論文THESISFORACADEMICMASTERDEGREE碩士類別學(xué)術(shù)型論文題目慢病毒介導(dǎo)的ZIC1基因過表達對乳腺癌MDAMB231細胞生物學(xué)行為的影響學(xué)科專業(yè)外科學(xué)作者姓名汪華兵指導(dǎo)教師丁厚中答辯日期20160611

簡介：上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文NOTCHNOTCH信號報告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細胞系信號報告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細胞系中的建立的建立及TRIM59TRIM59在乳腺癌中生物在乳腺癌中生物學(xué)功能功能的研究的研究碩士研究生秦麗霞學(xué)號1137219286導(dǎo)師高維強指導(dǎo)老師申海蓮申請學(xué)位碩士學(xué)科腫瘤學(xué)所在單位仁濟醫(yī)院答辯日期2016年4月授予學(xué)位單位上海交通大學(xué)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄第一部分NOTCHNOTCH信號報告系統(tǒng)在前列腺腫瘤細胞系中的建立Ⅰ摘要ⅠABSTRACTABSTRACTⅡ第一章緒論111NOTCH的研究進展1111NOTCH的發(fā)現(xiàn)及分子結(jié)構(gòu)1112NOTCH信號通路的簡介1113NOTCH在腫瘤中的研究進展2114NOTCH在前列腺癌中的研究進展312本論文的研究目的和意義4第二章實驗材料和方法621實驗材料6211儀器材料6212試劑材料7213生物材料8214溶液配制822實驗方法8221細胞培養(yǎng)8222DNA片段膠回收9223酶切目的片段與載體10224連接構(gòu)建重組質(zhì)粒10225轉(zhuǎn)化11226質(zhì)粒抽提11227質(zhì)粒轉(zhuǎn)染13228病毒包裝13229病毒感染152210RNA提取152211RNA反轉(zhuǎn)錄162212實時熒光定量PCR162213流式細胞儀分選細胞182214統(tǒng)計分析和作圖軟件18第三章結(jié)果1931構(gòu)建NOTCH報告重組慢病毒質(zhì)粒載體1932在HEK293T細胞中檢測PLVX8XCSLACGFP系統(tǒng)具有NOTCH信號特異性1933LNCAP8XCSLACGFP穩(wěn)定細胞株的建立及檢測22

簡介：I碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文腎上腺素腎上腺素Β受體對非小細胞肺癌細胞生物學(xué)行為的調(diào)受體對非小細胞肺癌細胞生物學(xué)行為的調(diào)控作用控作用學(xué)科專業(yè)學(xué)科專業(yè)藥理學(xué)藥理學(xué)作者姓名作者姓名楊薪潔楊薪潔指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師陳紅陳紅專教授教授答辯日期答辯日期2015年4月24日

簡介：塵螨是引起變應(yīng)性疾病的主要變應(yīng)原，用塵螨變應(yīng)原提取物進行臨床檢測和特異性免疫治療應(yīng)用廣泛。然而塵螨提取物受原材料和提取技術(shù)等因素的影響，在蛋白成分、含量及純度等方面差異性大，直接影響了臨床診斷的準確性以及特異性免疫治療的療效和安全性。本研究中，我們拋開對變應(yīng)原本身的研究，用塵螨變應(yīng)原陽性患者血清中針對塵螨的特異性IGE抗體為釣餌，進行由果到因的反推。通過噬菌體展示隨機肽技術(shù)進行陰陽雙重篩選，得出與塵螨特異性IGE結(jié)合的模擬肽。首先用塵螨變應(yīng)原IGE陰性的過敏患者血清中IGE進行陰性篩選排除IGE保守的重鏈結(jié)合肽，再用塵螨陽性患者血清中IGE為釣餌，得到和IGE抗體高變區(qū)結(jié)合的塵螨B細胞線性以及構(gòu)象表位模擬肽庫。為了驗證篩選的塵螨B細胞表位模擬肽的體內(nèi)生物學(xué)功能，我們利用戶塵螨誘發(fā)的變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘小鼠模型，觀察所篩選的塵螨B細胞表位模擬肽1，2與3對小鼠模型氣道炎癥的治療作用，為進一步研制和開發(fā)塵螨特異性免疫治療的B細胞表位疫苗提供實驗依據(jù)。一、與塵螨IGE結(jié)合的噬菌體的篩選1、噬菌體的親和篩選以塵螨IGE陰性的過敏患者血清IGE為誘餌進行陰性篩選，獲得不能結(jié)合的噬菌體，然后再以塵螨陽性患者血清IGE抗體為誘餌進行陽性篩選，選出能夠結(jié)合的噬菌體。在篩選過程中，通過降低釣餌的濃度、減少釣餌與肽庫作用時間、增加洗脫強度，去除不能與塵螨IGE結(jié)合和與塵螨IGE結(jié)合較弱的噬菌體，經(jīng)三輪篩選后得到富集程度較高的分別與塵螨IGE特異性結(jié)合的噬菌體克隆。2、挑選與IGE特異性結(jié)合的噬菌體克隆從經(jīng)過陰性和陽性篩選后的洗脫物中隨機挑選出100個噬菌體單克隆，通過ELISA技術(shù)進一步鑒定其與塵螨IGE結(jié)合的特異性，結(jié)果得到84個能與塵螨IGE特異性結(jié)合的噬菌體。3、DNA測序與多肽合成將84個噬菌體克隆進行DNA測序后，除去相同序列以及克隆無效的序列，最后獲得44個噬菌體克隆。將這44個噬菌體單克隆的DNA序列與塵螨主要變應(yīng)原分子DERP1，DERP2，DERP5與DERP7的三維結(jié)構(gòu)通過軟件比對，將3個特異性強且氨基酸序列與塵螨主要變應(yīng)原比對性高的噬菌體單克隆合成模擬肽。二、戶塵螨模擬環(huán)肽對實驗性變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘模型的作用以戶塵螨誘導(dǎo)的變應(yīng)性鼻炎伴哮喘的小鼠為模型，觀察3個合成模擬肽在體內(nèi)對變應(yīng)性鼻炎伴支氣管哮喘的干預(yù)作用，設(shè)正常對照組，變應(yīng)性鼻炎伴哮喘模型組以及模擬肽干預(yù)組123。100ΜL戶塵螨提取液滴鼻致敏后，正常對照組以生理鹽水滴鼻激發(fā)，模型組與模擬肽干預(yù)組以100ΜL戶塵螨提取液激發(fā)。模擬肽干預(yù)組采用合成肽（500ΜG合成肽200ΜLPBS）溶液皮下注射連續(xù)給藥干預(yù)（1次天）4天。再次激發(fā)后處死小鼠，進行一系列觀察與檢測，結(jié)果如下1、模擬肽干預(yù)組小鼠的抓鼻、流清涕、打噴嚏的癥狀明顯改善，無口唇發(fā)紺、喘氣以及呼吸頻率加快等癥狀。2、模擬肽干預(yù)組氣道阻力較模型組明顯降低。3、模擬肽干預(yù)組鼻黏膜上皮細胞完整，無柱狀和杯狀細胞增生，黏膜下層無腺體增生、無中性粒細胞、淋巴細胞浸潤，僅有少量嗜酸性粒細胞；模擬肽干預(yù)組肺組織血管與支氣管炎癥浸潤明顯減少、氣道上皮結(jié)構(gòu)好轉(zhuǎn)。4、模擬肽干預(yù)組1、2、3鼻黏膜上皮IL25MRNA、IL33MRNA水平明顯低于模型組；模擬肽干預(yù)組肺組織中IL25MRNA、IL33MRNA水平明顯低于模型組。5、模擬肽干預(yù)組鼻腔與支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞均顯著低于模型組。6、鼻腔灌洗液模擬肽干預(yù)組IL4水平明顯低于模型組，干預(yù)組2、3IL10水平明顯高于模型組，干預(yù)組3中IL25水平明顯低于模型組，干預(yù)組IFNΓ水平明顯高于模型組；肺泡灌洗液模擬肽干預(yù)組IL4水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、3IL10水平明顯高于模型組，干預(yù)組IL25水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、2中IL33水平明顯低于模型組，干預(yù)組1、3中IFNΓ水平明顯高于模型組。7、模擬肽干預(yù)組血清戶塵螨特異性IGE抗體水平明顯低于模型組，而IGG1抗體水平則明顯高于模型組。綜上所述，應(yīng)用噬菌體展示技術(shù)成功篩選到塵螨B細胞表位模擬肽，且篩選到的模擬肽能顯著減輕塵螨誘導(dǎo)小鼠變應(yīng)性氣道炎癥的病理損傷，改善癥狀，有效抑制鼻腔與肺組織中炎性細胞的浸潤，減少促炎細胞因子的分泌，降低塵螨特異性IGE水平，提高保護性抗體IGG1水平。本研究為進一步研制和開發(fā)塵螨特異性免疫治療的表位疫苗提供實驗依據(jù)。

簡介：目的觀察不同程度酸性條件對成人髓核間充質(zhì)干細胞（NPMSCS）生物學(xué)活性的作用，發(fā)掘椎間盤的可能退變機制。方法篩選6例脊柱側(cè)凸需矯形手術(shù)患者，留取手術(shù)過程中摘除的6個PFIRRMANNⅠ級或Ⅱ級腰椎椎間盤，用膠原酶消化髓核組織，分離細胞，體外培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)。選擇培養(yǎng)的P2代細胞，運用流式細胞儀檢測間充質(zhì)干細胞等表面抗原標志物；使用分化誘導(dǎo)培養(yǎng)液誘導(dǎo)成骨、成軟骨、成脂細胞，2周后分別染色液對誘導(dǎo)的細胞染色，觀察細胞三系分化能力。參照國際干細胞治療協(xié)會（ISCT）給出的間充質(zhì)干細胞（MSCS）的判定準則，綜合鑒定分離的細胞。使用不同PH值的培養(yǎng)基培養(yǎng)P2代細胞后，用CCK8法檢測不同培養(yǎng)時間的細胞增殖能力，用流式細胞儀檢測不同PH培養(yǎng)基作用的細胞凋亡率，使用實時熒光定量（RTPCR）檢測P2代細胞“干性”基因及酸離子通道家族蛋白基因表達情況。結(jié)果分離的P0代細胞均貼培養(yǎng)瓶底壁生長。分離培養(yǎng)P2代細胞表面抗原檢測示高表達CD90、CD105、CD73，三者表達比例分別達96％、95％、94以上，卻低表達CD45、CD34、HLADR（均低于4）。通過使用特殊染色劑染色結(jié)果表明實驗中分離得到的細胞均可向骨、脂肪及軟骨細胞方向分化。參照ISCT制定MSCS的判定準則，認為這種細胞是NPMSCS。CCK8檢測結(jié)果示分離得到的細胞在不同PH培養(yǎng)液培養(yǎng)后1、3天不同組細胞吸光度差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞005）；5天后各組細胞吸光度差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P結(jié)論不同層次的PH酸環(huán)境條件下培養(yǎng)成人NPMSCS3天增殖能力未見顯著變化，作用5天后可以看出低PH環(huán)境明顯抑制NPMSCS的增殖能力以及基因表達，加快細胞凋亡，而且這種作用隨著PH降低越明顯。

簡介：分類號分類號密級密級研究生學(xué)位論文CARD9在乳腺癌在乳腺癌組織組織中的表達及其對乳腺癌中的表達及其對乳腺癌細胞生物學(xué)行為的影響細胞生物學(xué)行為的影響論文題目（中文）論文題目（中文）論文題目（外文）論文題目（外文）THEEXPRESSIONOFCARD9INBREASTCANCERTISSUESITSFUNCTIONSONTHEBIOLOGICALBEHAVIOFBREASTCANCERCELLS研究生姓名研究生姓名孫振學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)生物學(xué)生物學(xué)細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)研究方向研究方向腫瘤細胞生物學(xué)腫瘤細胞生物學(xué)學(xué)位級別學(xué)位級別碩士導(dǎo)師姓名、職稱導(dǎo)師姓名、職稱陳學(xué)忠陳學(xué)忠主任醫(yī)師主任醫(yī)師，蘇海翔，蘇海翔研究員研究員論文工作論文工作起止年月起止年月2014年9月至月至2017年3月論文提交日期論文提交日期2017年3月論文答辯日期論文答辯日期2017年5月校址甘肅省蘭州市校址甘肅省蘭州市ICARD9在乳腺癌在乳腺癌組織組織中的表達及其對乳腺癌細胞中的表達及其對乳腺癌細胞生物學(xué)行為的影響生物學(xué)行為的影響摘要乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤，發(fā)病率呈上升趨勢，且趨向于年輕化。雖然，近年來，乳腺癌的早期診斷、手術(shù)方式、放射治療以及靶向治療方面已取得很大進展，但預(yù)后仍然較差，靶向藥物效率低且價格昂貴。研究乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的分子機制，探索新的分子靶標仍然是乳腺癌研究和臨床中需要解決的難題之一。胱天蛋白酶募集域蛋白9（CASPASERECRUITMENTDOMAINCONTAININGPROTEIN9，CARD9）是一個重要的銜接蛋白，通過蛋白間的相互作用調(diào)節(jié)NFΚB等信號通路，在胃B細胞淋巴瘤、腎癌、丙型肝炎病毒相關(guān)的肝細胞癌及結(jié)腸癌的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要角色，但其在乳腺癌中的表達及對乳腺癌發(fā)生發(fā)展的影響尚未見相關(guān)報道。本實驗利用實時熒光定量PCR和WESTERNBLOTTING技術(shù)分別檢測乳腺癌癌組織、癌旁組織、乳腺癌細胞、正常乳腺細胞中CARD9MRNA和蛋白的表達情況，分析CARD9表達與乳腺癌患者臨床病理特征間的關(guān)系。通過WST1法、平板克隆形成實驗、流式細胞術(shù)、劃痕實驗研究CARD9高表達對乳腺癌細胞增殖、凋亡、周期、侵襲轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的影響。分析CARD9表達和NFΚB信號通路激活的相關(guān)性，初步探討CARD9在乳腺癌中的作用機制。結(jié)果表明乳腺癌組織中CARD9MRNA（P＜001）和蛋白（P0012）表達水平顯著高于癌旁組織；乳腺癌T47D細胞（P0021）和MCF7細胞（P0014）中CARD9MRNA表達水平高于正常乳腺細胞HS578BST；乳腺癌ZR751細胞中CARD9MRNA（P0003）和蛋白（P0015）表達水平均高于正常乳腺細胞HS578BST。CARD9蛋白表達與腫瘤大小和雌激素受體（ER）表達有關(guān)（P值均＜005）。CARD9高表達可促進乳腺癌細胞的增殖（P＜005），但對細胞凋亡、周期、侵襲和轉(zhuǎn)移未見顯著性影響。乳腺癌組織中P50（P＜005）和PIKK?。≒＜001）蛋白的表達水平高于癌旁組織，而且乳腺癌組織中CARD9MRNA表達與P50（R0622P＜0001）、P65（R0392P0005）、IL1Β（R0685P＜0001）和IL12（R0556P＜0001）MRNA表達間呈正相關(guān)。本實驗的研究結(jié)果揭示了CARD9在乳腺癌組織中的表達情況及其與乳腺癌臨床病理學(xué)的關(guān)系。同時發(fā)現(xiàn)，CRAD9很可能通過激活NFΚB信號通路促進乳腺癌細胞增殖從而參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展進程。這些研究結(jié)果有助于深入了解CRAD9在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及治療中的潛在價值，為CARD9成為乳腺癌新的治