基于化合物庫高通量篩選技術(shù)的東海海洋真菌100102A的研究.pdf

1、本論文通過三種生物模型測試方法進行中國東海海洋真菌活性菌株篩選，確定一株活性菌株100102A為研究對象，對其進行菌種鑒定，基于化合物庫高通量篩選方法，對海洋真菌100102A中的活性次級代謝產(chǎn)物進行篩選分離研究。本文主要得出如下結(jié)論:
　　(1)對來源于中國東海海域海水的10株海洋真菌進行體外抗氧化活性、抗腫瘤活性及胰蛋白酶抑制活性的篩選，篩選出2株具有較好生物活性的海洋真菌（2株菌株編號分別為:12010101和0801010

2、1），在濃度為2 mg·mL-1時，2株真菌對DPPH自由基的清除率均超過90％，對胰蛋白酶抑制活性超過45％;而當濃度為100μg·mL-1時，2株菌株對PC12、HepG2、U937腫瘤細胞的抑制率均高于90％。
　　(2)確定其中1株對U937腫瘤細胞具有高抑制活性的菌株100102A為研究對象，采用18sRNA菌種鑒定方法確定該菌株為分枝孢子菌屬真菌球孢枝孢（Cladosporium sphaerospermum）。

3、>　　(3)海洋真菌球孢枝孢（C.sphaerospermum）大規(guī)模發(fā)酵50 L，通過溶劑萃取法制備浸膏10 g。通過HPLC給出的化合物庫與抗氧化清除自由基DPPH活性和抗腫瘤活性比較分析，建立活性分子導向識別譜，首次對該菌株進行抗腫瘤活性成分的導向分離。
　　(4)依據(jù)活性分子導向識別譜，在最佳的HPLC條件下，采用制備色譜柱進行培養(yǎng)液中的微量活性成分的分離，最終從培養(yǎng)液浸膏中分離得到化合物1-7，分別鑒定為:3-異戊基六氫

4、吡咯并[1，2-a]吡嗪-1，4-二酮(1)、3-甲基-丁氧基苯(2)、6-羥基-5-癸酮(3)、4-丁基5,6-二氫-2-吡喃酮(4)、C18不飽和脂肪酸酯(5)、鄰苯二甲酸二異辛酯(6)、鄰苯二甲酸二丁酯(7)。其中化合物1-7均是首次從該真菌的次級代謝產(chǎn)物中分離得到，活性實驗表明化合物7對U937腫瘤細胞具有較好的抑制作用，IC50值為198±0.16μg·mL-1?；衔?、4、5也表現(xiàn)出較弱的抑制作用。此外化合物1-7均對DP