新型pH敏感金屬螯合親和沉淀劑的制備與應(yīng)用.pdf

1、在利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)生物醫(yī)藥蛋白的過(guò)程中，通常在目標(biāo)蛋白質(zhì)尾部添加一段(His)6標(biāo)簽，以便于利用固定化金屬離子親和色譜(IMAC)對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化。然而IMAC法存在操作復(fù)雜、成本高昂、不易放大等缺陷；因此，研究開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單實(shí)用的針對(duì)(His)6標(biāo)簽蛋白質(zhì)的分離純化方法一直是科學(xué)工作者的奮斗目標(biāo)。
　　 由于親和沉淀法具有操作簡(jiǎn)單、成本低廉和易放大等優(yōu)點(diǎn)，因此，本文以pH敏感型高分子Eudragit S-100為載體

2、，4-(咪唑-1-基)苯胺為螯合劑，Ni2+離子為親和配基，開(kāi)發(fā)了一種新型pH敏感金屬螯合親和沉淀劑--ES-IA-Ni2+，并以肌紅蛋白(Mb)為模型蛋白，系統(tǒng)地研究了該沉淀劑的分離純化效果。
　　 研究結(jié)果表明，沉淀劑ES-IA-Ni2+具有響應(yīng)速度快、沉淀性好和敏感條件溫和等優(yōu)點(diǎn)；同時(shí)，ES-IA-Ni2+中的Ni2+離子也具有相當(dāng)好的穩(wěn)定性，反復(fù)使用多次后，Ni2+離子的泄露比不及萬(wàn)分之一；ES-IA-Ni2+與Mb經(jīng)過(guò)

3、60 min的反應(yīng)后，Mb完全被ES-IA-Ni2+以配位作用吸附，形成Mb-ES-IA-Ni2+復(fù)合物，ES-IA-Ni2+對(duì)Mb的吸附容量約為0.7 mg Mb/g ES-IA-Ni2+；當(dāng)改變?nèi)芤旱膒H值時(shí)，Mb-ES-IA-Ni2+可以從溶液中完全沉淀出來(lái)；另外，比較ES-IA-Ni2+對(duì)Mb和溶菌酶(Lys)的分離效果發(fā)現(xiàn)，ES-IA-Ni2+能夠通過(guò)配位作用結(jié)合含His殘基較多的Mb，收率可達(dá)95％左右，而對(duì)含His殘基較少