利用細胞內鈣離子的濃度變化檢測乙酰膽堿.pdf

1、本論文共包括三部分內容： 前言部分首先對激光共聚焦熒光顯微鏡和落射熒光顯微鏡及其工作原理進行簡要介紹；然后介紹了細胞內的第二信使一鈣離子以及與之相關的鈣離子通道，著重介紹了受體門控的鈣通道、膽堿能受體及其效應機制；最后對乙酰膽堿及其檢測方法進行了總結和評述。 第一章采用激光誘導熒光的方法檢測鈣離子，選擇Fluo-3AM為鈣離子熒光探針，通過細胞內鈣離子的熒光強度變化檢測乙酰膽堿的含量。首先，鈣離子熒光探針在室溫下30 m

2、in負載，在細胞內酯酶的作用下脫掉乙酰甲酯變成Fluo-3，Fluo-3與細胞內游離的Ca<'2+>結合。用激光共聚焦顯微鏡連續(xù)掃描細胞，獲得加乙酰膽堿前后的熒光圖像。對圖像的分析結果說明乙酰膽堿能引起細胞內的鈣離子的濃度升高。用落射熒光顯微鏡確定檢測乙酰膽堿的最佳條件，用EMCCD獲得熒光圖像，數據結果由MateMorph軟件測量分析。濃度為5.0X10<'-13>～1.0X10<'-11>mol/L時，乙酰膽堿與熒光信號的增加值有較

3、好的線性關系，檢測限為3.2×10<'-13>mol/L。 第二章采用微流控分析芯片與單細胞分析相結合的方法檢測了乙酰膽堿的含量。通過模塑法制作了通道直徑為約100μm PDMS微流控芯片，利用微流控芯片單細胞進樣。選擇Fluo-3 AM為鈣離子熒光探針，乙酰膽堿刺激單個細胞。用落射熒光顯微鏡檢測了單個細胞內Ca<'2+>的熒光強度變化。當乙酰膽堿濃度為1.0x10<'-13>～3.0X10<'-11>mol/L時，檢測到的熒光