苯并咪唑衍生物BM935抑制T細(xì)胞增殖的效應(yīng)與機制研究.pdf

1、目的：探索苯并咪唑衍生物BM935抑制T細(xì)胞增殖的效應(yīng)與機制，為尋找BM935的作用靶點奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.使用MACS系統(tǒng)分離人和小鼠的CD3+T細(xì)胞，并通過流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光標(biāo)記的anti-CD3檢測T細(xì)胞純度。
　　2.流式細(xì)胞儀結(jié)合CFSE染色檢測絲裂原或anti-CD3/CD28刺激的人與小鼠T細(xì)胞增殖反應(yīng)。
　　3.流式細(xì)胞儀結(jié)合PI染色對活細(xì)胞進行絕對計數(shù)。
　　4.使用流式細(xì)胞儀

2、檢測T細(xì)胞的細(xì)胞周期和CD25表達(dá)。
　　5.ELISA檢測anti-CD3/CD28刺激的人T細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A和IFN-γ的含量。
　　6.采用IL-2長時間培養(yǎng)PBMC的方法，獲得高純度T細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測BM935對IL-2刺激T細(xì)胞增殖抑制作用。
　　7.Annexin和PI雙染色檢測凋亡和死亡的T細(xì)胞。
　　結(jié)果：
　　1.MACS方法分離的人

3、和小鼠的T細(xì)胞，純度大于95％。
　　2.BM935能有效抑制絲裂原或anti-CD3/CD28刺激的人與小鼠T細(xì)胞增殖反應(yīng)，IC50均在1-2μM之間。
　　3.BM935有效抑制T細(xì)胞增殖的濃度不影響人或鼠靜息T細(xì)胞存活。
　　4.BM935不抑制T細(xì)胞活化表達(dá)CD25,通過阻滯活化的T細(xì)胞周期在G0/G1期，從而抑制T細(xì)胞增殖。
　　5.BM935不抑制T細(xì)胞分泌IL-2、IL-4、IL-10，但抑制IFN

4、-γ、IL-6、IL-17A的分泌。
　　6.IL-2長時間培養(yǎng)PBMC，可得到純度大于95%的T細(xì)胞。BM935能有效抑制IL-2刺激的T細(xì)胞增殖。
　　7.高濃度BM935在抑制IL-2刺激的T細(xì)胞增殖的同時，不會促進T細(xì)胞發(fā)生凋亡，其凋亡和死亡細(xì)胞比例與多種對照藥物作用組無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　BM935對靜息T細(xì)胞沒有明顯的細(xì)胞毒性，能選擇性地抑制T細(xì)胞增殖。BM935不通過抑制T細(xì)胞活化或者誘導(dǎo)T