毛細管電泳中氨基酸、二肽類BCEOC衍生物的手性拆分.pdf

1、毛細管電泳是近年來迅速發(fā)展起來的一類分離分析技術(shù)，它具有高效、快速、樣品用量少等特點，能用于多種化合物的分離，如氨基酸、手性藥物、維生素、殺蟲劑、無機離子、有機酸、染料、肽和蛋白質(zhì)、甚至整個細胞和病毒顆粒。被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)藥物、環(huán)境科學(xué)、法醫(yī)科學(xué)等諸多領(lǐng)域。 在手性拆分方面，毛細管電泳作為一種強有力的手性分離技術(shù)，已經(jīng)成功的分離了多種類的手性物質(zhì)，尤其在氨基酸、肽的衍生物以及藥物的手性分離領(lǐng)域應(yīng)用最廣，顯示了

2、其獨特的優(yōu)勢。此外，電泳的方法開發(fā)較為簡單，具有多種靈活變換的分離模式，樣品用量少，而且?guī)缀鯖]有有機廢液。 在氨基酸和二肽類物質(zhì)的手性拆分研究領(lǐng)域，由于這些生物分子沒有或者僅有微弱的紫外吸收，直接紫外檢測滿足不了低含量組分測定的要求，化學(xué)衍生化法應(yīng)運而生。目前廣為應(yīng)用的衍生化試劑主要有鄰苯二甲醛(OPA)、9-芴甲氧羰基氯(FMOC-Cl)和6-氨基喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯(AQC)。但是這些衍生試劑本身的一些特性決定了其應(yīng)用的局

3、限性。為此，本研究采用新型衍生化試劑，改變被測化合物特性，進行了毛細管電泳的氨基酸和二肽對映體的手性拆分，結(jié)果令人滿意。論文分三章： 第一章： 簡單介紹了毛細管電泳的發(fā)展及其在醫(yī)學(xué)藥物、生命科學(xué)、生物技術(shù)、法醫(yī)科學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用情況。對手性拆分的意義和毛細管電泳手性拆分相關(guān)的基礎(chǔ)知識進行了簡述。綜述了毛細管電泳用于手性拆分的研究現(xiàn)狀。 第二章： 1，2-苯并-3，4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)

4、用于氨基酸毛細管電泳手性拆分，包括三部分。 2.1研究了毛細管區(qū)帶電泳模式下氨基酸BCEOC衍生物的手性拆分情況。在毛細管區(qū)帶電泳模式下，考察并優(yōu)化了氨基酸BCEOC衍生物的手性分離條件，在15min內(nèi)實現(xiàn)了七種單一氨基酸衍生物的對映體的基線分離，分離度均在1.2以上。所建立的方法簡單、快速，拆分環(huán)境友好，獲得的結(jié)果較為滿意。 2.2采用毛細管電泳膠束電動色譜模式下實現(xiàn)了13種BCEOC-氨基酸衍生物的手性拆分，拆分環(huán)境

5、友好，獲得結(jié)果滿意。通過對緩沖溶液的濃度和pH值、膠束濃度、有機添加劑、電壓溫度等參數(shù)的選擇，得出了最佳的拆分條件，所有衍生物的手性分離度均在1.0以上。所建立的方法簡單、快速。 2.3進行了毛細管區(qū)帶電泳和膠束電動色譜模式下氨基酸衍生物的手性拆分的比較與總結(jié)。通過比較毛細管區(qū)帶電泳和膠束電動色譜兩種分離模式的異同點和兩種模式下氨基酸BCEOC衍生物的手性拆分的異同點，可以得出結(jié)論：膠束電動毛細管色譜模式下氨基酸對映體的分離度較

6、高，手性拆分效果要好。 第三章： 1，2-苯并-3，4-二氫咔唑-9-乙基氯甲酸酯(BCEOC)用于二肽毛細管電泳手性拆分，包括三部分。 3.1在毛細管區(qū)帶電泳模式下對二肽BCEOC衍生物進行了手性拆分。通過對拆分條件的優(yōu)化，得到最佳的手性拆分條件：60mmol/L三(羥甲基)胺基甲烷/磷酸(Tris-H3PO4)鹽緩沖溶液(含3％乙腈)，手性添加劑濃度分別為1.8mmol/Lβ-CD和2.4mmol/LSDC，

7、pH值為9.0，分離電壓15kV，柱溫為25℃。在最優(yōu)化的分離條件下，八種二肽衍生物均在15min內(nèi)出峰完畢，結(jié)果理想。 3.2研究了毛細管電泳膠束電動色譜模式下二肽BCEOC衍生物的手性拆分情況。通過對拆分條件的選擇和優(yōu)化，實現(xiàn)了15種二肽BCEOC衍生物的手性拆分，拆分環(huán)境友好，獲得結(jié)果滿意。所有衍生物的手性分離度在2.85(Gly-Trp)～35.29(Gly-Ser)之間。實驗建立的方法簡單快速，為以后進一步進行肽類物質(zhì)