人中心蛋白1的性質(zhì)研究.pdf

1、中心蛋白是EF-hand超家族蛋白成員之一，是一種分子量比較小(20kD)的、酸性鈣離子結(jié)合蛋白。最初，中心蛋白是在單細(xì)胞綠藻中作為纖維收縮的組成成分被發(fā)現(xiàn)的。后來(lái)，中心蛋白在許多真核生物中發(fā)現(xiàn)，包括高等植物、酵母、脊椎動(dòng)物和人類，在不同的細(xì)胞過程中，扮演著重要的角色。
　　人體中有四類不同的中心蛋白，分別為centrin1，centrin2，centrin3和centrin4(縮寫為HsCen1-HsCen4)，四種中心蛋白都與

2、視網(wǎng)膜相互連接的鞭毛相關(guān)，參與視力的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。但是四種中心蛋白仍有不同的功能，因此可能有不同的生物意義。本文在研究HsCen2的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究了HsCen1的如下性質(zhì):
　　首先，研究了HsCen1磷酸化前后與金屬Tb3+和Ca2+的相互結(jié)合:Ca2+與HsCen1的反應(yīng)為放熱、焓驅(qū)動(dòng)反應(yīng);Tb3+與HsCen1的反應(yīng)為吸熱、熵驅(qū)動(dòng)反應(yīng);每摩爾HsCen1可以結(jié)合4摩爾Tb3+，蛋白與Tb3+結(jié)合順序?yàn)棰簦劲螅劲瘢劲?。HsCe

3、n1磷酸化后減弱了與Ca2+和Tb3+的結(jié)合，結(jié)合常數(shù)減小。
　　HsCen1結(jié)合金屬離子后，構(gòu)象改變。HsCen1磷酸化后引起的構(gòu)象變化減弱。
　　其次，通過共振光散射光譜法研究了HsCen1的聚集及其影響因素。結(jié)果表明:金屬離子可以誘導(dǎo)HsCen1聚集，而且Tb3+引起的聚集明顯強(qiáng)于Ca2+引起的聚集;HsCen1濃度、不同稀土離子、離子強(qiáng)度以及TNS等都可以影響HsCen1的聚集:HsCen1的聚集程度與蛋白本身的濃度

4、呈正相關(guān);隨著金屬離子的半徑增大，金屬離子引起蛋白的聚集減弱;隨著KCl鹽濃度的增大，Tb3+引起的HsCen1聚集減弱;隨著TNS與HsCen1比例的增加，Tb3+引起的HsCen1聚集減弱。HsCen1磷酸化后，HsCen1的聚集程度減弱，HsCen1聚集可能是由疏水作用和靜電作用共同調(diào)控的。
　　最后，通過等溫滴定量熱法和熒光發(fā)射光譜法研究了HsCen1磷酸化前后與R18-Sfi1的相互作用。結(jié)果表明:二者之間是焓驅(qū)動(dòng)的放熱