蓮藕采后主要腐敗菌的分離鑒定及空氣放電對其抑菌機理的研究.pdf

1、空氣放電主要應用在果蔬保鮮上，通過抑制微生物的生長繁殖降低果蔬的腐敗率，然而對空氣放電抑菌機理的研究卻不甚明了。本課題對模擬冷鏈運輸蓮藕上的腐敗菌進行分離純化、鑒定并以采后蓮藕上的主要腐敗菌之一尖孢鐮刀菌為研究對象，從菌絲、孢子的生長及其超微結(jié)構(gòu)的變化、細胞表面電荷的變化、細胞壁中幾丁質(zhì)和殼聚糖的變化、細胞膜中脂肪酸的變化、降解植物細胞壁酶活性變化等方面來研究空氣放電對尖孢鐮刀菌的抑菌機理。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)對模擬冷鏈

2、運輸上的采后蓮藕腐敗菌進行分離純化，結(jié)合形態(tài)學和分子生物學鑒定，確定尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）和茄病鐮刀菌(Fusarium solani)為采后蓮藕主要腐敗菌。
　　(2)空氣放電對尖孢鐮刀菌孢子萌發(fā)和菌絲生長都有顯著的抑制作用，且抑菌效果與處理時間與呈正相關(guān)，處理時間越長，菌絲的生長速度越慢，孢子的萌發(fā)率越低;通過掃描電鏡和透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)空氣放電處理后的菌絲體干癟褶皺且表面粗糙，外層結(jié)構(gòu)不完整，對照組

3、菌絲光滑，粗細均勻一致，無褶皺，同時空氣放電處理后的菌絲細胞和孢子細胞形態(tài)不規(guī)則，細胞壁內(nèi)陷或者突起，細胞壁厚薄不均勻，細胞內(nèi)線粒體較對照組顯著減少，出現(xiàn)大量液泡且液泡體積較大，細胞質(zhì)失去緊致結(jié)構(gòu)，對照組孢子細胞形態(tài)正常，呈橢圓形，細胞壁厚薄均勻，細胞質(zhì)較為緊致;利用AO/EB熒光染料標記孢子細胞，得到空氣放電處理后的孢子細胞出現(xiàn)凋亡，且臭氧和負離子（ozone+NAI）處理后的孢子凋亡率顯著高于臭氧(ozone)和負離子(NAI)單獨

4、作用。
　　(3)利用zeta電位儀測定孢子細胞表面電勢，得到孢子細胞表面電勢為負值，即孢子細胞表面負電荷占優(yōu)勢，空氣放電處理后zeta電勢增加，ozone+NAI處理組孢子細胞表面的負電荷最少，其次是ozone處理和NAI處理組。結(jié)合激光共聚焦技術(shù)，將表面帶正電荷的CdSe/ZnS殼核式量子點標記細胞表面電荷，未處理組孢子細胞表面負電荷標記的量子點熒光強度整體較強，表面負電荷分布均勻，空氣放電處理組量子點分布不均勻，熒光強度整體

5、較弱，局部化分布明顯。
　　(4)結(jié)合分光光度法、紅外分析法、X-射線衍射法、元素分析法得到，空氣放電處理后細胞壁通透性增大，幾丁質(zhì)酶活升高，且ozone+NAI處理組顯著高于ozone和NAI單獨處理組;通過掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)對照組幾丁質(zhì)分子結(jié)構(gòu)緊實，呈片狀或塊狀堆積，表面形態(tài)光滑，無明顯的塊狀分散顆粒，空氣放電處理后的幾丁質(zhì)分子結(jié)構(gòu)松散，有大量的碎屑顆粒分子存在，對照組殼聚糖分子顆粒呈明顯的塊狀分布，表面較為粗糙，有許多碎屑顆粒

6、分子附著在塊狀顆粒表面，空氣放電處理后的殼聚糖分子顆粒更為分散，無大型塊狀顆粒分子存在，表面更加粗糙;紅外分析后發(fā)現(xiàn)空氣放電對幾丁質(zhì)和殼聚糖官能團位置無顯著影響，但增加了殼聚糖的脫乙酰度;空氣放電處理后幾丁質(zhì)的結(jié)晶度較未處理組顯著增高，殼聚糖的結(jié)晶度降低;幾丁質(zhì)和殼聚糖的C/N比率降低，其中ozone+NAI處理組C/N比率最小，其次為NAI和ozone單獨處理組，未處理組C/N比率顯著高于處理組。
　　(5)采用分光光度法得到空

7、氣放電顯著提高了細胞膜通透性;未處理組麥角固醇含量顯著高于空氣放電處理組，其中ozone、NAI單獨處理組麥角固醇含量顯著高于ozone+NAI處理組;采用氣相色譜對細胞膜脂肪酸進行分析，得到飽和脂肪酸:空氣放電處理組肉豆蔻酸、十五烷酸、花生酸、山崳酸、二十三烷酸、木蠟酸含量增加，棕櫚酸、二十一烷酸含量減少; ozone處理組珍珠酸含量增加，NAI和ozone+NAI處理組珍珠酸含量減少;硬脂酸含量無顯著變化。不飽和脂肪酸:空氣放電處理

8、組棕櫚油酸、花生一烯酸、順芥子酸含量增加，亞油酸含量減少，油酸含量無顯著變化?？諝夥烹娞幚砗蟛伙柡椭舅崤c飽和脂肪酸比值與未處理組相比顯著降低，ozone+NAI處理組顯著低于ozone、NAI單獨處理組。
　　(6)空氣放電對尖孢鐮刀菌產(chǎn)生的細胞壁降解酶活性有顯著的抑制效果，且ozone+NAI處理組較ozone和NAI單獨處理組抑制效果更為顯著。其中木聚糖酶活性與處理時間呈負相關(guān)，隨著處理時間的增加酶活性逐漸降低，纖維素酶（羧