阪崎克羅諾桿菌的檢測及耐酸機(jī)制研究.pdf

1、阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）是一種可以在人及動(dòng)物腸道內(nèi)寄生生存的革蘭陰性菌，該菌可以引發(fā)新生兒腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等嚴(yán)重疾病，且感染后死亡率高達(dá)40％-80％，引起全球的廣泛關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)，感染來源主要是受阪崎腸桿菌污染的奶粉，而克羅諾桿菌的傳統(tǒng)分離方法存在一定的缺陷，高效的生物學(xué)及分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展則對克羅諾桿菌菌種的檢測和分型以及預(yù)防和治療阪崎克羅諾桿菌的感染具有重要意義。食源性致病菌的

2、耐酸特性也是其發(fā)揮其致病性的關(guān)鍵前提條件之一。目前，國內(nèi)對其酸脅迫應(yīng)答機(jī)制研究還鮮有報(bào)道。
　　本文首先通過添加萬古霉素、5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷、頭孢菌素和蔗糖等物質(zhì)建立了一種優(yōu)于DFI(Druggan-Forsythe-Iversen)和改良月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯(mLST)的克羅諾桿菌分離方法，該方法、DFI和mLST方法對克羅諾桿菌的靈敏度分別為100％、87.5％和87.5％;而特異性分別為88.8％

3、、77.7％和87.5％。然后，基于TaqⅠ單酶切g(shù)luB基因片段進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析，建立一種能鑒定克羅諾桿菌的同時(shí)還可以快速、準(zhǔn)確地區(qū)分都柏林克羅諾桿菌（Cronobacter dublinensis），丙二酸鹽陽性克羅諾桿菌（Cronobactermalonaticus），穆汀斯克羅諾菌（Cronobacter muytjensii）和阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）的種間特異性分子

4、分型靶標(biāo)技術(shù)。最后，本文探索性通過菌體接合方法成功建立了阪崎克羅諾桿菌的基因敲除方法，獲得外膜蛋白OmpW突變株△OmpW和谷氧還蛋白GrxB突變株△GrxB，并通過耐酸性、形態(tài)特征和生物膜相關(guān)指標(biāo)變化初步探討OmpW、 GrxB在阪崎克羅諾桿菌中耐酸變化中的作用，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)基因與該菌的耐酸性有關(guān)，為進(jìn)一步開展OmpW、GrxB在該菌致病中的作用機(jī)制提供參考數(shù)據(jù)。
　　本研究的開展將為防控阪崎克羅諾桿菌生物污染及保障食品安全奠定基