奶粉加工過程阪崎腸桿菌危害關(guān)鍵點分析及控制.pdf

1、阪崎腸桿菌（Cronobacter sakazakii）是以動物和人類作為宿主寄生的革蘭氏陰性細(xì)菌，可引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎，菌血癥和壞死性小腸結(jié)腸炎，該菌感染引起的死亡率在50％以上。嬰兒配方奶粉被認(rèn)為是新生兒C.sakazakii感染的主要渠道，因此對奶粉廠C.sakazakii的溯源和有效控制是奶粉廠亟待解決的問題，對保障奶粉的質(zhì)量安全具有重要的實際意義。
　　為分析奶粉工廠可能的C.sakazakii污染來源，并針對不同環(huán)

2、節(jié)特點設(shè)計有效的處理措施。本課題分析了奶粉生產(chǎn)加工過程可能污染C.sakazakii的環(huán)節(jié)并采集樣品進(jìn)行C.sakazakii檢測、16SrDNA基因序列分析不同來源C.sakazakii的同源性，比較不同來源菌株在不同溫度條件下、不同清洗條件下生存能力，利用ERIC-PCR方法建立指紋圖譜比較四株C.sakazakii基因組重復(fù)序列之間差異性。
　　結(jié)果表明，從奶粉工廠各環(huán)節(jié)進(jìn)行采樣，共23處，利用國標(biāo)和常規(guī)PCR兩種方法檢測，

3、在其中8處有菌存在，并確定3株為C.sakazakii。利用16SrDNA方法對C.sakazakiiE(ATCC29544)、分離自成品一段奶粉中的C，sakazakii A、分離自回收細(xì)粉中的C.sakazakii H、分離自地漏中的C.sakazakii D四株C.sakazakii進(jìn)行測序，結(jié)果顯示C.sakazakii A與C.sakazakii H的同源性最高。將四株C.sakazakii分別在4℃、25℃、37℃、44℃、

4、55℃、72℃下培養(yǎng)，結(jié)果顯示C.sakazakii在4℃下菌落總數(shù)幾乎沒有變化，25℃下菌落總數(shù)略有增加，37℃為C.sakazakii最適生長溫度，44℃下C.sakazakii表現(xiàn)出不同的熱抗性，C.sakazakii雖然具有一定的熱抗性，但是在55℃下菌落總數(shù)有明顯減少，并且無法在72℃及其以上溫度下存活。將四株C.sakazakii分別利用1.5％氫氧化鈉、1.5％硝酸、75％酒精、1.5％洗衣粉、1.5％SDS及1.5％過氧

5、乙酸處理，結(jié)果顯示1.5％過氧乙酸的殺菌效果最好，1.5％氫氧化鈉、1.5％硝酸和75％酒精的效果次之，而1.5％洗衣粉和1.5％SDS對C.sakazakii幾乎沒有效果。利用ERIC-PCR方法建立指紋圖譜比較四株C.sakazakii之間的差異性，結(jié)果顯示分離自地漏中的C.sakazakiiD與其它三株菌的差異較大。
　　通過試驗得出以下結(jié)論:
　　(1)工廠采樣分離出的不同來源C.sakazakii通過16SrDNA

6、測序，建立系統(tǒng)發(fā)育樹發(fā)現(xiàn)，四株不同來源的C.sakazakii在基因序列上存在差異，分離自問題桶裝嬰兒配方奶粉中的C.sakazakiiA與分離自回收細(xì)粉中的C.sakazakii H在系統(tǒng)發(fā)育樹的同一支上，說明A與H的同源性最高。為了確定基因序列上的差異在四株C.sakazakii表型性質(zhì)上的差異，通過在不同溫度、不同清洗劑處理，四株C.sakazakii也表現(xiàn)出差異，分離自回收細(xì)粉的C.sakazakiiH與分離自地漏的C.saka