miR-26b和GP73聯(lián)合檢測在肝細(xì)胞肝癌診斷中的價值.pdf

1、背景和目的：
　　肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是常見的一種惡性程度高、進(jìn)展速度快、容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、預(yù)后極差的惡性腫瘤。長期以來，由于缺乏比較有效的早期診斷指標(biāo)，大多數(shù)肝癌在確診時已處于中、晚期，預(yù)后較差，因此，尋求一些敏感的檢測方法提高早期肝癌的檢出率至關(guān)重要。近年來的研究發(fā)現(xiàn)了很多新的原發(fā)性肝癌血清標(biāo)志物，并有希望成為其理想的早期診斷指標(biāo)。甲胎蛋白(alphafetoprotein，AFP)是

2、當(dāng)前在臨床上應(yīng)用最普遍的肝癌診斷血清標(biāo)志物之一，但AFP診斷肝癌仍然存在著一定的局限性，因?yàn)榧s40％的肝癌病患血清中的AFP水平處于低值甚至不表達(dá)，這大大的影響了 AFP在診斷 HCC過程中的臨床價值。我們課題組成員在前期對于miR-26b的研究中發(fā)現(xiàn)，其在肝癌組織中表達(dá)顯著下調(diào)，并且與肝癌的增殖及侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，但是miR-26在外周血中的表達(dá)及能否用于肝癌早期的檢測尚需進(jìn)一步的驗(yàn)證。高爾基糖蛋白-73(Golgiprotein，GP7

3、3)是一類高爾基Ⅱ型跨膜蛋白，主要在膽管的上皮細(xì)胞中表達(dá)，而正常肝細(xì)胞中很少甚至不表達(dá)，在急慢性肝炎或者肝纖維化時，GP73在肝細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯上升，而進(jìn)展至肝硬化時其表達(dá)又進(jìn)一步提高，發(fā)展到肝癌時，GP73的表達(dá)可達(dá)到高峰。本研究著重探討循環(huán) miR-26b、GP73和AFP在正常人、肝炎及肝硬化患者與肝癌患者外周血中的表達(dá)情況，并分析其作為肝癌的診斷標(biāo)志物的靈敏度和特異度，采用AFP、miR-26、GP73聯(lián)合檢測，以期提高HC

4、C診斷的敏感度和陽性檢出率，分析其作為分子標(biāo)志物對肝癌作早期診斷的價值。
　　方法:
　　1.本研究將實(shí)驗(yàn)分成4個組，包括肝細(xì)胞癌組50例、肝硬化組40例、慢性肝炎組45例和健康對照組50例。采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)法檢測各組人群全血中miR-26b的表達(dá)水平。
　　2.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法定量測定各組血清中 GP73的含量，化學(xué)發(fā)光方法定量測定AFP的含量。
　　3.應(yīng)用

5、受試者工作特征曲線(ROC曲線)分析并確定外周血中的miR-26、GP73和AFP診斷HCC的最佳截斷值(cutoff值)，并利用ROC曲線評價miR-26、GP73和AFP三者單獨(dú)及聯(lián)合檢測（miR-26+GP73、miR-26+AFP、GP73+AFP、miR-26+GP73+AFP）對早期診斷HCC的價值。
　　結(jié)果:
　　1.與肝硬化組、慢性肝炎組和健康對照組相比，miR-26b在肝癌患者外周血中呈低水平表達(dá)，差異有

6、統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；肝硬化組、慢性肝炎組與健康對照組間兩兩對比，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。
　　2. HCC組患者血清 GP73的水平[234.58(166.50-309.49)ng/ml)]顯著高于肝炎肝硬化組[133.25(46.50-146.60)ng/ml]、慢性肝炎對照組[141.01(82.77-149.56)ng/ml]及健康對照組[43.50(37.06-49.63)ng/ml],差異有統(tǒng)計學(xué)意義

7、(P＜0.05）；肝硬化組跟慢性肝炎組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。
　　3. ROC曲線分析顯示外周血miR-26b區(qū)分肝癌與肝硬化組、慢性肝炎組、健康對照組的ROC曲線下面積(AUC)為0.936,最佳截斷值（cutoff value）為0.888，診斷敏感度和特異度分別為92%和87.5%；GP73診斷HCC的AUC為0.913，cutoff值為144.82ng/ml，靈敏度和特異性分別為84.0％和77.0％；A

8、FP診斷 HCC的AUC為0.718,最佳截斷值為27.99ng/ml，敏感度與特異度分別為62.0%和68.9%。miR-26b的敏感性，特異度最高，其AUC最大。
　　4.在28例血清 AFP呈低濃度（AFP＜400 ng/ml）的HCC患者中，miR-26b檢出陽性(cutoff值≤0.888)的患者有24例，占AFP低濃度的HCC患者的85.7%（24/28）；GP73檢出陽性(GP73≥150ng/ml)的患者有16例，

9、占AFP低濃度的HCC患者的57.1％（16/28）。miR-26b、GP73的陽性檢出率要遠(yuǎn)高于AFP(P＜0.01)。
　　5.以GP73≥150ng/ml，AFP≥400ng/ml作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，miR-26b、GP73對HCC診斷的靈敏度分別為86.0%、74.0%，明顯優(yōu)于AFP(44.0％)(P＜0.01)，特異度要較AFP差。根據(jù)ROC曲線來觀察各標(biāo)志物對HCC的診斷，miR-26b、GP73與AFP的曲線下面積有顯著

10、性的差異（P＜0.05）。
　　6. miR-26b、GP73對肝細(xì)胞癌的診斷效能優(yōu)于AFP，在特異性提高的同時能在一定程度上降低 AFP的漏診率，有望成為新的肝癌血清學(xué)標(biāo)記物。miR-26b、GP73、AFP三者聯(lián)合進(jìn)行檢測能提高HCC早期診斷的準(zhǔn)確性。
　　結(jié)論:
　　1、肝細(xì)胞癌患者外周血中的miR-26b表達(dá)降低，血液中miR-26b可能作為一種新型肝細(xì)胞癌診斷的分子標(biāo)志物，聯(lián)合血清中AFP進(jìn)行檢測對診斷HCC