2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、轉錄因子在植物生長發(fā)育的各個階段都發(fā)揮著重要的作用,并參與多種激素的信號轉導。蘋果MdHB1是HD-Zip轉錄因子家族的一員。本試驗以課題組前期得到的MdHB1過表達煙草‘NC89’植株和病毒誘導基因沉默(Virus-induced gene silencing,VIGS)處理的‘澳洲青萍’(Granny Smith)果實為試驗材料,從轉錄水平和激素水平研究了MdHB1對于赤霉素合成代謝的影響;在這過程中,我們在大腸桿菌中原核表達得到了

2、MdHB1的融合蛋白,以此為抗原通過新西蘭兔的免疫制備了MdHB1的多克隆抗體。試驗結果如下:
  (1)將實驗室前期克隆的MdHB1基因分別連接到pGEX-6p-1和pET-28a(+)兩個表達載體上,轉化大腸桿菌感受態(tài)BL21(DE3),在異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導下,表達得到了帶有GST和6×His標簽的融合蛋白(分別命名為MdHB1-GST和MdHB1-His6)。Ni-NTA純化的融合蛋白MdHB1-H

3、is6為抗原經(jīng)成年兔免疫以制備多克隆抗體;經(jīng)間距酶聯(lián)免疫法(ELASA)檢測,所得抗體效價較高;蛋白質免疫印跡試驗(Western blot)說明所制備多克隆抗體不僅能從菌體總蛋白中特異性識別MdHB1,也能從蘋果幼葉總蛋白中成功檢測MdHB1蛋白;表明本實驗所得多克隆抗體能夠用于進一步的蛋白研究,深入挖掘MdHB1在植物體內的功能。
  (2)Western blot試驗說明,赤霉素合成抑制劑多效唑(Paclobutrazol,

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