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文檔簡介
1、乳腺癌作為威脅女性健康最為常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率在中國上升趨勢明顯。乳腺癌細胞的生長特性是:能無限生長、具有轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移能力。因此對乳腺癌進行增殖、轉(zhuǎn)移等作用機制進行深入研究,為腫瘤治療方案及臨床耐藥提供新的靶點。
選擇性剪接是指將同一種前體 mRNA剪接成多種不同的成熟 mRNA剪接變異體,進而產(chǎn)生結(jié)構和功能不同的蛋白質(zhì)的過程。mRNA的選擇性剪接是真核生物產(chǎn)生蛋白質(zhì)多樣性與基因表達復雜性的主要原因。研究發(fā)現(xiàn),在多種動物
2、組織中,至少90%蛋白編碼基因存在選擇性剪接現(xiàn)象。選擇性剪接導致了蛋白質(zhì)的多樣性,與多細胞動物細胞增殖、分化和死亡密切相關。研究選擇性剪接的發(fā)生機制、調(diào)控以及相應蛋白異構體的功能對于腫瘤的診斷和治療具有重要的意義。
上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是指上皮類型細胞丟失上皮特性如細胞與細胞之間的相互作用等現(xiàn)象,同時獲得了間質(zhì)表型如細胞移動能力增強。EMT在胚胎的正常發(fā)育
3、和組織器官的分化過程中扮演著重要的角色。EMT對胚胎的著床、原腸胚的形成、傷口愈合、組織再生和器官纖維化等生理和病理過程有重要作用,近年來研究認為 EMT是導致惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移尤其是腫瘤細胞發(fā)生侵襲行為的重要分子機制。
轉(zhuǎn)錄因子 FOXM1是叉頭框(Forkhead box)家族成員,被發(fā)現(xiàn)在多種類型腫瘤中都存在高表達,如乳腺癌、肺癌等。研究證實 FOXM1在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起到了至關重要的作用,因而它也被認為是預防腫瘤
4、發(fā)生和腫瘤治療的潛在靶基因。
目的:探究轉(zhuǎn)錄因子FOXM1不同的剪接異構體對乳腺癌EMT過程中的影響。
方法:采用基因工程方法分別構建了表達 FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP兩種 FOXM1剪接異構體真核表達質(zhì)粒,并將其轉(zhuǎn)染進乳腺癌細胞,采用RT-PCR和Western印跡檢測細胞樣本中FOXM1剪接異構體的表達和EMT相關基因表達,同時采用transwell檢測高表達不同F(xiàn)OXM1剪接異構體細胞的侵襲
5、和遷移能力。
結(jié)果:成功構建了FOXM1B-EGFP和FOXM1C-EGFP真核表達質(zhì)粒。外源FOXM1B在乳腺癌間質(zhì)型細胞的表達高于上皮型細胞,并主要存在于細胞核內(nèi),且高表達FOXM1B能夠顯著促進乳腺癌細胞的侵襲和EMT過程。外源FOXM1C在乳腺癌上皮型細胞中的表達高于間質(zhì)型細胞,并且在細胞核和細胞質(zhì)中均有表達,高表達FOXM1C能夠顯著抑制細胞的侵襲和EMT過程。
結(jié)論:乳腺癌細胞中,F(xiàn)OXM1B主要存在于細
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