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文檔簡介
1、纖維素類物質(zhì)和木聚糖是自然界中最廉價(jià)、最豐富的可再生資源,葡聚糖酶和木聚糖酶是降解它們最關(guān)鍵的酶類。為了利用豐富的纖維素資源和木聚糖資源,就必須獲得性質(zhì)優(yōu)良的葡聚糖酶和木聚糖酶。真菌來源的糖苷水解酶61家族(GH61)和木聚糖酶是目前纖維素酶和半纖維素酶研究的主要部分。
本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對葡萄穗霉的全基因組進(jìn)行了測序,并對部分基因進(jìn)行了功能注釋,為本實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)首先從葡萄穗霉中挖掘可能的葡聚糖酶GH61家族和木聚糖酶的基
2、因:gh2990、xya6205和xya4063,并根據(jù)其基因序列分別設(shè)計(jì)了引物,以葡萄穗霉基因組DNA為模板,通過PCR技術(shù)分別擴(kuò)增到長度為1353bp、1699bp和753bp的片段,將片段克隆連接到穿梭載體pGAMDm上,結(jié)果表明,獲得的片段為需要的目的基因。最后通過原生質(zhì)體-PEG轉(zhuǎn)化到黑曲霉G1上,SDS-PAGE結(jié)果顯示,2種基因均能夠重組表達(dá),外源蛋白的分子量分別為48kDa和25kDa,與預(yù)期大小相符。將得到的目的轉(zhuǎn)化子
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