一株許氏平鲉腸道乳酸菌的分離鑒定、特性分析及其應(yīng)用研究.pdf

1、乳酸菌具有廣譜、高效、穩(wěn)定、安全的特點(diǎn)，可以通過(guò)產(chǎn)生有機(jī)酸、過(guò)氧化氫和細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)抑制病原菌的生長(zhǎng)，加強(qiáng)宿主機(jī)體腸道微生物的屏障作用，間接提高宿主非特異性免疫力，從而提高動(dòng)物的健康水平和抗病力。許氏平鲉(Sebastes schlegelii)是我國(guó)黃渤海區(qū)域習(xí)見的魚類之一，因其肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、抗逆性強(qiáng)、生長(zhǎng)迅速，已成為北方沿海網(wǎng)箱養(yǎng)殖和人工放流的重要經(jīng)濟(jì)魚類。本研究首次從野生許氏平鲉腸道內(nèi)分離獲得了一株乳酸菌，采用16S rD

2、NA基因序列分析法對(duì)其進(jìn)行了分類鑒定，并對(duì)其生長(zhǎng)特性、抑菌特性、動(dòng)物安全性及其應(yīng)用進(jìn)行了研究，初步分析了該乳酸菌對(duì)許氏平鲉生長(zhǎng)和抗病力的影響，旨在篩選能夠提高許氏平鲉抗病力、促進(jìn)其生長(zhǎng)的乳酸菌，為研發(fā)適用于許氏平鲉養(yǎng)殖業(yè)的微生態(tài)制劑奠定基礎(chǔ)，從而為其進(jìn)一步應(yīng)用于海水養(yǎng)殖中提供理論依據(jù)。
　　1.許氏平鲉腸道乳酸菌的分離和鑒定
　　本研究自野生許氏平鲉腸道內(nèi)共分離出35株細(xì)菌，從中篩選出1株乳酸菌YH1,其菌落呈白色、圓形、表

3、面光滑、邊緣圓潤(rùn)，革蘭氏染色呈陽(yáng)性，且可發(fā)酵脫脂乳產(chǎn)生凝固、無(wú)氣泡、呈酸性現(xiàn)象，基于生理生化特征和16s rDNA序列鑒定乳酸菌YH1為食竇魏斯氏菌。掃描電鏡下乳酸菌YH1細(xì)胞形狀規(guī)則,呈桿狀,無(wú)鞭毛,表面較光滑,長(zhǎng)度約為1.87μm。
　　2.食竇魏斯氏菌YH1的特性研究
　　本研究分析了酸堿度、溫度和NaCl含量對(duì)食竇魏斯氏菌YH1生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明YH1適宜的生長(zhǎng)條件為pH5.7—8.8、溫度20—40℃，最適生長(zhǎng)條

4、件為pH7.2—8.4，溫度35℃，在MRS培養(yǎng)基中添加NaCl會(huì)抑制YH1的生長(zhǎng)。選取多種病原指示菌以瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定YH1培養(yǎng)12h產(chǎn)物的抑菌活性，結(jié)果顯示YH1的無(wú)菌培養(yǎng)產(chǎn)物可顯著抑制金黃色葡萄球菌、嗜水氣單胞菌、大腸桿菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、遲鈍愛德華氏菌、鰻弧菌、假交替單胞菌、哈維氏弧菌等病原指示菌的生長(zhǎng)，表明YH1具有廣譜抑菌性。將YH1代謝產(chǎn)物經(jīng)酸處理、熱處理和酶處理后，比較對(duì)鰻弧菌、假交替單胞菌和哈維氏弧菌的抑菌圈大小，

5、初步探究了食竇魏斯氏菌YH1產(chǎn)物的抑菌作用機(jī)理，結(jié)果表明YH1代謝產(chǎn)物的抑菌性可能是由酸性物質(zhì)、過(guò)氧化氫或細(xì)菌素類物質(zhì)導(dǎo)致的。采用肌肉注射和腹腔注射兩種方式對(duì)YH1的動(dòng)物安全性進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示以108CFU/mL YH1注射許氏平鲉并未引發(fā)魚體發(fā)病或死亡，表明YH1在108CFU/mL及以下濃度對(duì)許氏平鲉是相對(duì)安全的。
　　3.食竇魏斯氏菌YH1用于許氏平鲉養(yǎng)殖的初步研究
　　通過(guò)投喂含有105CFU/g食竇魏斯氏菌YH1

6、的飼料56天，研究了YH1對(duì)許氏平鲉生長(zhǎng)的影響，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組許氏平鲉的增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料效率均高于對(duì)照組，表明乳酸菌YH1可促進(jìn)許氏平鲉的生長(zhǎng)。投喂試驗(yàn)結(jié)束后，使用鰻弧菌感染實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組許氏平鲉，觀察各組許氏平鲉的存活狀況，檢測(cè)各組許氏平鲉肝臟清除病原菌的能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組的魚體未引發(fā)死亡，對(duì)照組的魚體12天后全部死亡；鰻弧菌侵染后7天，實(shí)驗(yàn)組的許氏平鲉單個(gè)肝臟上細(xì)菌的數(shù)量顯著低于對(duì)照組的。這表明投喂乳酸菌YH1可以提