康氏木霉水解纖維素相關(guān)酶組分分離純化及酶學(xué)性質(zhì)研究.pdf

1、纖維素是自然界中存儲(chǔ)量最大的生物質(zhì)能源，由于近年來能源的短缺以及煤炭、石油等化石燃料的不完全燃燒產(chǎn)生大量有害氣體造成的空氣污染，使生物質(zhì)能源的轉(zhuǎn)化以及纖維素酶系的研究越來越重要。在可降解纖維素的真菌中，木霉屬真菌是可高效降解纖維素的胞外酶的最好來源。
　　本文選取康氏木霉GIMP3.444為生產(chǎn)菌種，研究康氏木霉發(fā)酵產(chǎn)物中降解纖維素的相關(guān)酶系。通過(NH4)2SO4分級(jí)沉淀、DEAESepharose FF陰離子交換層析，主要酶組

2、分得以初步分開;再利用FPLC系統(tǒng)，對(duì)初步分開的各個(gè)部分通過Sephadex G-75凝膠過濾層析進(jìn)一步分離純化，并對(duì)純化得到的酶組分進(jìn)行相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)測定。結(jié)果如下:
　　(1)得到了一個(gè)幾丁質(zhì)酶，SDS-PAGE電泳鑒定為電泳純，測得相對(duì)分子質(zhì)量為44.6 kDa。該酶即可以降解膠體幾丁質(zhì)，產(chǎn)生N-乙酰氨基葡萄糖，也能以CMC-Na為底物，產(chǎn)生還原糖，是一種雙功能酶。以羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)為底物時(shí)，酶的比活力為19.6

3、5IU·mg-1。最適反應(yīng)pH為4.5，最適反應(yīng)溫度為55℃，Km為7.22 mg/ml。不同金屬離子對(duì)酶活性影響不同，其中Ca2+對(duì)酶的抑制作用較強(qiáng)，抑制了近35％的活力。以膠體幾丁質(zhì)為底物時(shí)，酶比活力為33.42IU·mg-1，最適反應(yīng)pH為4.0，最適反應(yīng)溫度為50℃，Cu2+、MR2+、Zn2+對(duì)酶活力都有很大程度地抑制作用，酶的米氏常數(shù)為0.60mg/mL。
　　(2)得到一個(gè)51 kDa的蛋白，MALDI-TOFMS鑒