纖維素酶系中內(nèi)切β-葡聚糖苷酶的分離純化及酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、本文利用本實(shí)驗(yàn)室篩選的綠色木霉MJ1固體發(fā)酵產(chǎn)物，采用硫酸銨分級沉淀、SephadexG-100凝膠柱層析、DEAE FF弱陰離子交換柱層析（快速蛋白液相色譜系統(tǒng)(FPLC)）一系列分離純化技術(shù)分離純化出一單一組分－內(nèi)切β-葡聚糖苷酶，經(jīng)SDS-PAGE電泳分析表明該內(nèi)切酶的相對分子量約為64.7KD。 分離純化出的內(nèi)切β-葡聚糖苷酶的比活力提高了28.6倍，回收率為19.7％。酶學(xué)試驗(yàn)研究表明：該酶的最適反應(yīng)溫度53℃，最適p

2、H為4.2，Lineweaver-Burk法求得動力學(xué)參數(shù)，Km和Vmax分別為1.230×10<'2>g／mL、2.396×10<'-2>mg／（mL·min）。 在一系列假設(shè)基礎(chǔ)上提出綠色木霉產(chǎn)纖維素酶水解CMC-Na的反應(yīng)機(jī)理，對“三狀態(tài)”動力學(xué)模型進(jìn)行改進(jìn)，建立了pH值對纖維素酶活力影響的動力學(xué)模型，并推導(dǎo)出反應(yīng)速率表達(dá)式。L-B作圖法求得木霉產(chǎn)纖維素酶水解CMC-Na在不同pH的動力學(xué)參數(shù)：Km＇和Vmax＇，試驗(yàn)得到