瑞士乳桿菌 CQC-1 和鼠李糖乳桿菌 CQC-1 混合培養(yǎng)條件的優(yōu)化及微生態(tài)制劑的制備和耐受性評價.pdf

1、鼠李糖乳桿菌和瑞士乳桿菌作為益生菌具有多種益生功能，被廣泛地應(yīng)用于食品、藥品的生產(chǎn)使用當(dāng)中。在生產(chǎn)過程中益生菌的存活率會受到高溫處理、機(jī)械加工等外部環(huán)境的影響而導(dǎo)致存活率降低，為了使兩株菌的存活率得到提高，將兩株菌進(jìn)行混合培養(yǎng)。并對混合培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，得到最適培養(yǎng)基；利用最適培養(yǎng)基培養(yǎng)兩株菌并對培養(yǎng)后的菌液進(jìn)行離心，在一定的離心轉(zhuǎn)速和時間下對菌泥進(jìn)行收集，通過真空冷凍干燥法，制備微生態(tài)制劑，并對冷凍干燥過程中凍干保護(hù)劑進(jìn)行優(yōu)化；制備的

2、微生態(tài)制劑在4℃和常溫（25℃）下進(jìn)行貯藏期以及耐酸性、耐膽汁的研究。主要研究內(nèi)容如下：
　　1、研究不同培養(yǎng)溫度、接種比例、接種量、接種時間差、培養(yǎng)液初始 pH、碳源、氮源、增殖因子（番茄汁、胡蘿卜汁、香菇汁以及啤酒汁）對兩株菌混合培養(yǎng)的影響。通過對培養(yǎng)溫度、接種比例、接種量、接種時間差、培養(yǎng)液初始pH值進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)分析以及碳源、氮源優(yōu)化過程中的單一變量分析，確定最適增菌培養(yǎng)基。
　　（1）培養(yǎng)條件的優(yōu)化：通過單因素實(shí)驗(yàn)以

3、及正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究了兩株菌在MRS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中接種量、接種比例、接種時間差、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)液初始pH對混合菌存活率的影響。結(jié)果表明兩株菌存活率最高的條件為，接種量為6％且接種比例為瑞士乳桿菌：鼠李糖乳桿菌=1:2；接種時間差為3 h；培養(yǎng)溫度為37℃；培養(yǎng)液初始pH值為6.8。
　?。?）碳源、氮源的優(yōu)化：兩株菌按照瑞士乳桿菌：鼠李糖乳桿菌=1:2的接種比例，以6%的接種量，分別接到以葡萄糖、乳糖、麥芽糖、乳糖：葡萄糖=1:1、麥

4、芽糖：葡萄糖=1:1為碳源的 MRS培養(yǎng)基中，結(jié)果表明混合菌在以麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基中的生長較好，葡萄糖次之。
　　以同樣的接種方法接種到以大豆蛋白胨、蛋白胨、胰蛋白胨、酪蛋白胨為有機(jī)氮源的MRS培養(yǎng)基中，兩株混合菌在以大豆蛋白胨為有機(jī)氮源的培養(yǎng)基中的生長較其他的有機(jī)氮源存活率更高。
　　（3）增殖因子的優(yōu)化：兩株菌以瑞士乳桿菌：鼠李糖乳桿菌=1:2的比例、6%的接種量接種到含有番茄汁、胡蘿卜汁、香菇汁、啤酒汁的MRS液體培

5、養(yǎng)基中，在37℃下培養(yǎng)24 h。并對菌液進(jìn)行涂布計(jì)數(shù)，并通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)得出各增值因子最適添加量。結(jié)果為番茄汁添加量為4%、胡蘿卜汁添加量為2%、香菇汁添加量為8%、啤酒汁添加量為5%，此時，兩株混合菌的活菌數(shù)為8.7×10? cfu/mL，而在不含增殖因子的培養(yǎng)基中兩株混合菌的活菌數(shù)為4.9×10? cfu/mL，增殖因子的增殖效果比較顯著。
　　2、研究兩株菌混合培養(yǎng)后菌液離心條件的優(yōu)化以及菌泥在冷凍干燥過程中凍干保護(hù)劑的優(yōu)化

6、。菌液離心條件主要對菌液的離心轉(zhuǎn)速和離心時間進(jìn)行優(yōu)化，并對收集的菌泥進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果為最佳的離心轉(zhuǎn)速6000 r/min、離心時間為15 min，在最佳的離心轉(zhuǎn)速和離心時間下菌泥中菌的存活率為77.45%；對收集的菌泥在進(jìn)行真空冷凍干燥過程中對冷凍干燥保護(hù)劑的種類以及添加量進(jìn)行優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)選取了六種凍干保護(hù)劑，分別為脫脂奶粉、B-環(huán)糊精、海藻糖、蔗糖、甘油、L-谷氨酸鈉，通過進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，得出最佳的凍干保護(hù)劑為脫脂奶粉、海藻糖、甘油，并對

7、這三種凍干保護(hù)劑進(jìn)行響應(yīng)面分析實(shí)驗(yàn)，結(jié)果為脫脂奶粉添加量為14%、海藻糖添加量為6%、甘油添加量為4%。
　　3、研究了微生態(tài)在模擬人工胃液和腸液中耐受性以及微生態(tài)制劑在4℃和常溫（25℃）下兩種溫度的貯藏穩(wěn)定性。微生態(tài)制劑在經(jīng)過人工胃液環(huán)境下2 h后，微生態(tài)制劑的存活率仍然能夠達(dá)到73%。在人工模擬小腸高膽汁鹽的環(huán)境下2 h后，微生態(tài)制劑的存活率仍達(dá)到75%，通過冷凍干燥制備的微生態(tài)制劑在儲藏期內(nèi)可以耐受胃腸道中高酸性以及高膽汁