NO信號上調人肝細胞內源FⅧ的表達.pdf

1、目的：
　　通過對人永生化正常肝細胞LO2中凝血因子VIII（coagulation factor VIII,FVIII）啟動子區(qū)域組蛋白乙?；腿ヒ阴；难芯?，探索NO信號激活LO2細胞中FVIII高表達的分子機制。
　　方法：
　　建立L-精氨酸激活人肝細胞L02內源凝血因子FVIII高表達的分子細胞模型。取對數(shù)生長期人類永生化肝細胞LO2隨機分為：對照組和L-精氨酸組、組蛋白乙?；种苿┙M和組蛋白去乙酰化抑制劑組

2、。L-精氨酸組（L-精氨酸的終濃度10mM），對照組用同等體積的PBS取代L-精氨酸，組蛋白乙?；种苿┙M（C646的終濃度25uM），組蛋白去乙?；种苿┙M（SAHA的終濃度50nM），分別培養(yǎng)0h、12h、24h、36h、48h、60h。用RT-PCR方法檢測各組中人FVIII基因的轉錄水平。用染色質免疫共沉淀（ChIP）分別檢測對照組，L-精氨酸組，組蛋白乙酰化抑制劑組，組蛋白去乙酰化抑制劑組FVIII基因啟動子區(qū)域組蛋白乙?；?/p>

3、平。構建核轉錄因子（Nuclear factor kB,NF-kB1） flag標簽質粒，轉染LO2細胞。用ChIP檢測NF-kB1與FVIII基因啟動子區(qū)域轉錄因子結合位點的結合能力。
　　結果：
　　RT-PCR結果顯示L-精氨酸組和組蛋白去乙?；种苿┙M中FVIII基因表達上調，正常組和組蛋白乙?；种苿┙M中FVIII基因為本底表達。ChIP檢測到L-精氨酸組和組蛋白去乙?；种苿┙M比正常組和組蛋白乙?；种苿┙M中NF

4、-kB1與FVIII基因啟動子區(qū)域轉錄因子結合位點的結合能力強，ChIP檢測到對照組和組蛋白乙酰化抑制劑組FVIII基因啟動子區(qū)域組蛋白乙?；綖楸镜妆磉_，L-精氨酸組和組蛋白去乙酰化抑制劑組FVIII基因啟動子區(qū)域組蛋白乙?；教岣?。
　　結論：
　　上述研究表明組蛋白乙酰化抑制劑能取消LO2細胞中內源人FVIII基因的上調，而組蛋白去乙?；种苿┠軈f(xié)同LO2細胞中內源人FVIII基因的上調。NO信號在LO2細胞中通過