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1、DNA(脫氧核糖核酸),是生物體遺傳信息的攜帶者。近年的研究發(fā)現(xiàn),帶有遺傳信息的DNA片段的異常表達與疾病和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。傳統(tǒng)方法檢測DNA具有操作復(fù)雜、成本高、耗時長等局限性。因此,建立一種簡便、靈敏和特異的DNA定量檢測新方法具有十分重要的意義。本課題整合莖環(huán)自組裝擴增技術(shù)和酶催化信號放大策略,構(gòu)建了一種簡單的、等溫的電化學(xué)生物傳感器,實現(xiàn)了DNA的高靈敏和高特異檢測:首先,靶DNA通過堿基互補與生物素標(biāo)記的莖環(huán)H
2、1雜交,打開H1的莖環(huán)結(jié)構(gòu);隨后,打開的莖環(huán)H1與莖環(huán)H2雜交,將靶DNA置換下來,生成H1-H2復(fù)合物;被置換下來的靶DNA促發(fā)下一輪莖環(huán)自組裝擴增反應(yīng),生成大量的H1-H2復(fù)合物;最后,金電極表面固定的捕獲探針與H1-H2復(fù)合物特異性雜交,形成捕獲探針-H1-H2復(fù)合物。金電極表面形成的捕獲探針-H1-H2復(fù)合物上的生物素與鏈霉親和素標(biāo)記的堿性磷酸酶結(jié)合,催化底物α-萘磷酸鈉鹽產(chǎn)生電化學(xué)信號。為減少莖環(huán)之間的非特異性雜交反應(yīng),本研究
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