海星腦苷脂水解產(chǎn)物的分離純化及活性研究.pdf

1、本文以海燕內(nèi)臟為原料，采用石油醚-乙醇浸提法提取腦苷脂，將其進行皂化、水解后得到腦苷脂的水解產(chǎn)物，先后經(jīng)過硅膠柱層析、葡聚糖凝膠柱層析、制備薄層層析、半制備高效液相色譜等方法得到較純的物質(zhì)，對純化后的樣品進行結(jié)構(gòu)分析，并研究其生物活性。主要研究結(jié)果如下：
　　1、將海燕內(nèi)臟干粉通過石油醚、95％的乙醇室溫下浸提得到腦苷脂粗品，經(jīng)皂化、水解后得到了腦苷脂的水解產(chǎn)物，多次分離純化后得到了海燕腦苷脂和2個相對較純的腦苷脂水解產(chǎn)物樣品F1

2、和F2。
　　2、采用紅外光譜、高分辨質(zhì)譜對得到的腦苷脂及其水解產(chǎn)物進行結(jié)構(gòu)分析，提取出的腦苷脂含有C-H、表明酰胺鍵的C=O和N-H、C-O、-CH2-以及長脂肪鏈，其可能的相對分子質(zhì)量為790.6439,804.6601和818.6752，與之對應(yīng)的分子式為 C44H87O10N，C45H89O10N和C46H91O10N。腦苷脂水解產(chǎn)物結(jié)構(gòu)分析如下：樣品F1含有C-H、表明酰胺鍵的C=O和C=C、C-O、-CH2-結(jié)構(gòu)，樣品

3、F2與樣品F1含有官能團類似，不同之處在于F2含有N-H結(jié)構(gòu)。高分辨質(zhì)譜結(jié)果表明，樣品F1分子量為384，相應(yīng)的分子式為C22H40O5，樣品F2的分子量為412，相應(yīng)分子式為C21H36O6N2。
　　3、對分離得到的腦苷脂及腦苷脂水解產(chǎn)物（樣品F1和F2混合物，下同）進行抗氧化活性實驗，結(jié)果表明，水解產(chǎn)物樣品比腦苷脂具有更好的DPPH自由基和羥自由基的清除活性，還原力也強于水解產(chǎn)物。
　　4、腦苷脂及其水解產(chǎn)物對枯草芽孢

4、桿菌、變形桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和產(chǎn)氣桿菌5種指示菌均具有抑制作用，水解產(chǎn)物的抑菌作用高于腦苷脂的抑菌作用，且這兩種樣品對于供試菌種的抑制作用具有選擇性，腦苷脂對產(chǎn)氣桿菌的抑制作用最明顯，水解產(chǎn)物對金黃色葡萄球菌的抑制作用最強。
　　5、對腦苷脂及其水解產(chǎn)物樣品進行了ACE酶抑制活性檢測，結(jié)果顯示，當(dāng)樣品濃度很大時僅表現(xiàn)出較低的抑制活性，因此兩種樣品均沒有明顯的ACE酶抑制活性。
　　6、對腦苷脂及腦苷脂水解產(chǎn)物進行

5、體外抗腫瘤活性實驗。MTT實驗結(jié)果表明，在劑量為10~200μg/ml范圍內(nèi)，腦苷脂及其水解產(chǎn)物對MCF-7細(xì)胞、Hela細(xì)胞、HepG-2細(xì)胞、SW480細(xì)胞增殖均具有一定的抑制作用，表現(xiàn)出了明顯的時間、劑量依賴性，且腦苷脂水解產(chǎn)物的活性明顯好于腦苷脂。
　　7、在細(xì)胞周期及AV-PI雙染實驗中，腦苷脂可將MCF-7細(xì)胞阻滯于G2期，而腦苷脂水解產(chǎn)物可將MCF-7細(xì)胞阻滯于S期，引起細(xì)胞死亡；同時AV-PI雙染實驗中，大濃度的腦