海帶內(nèi)生菌DNN7蛋白的分離及抗腫瘤活性研究.pdf

1、海洋微生物能夠產(chǎn)生抗腫瘤活性代謝產(chǎn)物，但國(guó)內(nèi)外對(duì)海帶內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的研究報(bào)道卻很少，因此有必要對(duì)其進(jìn)行深入研究。
　　本文以海帶內(nèi)生菌DNN7粗蛋白為研究對(duì)象，采用DEAE52陰離子交換層析和Sephadex G-100分子篩凝膠層析進(jìn)行分離純化，對(duì)得到的組分進(jìn)行蛋白濃度測(cè)定、SDS-PAG電泳、MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜分析及抗腫瘤活性的檢測(cè)，主要研究結(jié)果如下：
　　1、經(jīng)DEAE52陰離子交換層析分離得到4個(gè)峰

2、，分別為P1、P2、P3和P4，其中，P3對(duì)5種指示菌的抑菌活性最好，其他峰的抑菌活性較弱；P1只得到兩條電泳條帶，其他3個(gè)峰的條帶比較多且復(fù)雜；對(duì)所有條帶進(jìn)行MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜分析，其中P1的第二條帶（約為33 kDa）在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)結(jié)果為蛋白酶E，P2的第一條帶（約為53 kDa）比對(duì)為與尾卷尺蛋白質(zhì)gp18，P3的第二條帶（約為70 kDa）比對(duì)為過(guò)氧化氫酶。
　　2、對(duì)P3進(jìn)行Sephadex G

3、-100分子篩凝膠層析分離得到3個(gè)峰，分別為P3-1、P3-2和P3-3；P3-3對(duì)5種指示菌具有較好的抑菌活性；P3-1得到4條帶，P3-2得到3條帶，P3-3只有單一條帶，但是小于蛋白Maker的最小分子量10 kDa，大約為8 kDa左右。通過(guò)MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜鑒定其精確分析分子量可能約為8826.8 Da，P3-3條帶酶解后經(jīng)質(zhì)譜鑒定在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中未能比對(duì)上已知蛋白，P3-3可能為新蛋白。
　　3、P