家蠶熱休克蛋白bmhsp21.4基因的研究

1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶熱休克蛋白Bmhsp21.4基因的研究姓名：張靜申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張耀洲20091201浙江理工大學碩士學位論文S t u d yo n h e a t s h o c k p r o t e i n 2 1 ．4g e n e o f B o m b y x m o r iA b s t r a c ts H S P s a r e s t r e s s - i n d

2、 u c i b l em o l e c u l a r c h a p e r o n e s t h a tr a n g ei ns i z ef r o m12t o4 3k D a n di n c l u d et h ea - c r y s t a l l i nd o m a i n c o n s i s t i n go f 8 0 - 1 0 0a m i n oa c i d s ．A c c o r d i

3、 n gt 0 i t s m o l e c u l a rw e i g h t s i z e a n d t h ef u n c t i o n , i tw a sd i v i d e d i n t o t h r e e f a m i l i e sg e n e r a l l y ：H S P 7 0 ，H S P 9 0a n ds m a l lm o l e c u l a rh e a ts h o c

4、kp r o t e i nf a m i l y ．T h es m a l lm o l e c u l a r h e a ts h o c kp r o t e i ni sa ne x t r e m e l y r i c hm u l t i p l ef a m i l y ，t h ed i f f e r e n tk i n d so f o r g a n i s m h a v e t h ed i f f e

5、 r e n t t y p e s ，t h em o l e c u l a r w e i g h ti n15 - 3 0k D ．W e c l o n ea s i l k w o r m p u p ac D N A s e q u n c e a n df o u n dt h a tt h ee D N A s e q u e n c e i sk n o w n a ss H S Po fB o m b y xm o

6、 r i w h i c hn a m e i sB m h s p 2 I ．4 ．n eg e n e c o n t a i n e da nO R F o f 5 6 4b p e n c o d i n g a p o l y p e p t i d eo f 18 7a m i n o a c i d sw i t l la p r e d i c t e dm o l e c u l a rm a s so f2 1 ．4

7、 k D a n da t h e o r e t i c a lp I o f 5 ．9 5 8 ．，n l e O R F o fB m h s p 2 1 ．4g e n eW a si n s e r t e d i n t o t h ep E T 一2 8 a ( + ) v e c t o ra n dc o n s t r u c t e dt h er e c o m b i n a n tp E T 一2 8 a (

8、 + ) -B m h s p 2 1 ．4 ，I P T G ( 1m M ) W a s a d d e d t ot h e c u l t u r em e d i u m t oi n d u c et h ee x p r e s s i o no f r e c o m b i n a n tp r o t e i n ．T h em o l e c u l a r w e i g h to f t h i sf u s

9、i o np r o t e i nw a s 2 4 ．8 6 2k D ．c h a r a c t e r i z e d b ym a s s - s p e c t r u m a f t e rb e i n g f u r t h e rp u r i f i e d o n 1 0 R I F P L C ．W e s u b j e c t e dt on i c k e la f f i n i t yc o l u

10、 m n c h r o m a t o g r a p h y t op u r i f yf u s i o n p r o t e i n ．I n o r d e r t o o b t a i n p o l y c l o n a l a n t i b o d y ，t h e p u r i f i e d f u s i o n p r o t e i n W a su s e d ．t oi m m u n i z

11、eam a l eN e w Z e a l a n dr a b b i t ．P r o t e i n s f r o mf a t t yb o d y ，t e s t e s ，e p i d e r m i s ，t r a c h e a , o v a r y , m a l p i g h i a nt u b u l e ，s i l k g l a n d s ，i n t e s t i n e ，h e a

12、d ，b l o o df r o mt h ef i f t hi n s t a rl a r v a ea n d d i f f e r e n ts t a g e so f s i l k w o r m w e r e e x t r a c t e da n da n a l y z e d b yW e s t e r nb l o a i n ga n dR T - P C R ．T h e r e s u l ts

13、 h o w e d t h a tB m H S P 2 1 ．4e x i s t e di na l o to f t i s s u e si nw h i c hh e a di s l o w ．W ec o m p a r e dt h e d e t e c t i o no fB m H S P 2 1 ．4 i n s o m ep o s t e r i o rd u r i n gt h e5 t h i n s

14、 t a ro fl a r v a e 、析t l ld i f f e r e n t h e a t —s h o c kt i m e ．H o w e v e r , u p o nh e a ts h o c k ，B m H S P 2 1 ．4 e x p r e s s i o n W a ss i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d a t 2 ．5 —3 h ．W e a

15、 l s oc o m p a r e dt h e d e t e c t i o no fB m H S P 2 1 ．4 i n s o m ep o s t e r i o rd u r i n gt h e5 t h i n s t a r o fl a r v a e 、析t hd i f f e r e n th e a t —s h o c kt e m p e r a t u r e ．W ef o u n dB m

16、H S P 2 1 ．4 e x p r e s s i o nW a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e da t4 0 “ C - 4 5 “ C ．F i n a l l y ，w eu s e da n t i - B m H S P 2 1 ．4a n t i b o d ya n de x a m i n e d t h e e f f e c t o f h e a t s

17、t r e s s o n l o c a l i z a t i o n o fB m H S P 2 1 ．4 b y i n d i r e c ti m m u n o f l u o r e s c e n c ea s s a y s ．B m H S P 2 1 ．4 c o u l d b ef o u n d i n b o t ht h en u c l e u sa n dc y t o p l a s m b u